遗传测序仪介绍

遗传测序仪介绍第一页，共六十九页，编辑于2023年，星期四AB遗传分析仪发展历史3703733773100(A),3130（xl）3103730(xl)平板胶电泳毛细管电泳3500,3500（xl）第二页，共六十九页，编辑于2023年，星期四1986年370型全世界第一台基因分析仪1991年373型基因分析仪1995年377型基因分析仪，光栅+CCD1996年310型毛细管基因分析仪,全世界第一台毛细管分析仪1997年377-96基因分析仪1998年3700型96道毛细管基因分析仪2000年310016道毛细管基因分析仪2002年3100Avant4道毛细管基因分析仪2002年373048道毛细管基因分析仪3730xl96道毛细管基因分析仪2004年31304道毛细管基因分析仪3130xl16道毛细管基因分析仪2007年10月新一代超高通量序列分析仪SOLID2009年3500系列毛细管基因分析仪2010年第三代测序仪IonTorrent第三页，共六十九页，编辑于2023年，星期四主要内容测序仪工作原理仪器的结构及DC软件应用第四页，共六十九页，编辑于2023年，星期四

测序仪工作原理第五页，共六十九页，编辑于2023年，星期四电进样DNA在碱性环境下带负电荷带负电荷的DNA在强电场作用下进入毛细管15kv仪器工作原理——电进样TRIVIA:电进样意味着什么?只有带电分子能够进入毛细管.第六页，共六十九页，编辑于2023年，星期四+仪器工作原理-通过毛细管电泳分离DNA片段H+H+H+H+H+H+H+H+H+H+负极正极TRIVIA:

什么样的片段泳动的更快?

-仪器能够区分带电的DNA和其他带电分子吗?小片段不第七页，共六十九页，编辑于2023年，星期四仪器工作原理

-荧光标记的DNA片段在检测窗口被检测双向激发第八页，共六十九页，编辑于2023年，星期四仪器工作原理

-激发出的荧光由于波长不同而被分离，并被CCD相机收集TRIVIA:什么是CCD?ChargedCoupledDevice电荷耦合器件CCD相机收集波长范围520nm到650nm（发射波长）虚拟的光栅设置氩离子激光，激发波长488nm，514nm.第九页，共六十九页，编辑于2023年，星期四仪器工作原理荧光标记的DNA在电场中由负极向正极移动,依次通过激光检测区,小片段在前,大片段在后激光束在检测窗口同时激发16/4根毛细管,荧光分子被激发,产生荧光信号发射的荧光信号被CCD相机收集软件将光学信号转化为电信号Laser

Energy

:CCDElectrophoresis+-dye第十页，共六十九页，编辑于2023年，星期四毛细管空间定位(SpatialCalibration)什么是空间定位？

–空间定位将标记出每道毛细管在CCD上的对应位置，使信号收集软件(DataCollection)能够找到它们。第十一页，共六十九页，编辑于2023年，星期四什么时候要做空间定位?毛细管安装完成后,包括重新安装用过的旧毛细管移动或调节了毛细管检测窗口的位置仪器移动后作为仪器日常维护的一部分怎么做?当仪器正常启动，毛细管已经安装在仪器上，仪器上的相应位置已经放置了胶、缓冲液和水；进入DataCollection软件，点击窗口左边的SpatialRunScheduler进入空间定位页面；在左下角Protocol中选择一种运行模式，有不灌胶和灌胶两种模式毛细管空间定位(SpatialCalibration)第十二页，共六十九页，编辑于2023年，星期四指标:峰高大致相同峰型尖锐、左右对称橙色十字在峰顶端间距:13-16空间定位——结果评估第十三页，共六十九页，编辑于2023年，星期四Clicktosavethecalibrationdatatothedatabase空间定位——结果评估第十四页，共六十九页，编辑于2023年，星期四Clickfor

anyfailedcalibration空间定位——结果评估第十五页，共六十九页，编辑于2023年，星期四如果空间定位失败怎么办?重复做一次空间定位若无效，观察系统中有无气泡，去除气泡后再定位若无效，重新安装毛细管的检测窗口，进行空间定位若无效，取下毛细管，用枪吸取无水甲醇冲洗毛细管检测窗口上的凹槽，待甲醇晾干后将毛细管装回，进行空间定位空间定位——结果评估第十六页，共六十九页，编辑于2023年，星期四问题可能的原因改进措施杂信号检测窗口脏毛细管位置不恰当清洁检测窗口重装毛细管间距不好检测窗口脏清洁检测窗口没有峰图毛细管里没有胶灌胶肩膀峰检测窗口脏清洁检测窗口空间定位——故障排除第十七页，共六十九页，编辑于2023年，星期四让机器认识纯荧光。每个染料都有自己的最大发射波长，但是不同染料之间有相互重叠的部分，重叠的部分通过光谱校正来识别。光谱校准——目的第十八页，共六十九页，编辑于2023年，星期四光谱重叠结果:光谱校正后光谱校准——目的第十九页，共六十九页，编辑于2023年，星期四多重颜色检测光谱校准——目的第二十页，共六十九页，编辑于2023年，星期四什么时候做?使用新的染料组合调整过仪器的光路系统不同颜色的荧光间出现干扰(有拔起或下压峰)参数改变(如毛细管长度改变)作为每年一次的日常维护怎么做?按照试剂盒说明书配制Matrix,对于8道或者24道的仪器,分别加第一个run的孔,每个孔加10µl配置好的混合物.在DataCollection窗口中操作光谱校准第二十一页，共六十九页，编辑于2023年，星期四概要仪器结构仪器耗材仪器开机样品检测流程及DC软件介绍仪器关机第二十二页，共六十九页，编辑于2023年，星期四电源开关自动进样器按纽内部照明灯开关状态灯仪器结构——外观网络插口断路开关电源插头第二十三页，共六十九页，编辑于2023年，星期四宽度：61cm深度：61cm高度：72cm重量：82kg

3500/3500xl基因分析仪3130/3130xl基因分析仪宽度：74cm深度：54.8cm高度：81cm重量：130kg

总体积3500是3130系列的82%（减少了18%）

总重量3500是3130系列的63%（减少了37%）仪器结构第二十四页，共六十九页，编辑于2023年，星期四通量增加特征/功能低通量

高通量

中通量最大样品处理数/天方便性应用可靠性性能3730

3100310高低3130xl31304896384191426763100

Avant192762115235003500xL第二十五页，共六十九页，编辑于2023年，星期四胶块区(Gelblockregion）检测区(Detectionregion）自动进样区(Autosamplerregion）第二十六页，共六十九页，编辑于2023年，星期四胶块区(Gelblockregion）胶袋第二十七页，共六十九页，编辑于2023年，星期四胶袋毛细管阵列炉子Oven检测窗口电极electrodes自动进样器Autosampler阳极bufferABC阴极bufferCBC样品托盘Sampletray风扇Fan第二十八页，共六十九页，编辑于2023年，星期四CBC–阴极缓冲液槽ABC–阳极缓冲液槽POP胶袋毛细管阵列仪器耗材第二十九页，共六十九页，编辑于2023年，星期四易于安装的毛细管结构易于安装的锁定装置易于存储过期日期内壁无涂层50µm内径160runs仪器耗材——毛细管第三十页，共六十九页，编辑于2023年，星期四仪器耗材——毛细管第三十一页，共六十九页，编辑于2023年，星期四仪器耗材——胶Additional“free”volumetoenableinstallation,wizardsandproperpouchfunctionality(andmaybeleftoverattheend)StandardvolumeForrunning960or384samplesProvides:EaseofuseQualityPredictablecostpersample第三十二页，共六十九页，编辑于2023年，星期四保存在冰箱冷藏室的中央使用前，放置在室温下>1hour在仪器上可放置1周不同仪器之间的胶袋不要交换使用，胶袋中的胶包括安装和安装后维护使用的部分，如排气泡.过量的维护操作会影响到跑样品使用的数量仪器耗材——胶的保存第三十三页，共六十九页，编辑于2023年，星期四PullLeverDownPullLeverUp仪器耗材——胶的安装第三十四页，共六十九页，编辑于2023年，星期四仪器耗材——缓冲液第三十五页，共六十九页，编辑于2023年，星期四Oninstrument:TwouniqueSeptasBufferWashWaste

一体化缓冲杯

迷宫般设计分离洗涤池和废液池确保缓冲液达到Fillline两种独立的胶垫Septa(availableinCBCseptakit)，注意胶垫安装

注意缓冲液放置的位置

在仪器上放置有效期7天

存储在冰箱冷藏，使用前恢复室温仪器耗材——阴极缓冲液第三十六页，共六十九页，编辑于2023年，星期四预装好的1xrunningbuffer1个包装4个易于安装放置在仪器上的有效使用期限为7天安装前确保溢杯中的缓冲液都流到主腔中确保主腔中的缓冲液达到Fillline存储在冰箱冷藏，使用前使之恢复室温RemovablesealOverflowchamber仪器耗材——阳极缓冲液第三十七页，共六十九页，编辑于2023年，星期四用途填充胶泵换胶时冲洗胶泵使用仪器长期关机时使用可供一次使用，足量仪器耗材——ConditioningReagent第三十八页，共六十九页，编辑于2023年，星期四耗材在仪器上的放置有效期On-instrumentRFIDtrackedlimitsConsumableShelflife(new)

Life

SampleUsageHardstop(cannotexceed)Warning(optiontoproceed)POP™Polymers

-960samplesizeExpirydateonlabel7daysLowerof960samplesOr50injections(24cap)Or120injections(8cap)Shelflifeexpiry,（DC2.0解除）Samples,injections7daylimit-384samplesizeExpirydateonlabel7daysLowerof384samplesOr20injections(24cap)Or60injections(8cap)Shelflifeexpiry（DC2.0解除）,Samples,injections7daylimitArraysExpirydateonlabelNA160injectionswarrantyNoneShelflifeexpiry,160injectionslimitBuffers(CBC&ABC)Expirydateonlabel7days50injections(24cap)or120injections(8cap)Shelflife,（DC2.0解除）On-instrumentNoneConditioningReagentExpirydateonlabel24hoursSingleuseShelflifeexpiry（DC2.0解除）24hrlimit第三十九页，共六十九页，编辑于2023年，星期四仪器开机打开电脑，至Ctrl+Alt+Del界面开启仪器，等待绿灯长亮Ctrl+Alt+Del，点击Administrator，输入密码Administrator电脑自动开启Daemon（DC2.0隐藏）和ServerMonitor打开电脑打开收集软件（DataCollection）第四十页，共六十九页，编辑于2023年，星期四快捷操作键耗材仪表盘——耗材量和有效期耗材详细信息仪器运行状态及预热键维护提示仪器开机第四十一页，共六十九页，编辑于2023年，星期四样品检测流程实验前准备：检查耗材和仪器设置/导入板子命名板子编板，完成信息选填配制上样试剂和样品链接样品盘运行过程中的质控PreviewrunMonitorrunReviewresults第四十二页，共六十九页，编辑于2023年，星期四样品检测流程——实验前准备1.准备仪器

——耗材有没有过期

——足够的buffer（在fillline上）2.预热炉温

3.查看仪器状态

——胶泵及通路中有没有气泡

——有无胶泄漏和析出的残胶第四十三页，共六十九页，编辑于2023年，星期四样品检测流程——创建电泳板第四十四页，共六十九页，编辑于2023年，星期四PlateProperties界面中给板命名第四十五页，共六十九页，编辑于2023年，星期四PlateContents界面中完成板内信息第四十六页，共六十九页，编辑于2023年，星期四样品检测流程——链接样品盘第四十七页，共六十九页，编辑于2023年，星期四样品检测流程——核查和编辑进样顺序表第四十八页，共六十九页，编辑于2023年，星期四InjectionDetailsSampleDetailsRawDataDisplay样品检测流程——实时监测第四十九页，共六十九页，编辑于2023年，星期四结果可能有问题哦样品检测流程——实时监测第五十页，共六十九页，编辑于2023年，星期四样品检测流程——查看电泳结果ViewFragement/HIDResults第五十一页，共六十九页，编辑于2023年，星期四仪器校准——在哪里找第五十二页，共六十九页，编辑于2023年，星期四空间定位PerformQCChecks.

仪器校准——空间定位第五十三页，共六十九页，编辑于2023年，星期四仪器校准——空间定位结果第五十四页，共六十九页，编辑于2023年，星期四步骤：配制光谱校正标准品：置于加样板第一个Run（非常重要！）上机检测标准品：填写几个电泳参数对结果接受or拒绝仪器校准——光谱校准第五十五页，共六十九页，编辑于2023年，星期四仪器校准——光谱校准第五十六页，共六十九页，编辑于2023年，星期四仪器校准——光谱校准结果第五十七页，共六十九页，编辑于2023年，星期四仪器校准——光谱校准结果第五十八页，共六十九页，编辑于2023年，星期四DatacollectionSoftware参数设置第五十九页，共六十九页，编辑于2023年，星期四参数设置——Library是什么？第六十页，共六十九页，编辑于2023年，星期四包括以下管理设置:PlatesAssaysFileNamingConventionResultsGroup不同的标志:

出厂设置—不能编辑/不能删除模板锁定可以基于出厂设置、模板和锁定的文件，点击Duplicate,编辑复制版theneditthecopy参数设置——Library是什么？第六十一页，共六十九页，编辑于2023年，星期四预置了HID相关文件:InstrumentProtocolsDyeSetsSizeStandardsQCProtocolsHIDAnalysisProtocols用户可以自己创建对应的分析文件参数设置——Library是什么？第六十二页，共六十九页，编辑于2023年，星期四Resultgrouplibrary•ResultsGroupName•AssayName•InjectionNumber•IPName(instrumentprotocol)•Logged-inUserName•PAProtocolName(primaryanalysis)•PlateName•Prefix•StartInstrumentRunDate/timeStamp•Suffix如何创建ResultGroup第六十三页，共六十九页，编辑于2023年，星期四举例第六十四页，共六十九页，编辑于2023年，星期四ResultGroupDefaults–Example2Thefactory-providedPN_RGresultsgroupcr