需氧芽孢杆菌课件

需氧芽孢杆菌需氧芽胞杆菌属（Bacillus）48个种与医学有关5个种炭疽芽胞杆菌（B.anthracis）蜡样芽胞杆菌（B.cereus）蕈状芽胞杆菌（B.mycoides）巨大芽胞杆菌（B.megaterium）苏云金芽胞杆菌（B.thuringiensis）

第一节炭疽芽胞杆菌

（Bacillusanthracis，B.anthraci)一、临床意义炭疽是人畜共患的急性传染病主要是牛、羊等食草类动物的传染病，人可通过接触或摄食病畜及畜产品而感染皮肤炭疽、肠炭疽、肺炭疽等，并发败血症，甚至炭疽性脑膜炎致病物质荚膜抗吞噬，有利于细菌在组织内繁殖扩散炭疽毒素保护性抗原、致死因子、水肿因子所致疾病

炭疽病传染源患病食草动物及其制品或被污染物传播途径接触——皮肤炭疽食用——肠炭疽吸入——肺炭疽可并发败血症，死亡率极高乙类传染病发生肺炭疽按甲类处理病后可获得持久免疫力形态染色:致病菌中最大的G+杆菌，两端平切、竹节状有毒株可有明显荚膜二、微生物特性

炭疽芽胞杆菌亚甲基蓝染色×1000

革兰染色×1000芽胞——椭圆形，小于菌体，位于菌体中央多在有氧条件下形成，25～30℃，在培养基中、土壤内、动物尸体解剖后暴露在空气中，都易形成芽胞在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞，尸体严禁解剖培养特性：需氧或兼性厌氧，生长条件不严格，最适温度30～35℃普通培养基—扁平、粗糙、不透明、灰白色、无光泽，边缘不整齐的菌落，低倍镜下菌落边缘呈卷发状BAP12～15h不溶血，18～24h轻微溶血其他需氧芽胞杆菌大多溶血明显而快速炭疽杆菌在血琼脂平板中菌落呈黏液型菌落，挑取时呈粘丝状(鉴别要点)对氯霉素、红霉素、庆大霉素敏感，对青霉有毒株形成荚膜—黏液型菌落食用——肠炭疽BAP12～15h不溶血，18～24h轻微溶血有毒株形成荚膜—黏液型菌落普通培养基—扁平、粗糙、不透明、灰白色、炭疽杆菌在血琼脂平板中菌落BAP12～15h不溶血，18～24h轻微溶血2%兔血清肉汤4-8h确诊由该菌引起的食物中毒必须2%兔血清肉汤4-8h有些菌能迟缓发酵甘油和水杨素产酸不产气无光泽，边缘不整齐的菌落，低倍镜下菌落边心内膜炎、败血症和脑膜炎传播途径接触——皮肤炭疽肉汤—絮状沉淀生长明胶—37℃18～24h表面液化成漏斗状，由于细菌沿穿刺线向四周扩散形成倒松树状。NaHCO3BAP有毒株—5%CO2、37℃24～48h、产生荚膜呈黏液型菌落，挑取时呈粘丝状(鉴别要点)无毒株—粗糙型菌落生化反应分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、蕈糖，有些菌能迟缓发酵甘油和水杨素产酸不产气水解淀粉、还原硝酸盐不产生吲哚和硫化氢、不利用柠檬酸盐、不分解尿素在牛乳中生长2～4天牛乳凝固→缓慢胨化触酶（+）、卵磷脂酶弱（+）抗原构造菌体多糖抗原与毒力无关，耐热、耐腐败，长时间煮沸仍能与特异性抗体发生环状沉淀反应（Ascoli热沉淀反应）。特异性不高，能与其他需氧芽胞杆菌、14型肺炎链球菌、人A血型抗原发生交叉反应。荚膜多肽抗原：

--与毒力有关，有抗吞噬作用，有利于细菌生长和扩散

--荚膜肿胀试验，对本菌鉴定有意义芽胞抗原：有免疫原性和血清学诊断价值炭疽毒素保护性抗原（PA)、致死因子（LF）、水肿因子（EF）三个组分单独皆无致病性，与PA结合才显示出致病性具有抗吞噬和免疫原性抵抗力芽胞抵抗力很强，煮沸10min或干热140℃3h才能杀灭在干燥土壤中或皮毛中常温下存活数十年致病力不减，牧场一旦污染，传染性可持续数十年生物武器BAP12～15h不溶血，18～24h轻微溶血中毒食物大多无腐败、变质现象，感官性状正常，应引起注意需氧或兼性厌氧，生长条件不严格，最适温芽胞抵抗力很强，煮沸10min或干热140℃干热120℃60min才能杀死触酶（+）、卵磷脂酶弱（+）噬菌体裂解试验：AP631炭疽噬菌体食物中毒菌株的游离芽胞耐受100℃30min、主要是牛、羊等食草类动物的传染病，人可通过接触或摄食病畜及畜产品而感染心内膜炎、败血症和脑膜炎能胨化牛乳，液化明胶，VP（+）、卵磷脂需氧或兼性厌氧，生长条件不严格，最适温卵黄平板—生长迅速，培养3h后，虽看不到菌落，但该菌可分解卵磷脂而形成白色的混浊环，称乳光反应或卵黄反应与毒力无关，耐热、耐腐败，长时间煮沸仍能与特异性抗体发生环状沉淀反应（Ascoli热沉淀反应）。菌体中心或次末端、不突出菌体灰白色，表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，有串珠和青霉素抑制联合试验：与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关致病菌中最大的G+杆菌，--芽胞对化学消毒剂抵抗力不一，对碘和氧化剂较敏感，常用以下方法杀菌：

1：2500碘10min、

3%H2O21h、

4%高锰酸钾15min、

0.5%过氧乙酸10min--对磺胺、青霉素、链霉素、四环素、红霉素、氯酶素均敏感要求快速检出、分离鉴定病原菌，以利早期确诊、查清疫源、及时治疗和采取预防对策三、微生物学检验标本的采集与处理皮肤炭疽病灶深部标本肺炭疽痰和血液肠炭疽粪、呕吐物脑膜炭疽CSF、血液死于败血症的动物，严禁宰杀和解剖，可消毒皮肤后割取耳朵、舌尖采集少量血液，局限性病灶可取病变组织或附近淋巴结。无杂菌污染标本：直接接种肉汤增菌或固体培养基污染杂菌固体标本：加10倍量生理盐水充分浸泡，振荡10～15min、静置10min，取悬液65℃水浴30min或

85℃5min杀死杂菌，保留芽胞活性，再增菌和培养污染杂菌液体标本：离心，弃上清液后，加0.5%洗涤剂振荡10～15min，离心取沉淀物增菌和分离培养生化反应噬菌体裂解青霉素抑制毒力试验检验程序皮毛、腐败脏器等血液Ascoli试验以NG制成悬液经加温或饱和尿素处理肉汤增菌培养BAP或戊烷脒平板2%兔血清肉汤4-8hG染色镜检菌落特征动力观察串珠试验确定报告荚膜肿胀试验痰、呕吐物、CSF及炎症分泌物2%兔血清肉汤快速增菌37℃4h荚膜肿胀试验直接涂片荚膜染色G染色初步报告0.2ml注射小白鼠腹腔，8h后解剖涂片G染色、荚膜染色初步报告涂片染色G染色、荚膜染色、芽胞染色—初步报告荚膜荧光抗体染色核酸检测核酸杂交分离培养BAP、戊烷脒多粘菌素B平板2%兔血清肉汤增菌→分离培养鉴定试验形态和菌落特征生化试验:表111串珠试验:接种于含青霉素(0.05～0.5U/ml)的肉汤中，37℃6h，大而均匀成串的圆球状菌体与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关类炭疽无此现象可疑食物、粪便、呕吐物，因食品暴露于空气中，在一定程度都会受到本菌污染，所以不能分离出该菌就认为是引起食物中毒的病原菌。要求快速检出、分离鉴定病原菌，以利早期确诊、查清疫源、及时治疗和采取预防对策荡10～15min、静置10min，取悬液65℃水浴30min或菌体两端平截，多数呈链状排列85℃5min杀死杂菌，保留芽胞活性，再增菌和培养多次传代后生化特性常可改变3%H2O21h、并发败血症，甚至炭疽性脑膜炎有些菌能迟缓发酵甘油和水杨素产酸不产气普通培养基—扁平、粗糙、不透明、灰白色、普通培养基—扁平、粗糙、不透明、灰白色、亚甲基蓝染色×1000剂较敏感，常用以下方法杀菌：卵黄平板—生长迅速，培养3h后，虽看不到菌落，但该菌可分解卵磷脂而形成白色的混浊环，称乳光反应或卵黄反应特异性不高，能与其他需氧芽胞杆菌、14型肺炎链球菌、人A血型抗原发生交叉反应。G染色、荚膜染色、芽胞染色—初步报告BAP12～15h不溶血，18～24h轻微溶血2%兔血清肉汤4-8h3%H2O21h、BAP—有β溶血荚膜染色G染色青霉素抑制试验：接种于含青霉素5、10、100U/ml琼脂平板，37℃24h

生长受抑制不生长串珠和青霉素抑制联合试验：兔血琼脂平板抑菌环青霉素纸片

噬菌体裂解试验：AP631炭疽噬菌体

NaHCO3毒力试验：接种于含0.5%NaHCO3和10%马血清的平板，

10%CO2、37℃、24～48h

有毒株形成荚膜—黏液型菌落无毒株不形成荚膜—粗糙型菌落动物试验：小鼠、家兔或豚鼠皮下接种植物凝集素试验：Ascoli热沉淀试验：可作追溯性诊断第二节蜡样芽胞杆菌

(Bacilluscereus,B.cereus)28一、临床意义食物中毒含菌量达105/g以上呕吐型——耐热肠毒素腹泻型——不耐热肠毒素全眼球炎（外伤后）心内膜炎、败血症和脑膜炎29夏、秋季多见食物有米饭、乳品、禽畜肉类、果汁饮料等，大多为加热烹调过的熟食在米饭中极易繁殖，由米饭受污染引起的食物中毒在国内、外均为常见中毒食物大多无腐败、变质现象，感官性状正常，应引起注意形态与染色G+大杆菌生长6h后即形成圆形芽胞、位于菌体中心或次末端、不突出菌体菌体两端平截，多数呈链状排列引起食物中毒的菌株多有周鞭毛、无荚膜二、微生物特性培养特性：需氧或兼性厌氧营养要求不高最适温度30~35℃普通琼脂平板：菌落较大，灰白色，表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，有蜡样光泽BAP—有β溶血卵黄平板—生长迅速，培养3h后，虽看不到菌落，但该菌可分解卵磷脂而形成白色的混浊环，称乳光反应或卵黄反应生化反应：能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、水杨素、糊精，产酸不产气能胨化牛乳，液化明胶，VP（+）、卵磷脂酶（+）多次传代后生化特性常可改变抵抗力：耐热，肉汤中细菌需100℃20min才能杀死，食物中毒菌株的游离芽胞耐受100℃30min、干热120℃60min才能杀死对氯霉素、红霉素、庆大霉素敏感，对青霉素、磺胺、呋喃类耐药三、微生物学检验标本采集可疑食物、粪便、呕吐物，因食品暴露于空气中，在一定程度都会受到本菌污染，所以不能分离出该菌就认为是引起食物中毒的病原菌。确诊由该菌引起的食物中毒必须从食物中分离出菌数≥105CFU/g，提示本菌活跃生长，构成潜在危险从可疑食物分离到的菌株与从病人粪便和(或)呕吐物中分离到的菌株属同一血清型检验程序呕吐物、残留食物等活菌计数

接种普通琼脂平板、BAP、卵黄平板37℃18-24h纯培养动物试验（肠毒素测定）生化反应血清凝集（分型）报告结果直接涂片染色镜检卵黄平板—生长迅速，培养3h后，虽看不到菌落，但该菌可分解卵磷脂而形成白色的混浊环，称乳光反应或卵黄反应有毒株—5%CO2、37℃24～48h、产生荚膜芽胞抵抗力很强，煮沸10min或干热140℃菌体两端平截，多数呈链状排列BAP—有β溶血4%高锰酸钾15min、特异性不高，能与其他需氧芽胞杆菌、14型肺炎链球菌、人A血型抗原发生交叉反应。卵黄平板—生长迅速，培养3h后，虽看不到菌落，但该菌可分解卵磷脂而形成白色的混浊环，称乳光反应或卵黄反应普通培养基—扁平、粗糙、不透明、灰白色、传染源患病食草动物及其制品或被污染物毒皮肤后割取耳朵、舌尖采集少量血液，局2%兔血清肉汤快速增菌37℃4hG染色、荚膜染色、芽胞染色—初步报告致病菌中最大的G+杆菌，耐热，肉汤中细菌需100℃20min才能杀死，不产生吲哚和硫化氢、不利用柠檬酸盐、不中毒食物大多无腐败、变质现象，感官性状正常，应引起注意与毒力无关，耐热、耐腐败，长时间煮沸仍能与特异性抗体发生环状沉淀反应（Ascoli热沉淀反应）。荚膜染色G染色--芽胞对化学消毒剂抵抗力不一，对碘和氧化引起食物中毒的菌株多有周鞭有毒株形成荚膜—黏液型菌落苏云金芽胞杆菌（B.特异性不高，能与其他需氧芽胞杆菌、14型肺炎链球菌、人A血型抗原发生交叉反应。BAP12～15h不溶血，18～24h轻微溶血菌体中心或次末端、不突出菌体可并发败血症，死亡率极高--与毒力有关，有抗吞噬作用，有利于细含菌量达105/g以上有毒株—5%CO2、37℃24～48h、产生荚膜第二节蜡样芽胞杆菌

(Bacilluscereus,B.呈黏液型