药理实验方法

经典word整理文档，仅参考，转Word此处可删除页眉页脚。本资料属于网络整理，如有侵权，请联系删除，谢谢！苯酞又名芹菜甲素，最初发现于芹菜籽中，其药效学特点涵盖了很多方面作用：1、能改善缺血脑能量代谢；2、明显缩小大鼠局部脑缺血脑梗塞面积，改善神、对缺血区局部脑血流和软脑膜微循环有明显改善作用；、能显著改善局部脑缺血引起的记忆障碍。在中国专利93117148.2人类脑缺血引起的疾病的药物中的应用。另外在中国专利03137457.3中，公开了L-苯酞在制备预防和治疗痴呆，尤其是阿尔茨海默病、血管性痴呆的药物中的应用。目前市场上已经有苯酞软胶囊、苯酞氯化钠注射液等产品上市。苯酞的化学结构式如式（1）：其光学活性化合物L-苯酞结构式如式（2）：2-中的主要成分，2-体、左旋异构体。其中，(+)-2-莰醇为天然冰片（右旋龙脑）主要成分，根据药典2010(+)-2-莰醇含量不少于96.0%(-)-2-莰醇为艾片（左旋龙脑）主要成分，根据药典（中华人民共和国《药典》2010年版一部）规定，在艾片（左旋龙脑）中(-)-2-莰醇含量不少于85.0%；(±)-2-莰醇为冰片（合成龙脑）主要成分，根据药典（中华人民共20102-莰醇含量不少于55.0%。应用。以下是苯酞或其光学活性化合物左旋丁基苯酞-莰醇或其光学活性化合物以及与天然冰片（右旋龙脑）、艾片（左旋龙脑）、冰片（合成龙脑）、分别组合的药用效果试验。试验1：对局灶性脑缺血再灌损伤的保护作用1.1材料与方法1.1.1实验动物Sprague-Dawley(SD)大鼠，雄性，清洁级，体重260-290g。1.1.2方法1.1.2.1脑缺血模型的制备采用颈内动脉线栓法制备大脑中动脉阻塞（Middlecerebralarteryocclusion，MCAO）脑缺血再灌注模型。动物用7%水合三氯乙醛（6ml/kg）麻醉后,俯卧位固定于手术台上，消毒皮肤，颈部正中切开，分离右侧颈总动脉、颈外动脉、颈内动脉，轻轻剥离迷走神经，结扎并剪断颈外动脉，循颈内动脉向前，结扎翼腭动脉。夹闭颈总动脉近心端，从颈外动脉的结扎线的远端作一切口，插入外径为0.285mm的尼龙线，进过颈总动脉分叉进入颈内动脉，然后徐徐插入至有轻20mm2h后，轻轻拔出尼龙线，恢复血供进行再灌注，缝合皮肤，消毒。1.1.2.2给药制备脑缺血模型后，将动物机率均等单盲分配至各组。动物于再灌注后立即静脉给药1次，模型组动物给予等体积的生理盐水。脑缺血后24小时评价神经缺陷症状，而后处死动物，取脑，染色，拍照测定脑梗死面积。1.1.2.3动物分组与给药剂量DL-丁苯酞组80mg/kg、L-丁苯酞40mg/kg、DL-丁苯酞/天然冰片（右旋龙脑）80mg/kg+8mg/kg、DL-丁苯酞艾片（左旋龙脑）80mg/kg+8mg/kg、DL-丁苯酞/冰片（合成龙脑）80mg/kg+8mg/kg、L-丁苯酞/天然冰片（右旋龙脑）80mg/kg+8mg/kg、L-丁苯酞艾片（左旋龙脑）80mg/kg+8mg/kg、L-丁苯酞/冰片（合成龙脑）80mg/kg+8mg/kg、DL-丁苯酞/(±)-2-莰醇组80g/kg+8mg/kg、DL-丁苯酞/（+)-2-莰醇组80mg/kg+8mg/kg、DL-丁苯酞/（-)-2-莰醇组80mg/kg+8mg/kg、L-丁苯酞/(±)-2-莰醇组40mg/kg+8mg/kg、L-丁苯酞/（+)-2-莰醇组40mg/kg+8mg/kg、L-丁苯酞/（-)-2-莰醇组40mg/kg+8mg/kg。1.1.2.4神经缺陷症状评分及脑梗死面积的测定采用改良Bederson5分制法进行神经缺陷症状评价。采用单盲法评价脑缺血后大鼠的神经缺陷症状，即由试验设计者将动物按组标记，对神经缺陷症状进行评分的试验者不知道动物的分组情况，评分结束后，评分者将各种标记的评分结果呈交设计者，由设计者揭盲，获得各试验组每只动物的评分。神经缺陷症状评分Bederson5分制法0：提尾悬空时，动物的两前肢均伸向地板方向，且无其他行为缺陷。1：提尾悬空时，动物的手术对（左）侧前肢表现为腕肘屈曲、肩内旋、肘外展、紧贴胸壁。2：将动物置于光滑平板上，推手术侧肩向对侧移动时阻力降低。3：动物自由行走时，向手术对侧环行或转圈。4：肢体软瘫,肢体无自发活动。脑梗死程度的测定，动物处死后，断头取脑，去除嗅球、小脑和低位脑干，用生理盐水冲洗大脑表面血迹，吸去表面残留水迹，于-20℃放置20min，取出后立2mm2%TTC37℃90min），正常脑组织染成深红色，缺血脑组织则呈苍白色，用照片用图像分析软件处理，根据公式计算左脑相应的体积以及梗死灶体积，求出梗死灶百分比。梗死体积计算法：V=t（A+A+A+........+A）123nt为切片厚度，A为梗死面积。%I=100%×（VC-VL）/VC%I为梗死体积百分比，VC为对照侧（左脑半球）脑体积，VL为梗死侧（右脑半球）非梗死区域体积。1.1.2.5统计学分析定量资料表示为均值±标准差。脑梗死面积和神经缺陷症状评分采用单因素方差分析，Scheffe's检验测定两组间的差异显著性。将差异P<0.05定义为差异显著。1.2实验结果1.2.1对神经缺陷症状的影响神经缺陷症状的程度：与模型组（神经缺陷症状评分：2.58±1.01）相比，各复方组均能显著改善神经缺陷症状，其中DL-丁苯酞/（-)-2-莰醇组、DL-丁苯酞/（+)-2-0.58±）、（0.61±）；L-丁苯酞/DL-丁苯酞/0.82±0.58*）、（0.83±0.42）。DL-丁苯酞组、L-丁苯酞与模型组比较，虽有改善神经缺陷症状的趋势，但未达到显著水平：（1.47±0.39*）、（1.42±0.55）。1.2.2对脑梗塞面积的影响对脑梗塞面积的影响：与模型组相比（脑梗面积（％）：36.9±14.8），各复方组组均能显著减小动物缺血再灌后脑梗塞面积，其中DL-丁苯酞/（-)-2-莰醇组、DL-丁苯酞/（+)-2-莰醇组效果最好，分别为（8.5±8.2*）、（8.9±7.2*）；L-丁苯酞/冰片（合成龙脑）组、DL-丁苯酞/冰片（合成龙脑）组在复方组中表现较差：（14.5±9.5*）、（1.53±6.4）。DL-丁苯酞组、L-丁苯酞与模型组比较，虽有减小脑梗面积的趋势，但未达到显著水平（24.1±12.3*）、（23.5±16.4）。实施例2：对东莨菪碱所致痴呆小鼠学习能力的影响2.1材料：药物：哈伯因（石杉碱甲片）。氢溴酸东莨菪碱注射液。健康清洁级ICR小鼠,5-6周龄,18～22g,雌雄各半。仪器：成都泰盟DT200小鼠跳台仪。2.2实验方法：动物分组与给药剂量哈伯因组66.67ug/kg、DL-丁苯酞组30mg/kg、L-丁苯酞15mg/kg、DL-丁苯酞/30mg/kg+3mg/kgDL-30mg/kg+3mg/kg、DL-丁苯酞/冰片（合成龙脑）30mg/kg+3mg/kg、L-丁苯酞/天然冰片（右旋龙脑）15mg/kg+3mg/kgL-丁苯酞艾片（左旋龙脑）15mg/kg+3mg/kgL-丁苯酞/冰片（合成龙脑）15mg/kg+3mg/kgDL-丁苯酞/(±)-2-莰醇组30mg/kg+3mg/kgDL-丁苯酞/（+)-2-莰醇组30mg/kg+3mg/kg、DL-丁苯酞/（-)-2-莰醇组30mg/kg+3mg/kg、L-丁苯酞/(±)-2-莰醇组15mg/kg+3mg/kg、L-丁苯酞/（+)-2-莰醇组15mg/kg+3mg/kg、L-丁苯酞/（-)-2-莰醇组15mg/kg+3mg/kg给药灌胃给药，每日一次，连续10天，对照组给予相同体积溶剂对照。观测的指标10cm*10cm*30cm分隔成为6间。底面为不锈钢网栅，网栅间距为0.5cm。每间左后角放置一高和直径4.5cm3min以32V电流。若动物跳下站台则受电击，其正常反应应该是跳回站台以躲避伤害性刺激，多数动物可能会再次或多次跳至网栅上，受到电击后又迅速跳回站台。本实验末次给药后1小时进行跳台训练，24小时后测试记忆成绩。模型组及各给药组于测试前30分钟腹腔注射东莨菪碱2mg/kg,小鼠面向墙角放置于站台上，观察并记录5分钟内小鼠跳下站台而遭受电击的次数和潜伏期。5min内未跳下的小鼠其跳台潜伏期按300s计算。统计方法所有数据用均数±标准差（±s）表示。采用SPSS软件，对符合正态分布的数据，均数比较用单因素方差分析，若方差齐，两两比较采用最小显著差法，若方差不齐则采用DunnettsT3检验行两两比较；如不符合正态分布，则用非参数检验KruskalWallis进行统计分析。2.3结果与空白对照组（潜伏期（s）：255.0±89.7、错误次数（次）：0.8±1.3）对比，模型组潜伏期明显缩短（50.6±43.1），错误次数明显增加（9.2±6.3）。哈123.1±113.23.2±2.2）。各复方组潜伏期均有不同程度的延长，错误次数也明显减少，均具有统计学差DL-丁苯酞（-)-2-s203.5±192.61.0±2.2）；、DL-丁苯酞/（+)-2-莰醇组（潜伏期（s）：204.2±175.6、错误次数（次）：1.1±2.0L-丁苯酞/DL-丁苯酞/冰片（合成龙脑）组在复方组中表现较差：（潜伏期（s）：160.0±、错误次数1.4±1.6s158.0±1.5±1.4DL-丁苯酞组、L-丁苯酞与模型组比较，虽有减小脑梗面积的趋势，但未达到显著s）：124.0±131.6、错误次数（次）：2.1±1.3s123.5±162.6、错误次数（次）：1.4±1.5）。小结：丁苯酞与左旋丁苯酞均有明显的缺血性脑卒中