精选抗体偶联药物讲义

（优选）抗体偶联药物当前第1页\共有25页\编于星期一\10点目录定义原理对Ag、Ab、连接子和药物分子的要求抗体的突变几种ADC定点偶联方法的比较连接方式ADC偶联比的测定方法上市的药品前景挑战当前第2页\共有25页\编于星期一\10点一、什么是ADC当前第3页\共有25页\编于星期一\10点二、原理当前第4页\共有25页\编于星期一\10点药物分子药物分子高毒性靶点分子量溶解度稳定性三、对抗体、药物、连接子、靶标和抗原的要求当前第5页\共有25页\编于星期一\10点药物分子药物分子高毒性靶点分子量溶解度稳定性因为IgG有限的肿瘤穿透能力、低抗原表达性、内化效率不足和连接子代谢，均可能使细胞内的毒素浓度降低。通常为IC50：当前第6页\共有25页\编于星期一\10点药物分子药物分子高毒性靶点分子量溶解度稳定性必须位于细胞内,若ADC无法转运至细胞内将严重影响药物的有效性和毒性。在细胞外还可能影响，药物解离后可能对旁边的正常细胞有害。当前第7页\共有25页\编于星期一\10点药物分子药物分子高毒性靶点分子量溶解度稳定性药物的分子量较小，从而减少发生免疫原性的风险；抗体的分子量也要很小，IgG抗体的分子量约为150kD，毛细管内皮层和细胞外间隙难以透过如此巨大的抗体或偶联分子，抗体的分子量太小，会影响其在体内的半衰期。当前第8页\共有25页\编于星期一\10点

药物分子药物分子高毒性靶点分子量溶解度稳定性应在水性缓冲溶液中具有适当的溶解度，以便于偶联抗体当前第9页\共有25页\编于星期一\10点药物分子药物分子高毒性靶点分子量溶解度稳定性负载应在血浆中具有充分的稳定性。当前第10页\共有25页\编于星期一\10点美登素类化合物1作用机制：通过抑制微管组装来抑制细胞的分裂2DM1临床研究发现：稳定、非裂解的硫醚键连接子（MCC)具有高效的疗效当前第11页\共有25页\编于星期一\10点毒素主要在细胞增殖过程中发挥作用，对其非分裂和静息的细胞没有作用01与分子的疏水性有关（连接子也是疏水性的：在血液或代谢器官（肝脏、肾脏）中意外释放游离型毒素可穿透细胞膜，并可能引起严重的副作用02耐药肿瘤细胞可能会限制ADC的活性（由药物转运蛋白表达或活性增加，加快疏水性化合物外排造成03作用微管的ADC药物的缺陷目前开发带有负电荷α-磺酸基或极性短PEG的高度水溶性亲水性连接子，以增加溶解性当前第12页\共有25页\编于星期一\10点14-Descriptionofthesubcontents1.在血浆中稳定，避免细胞毒素提前释放损伤正常的组织或细胞ptionofthesubcontents2.当ADCs被内吞到靶细胞后，能够快速释放药物（非必须）

-Descriptionofthesubcontents-Descriptionofthesubcontents3.抗体的连接位点和连接位点的数量要明确且合适

-Descriptionofthesubcontents-Descriptionofthesubcontents23

4.连接子的分子量和极性escriptionofthesubcontents-Descriptionofthesubcontents连接子5、亲和素和生物素能否作为连接臂？当前第13页\共有25页\编于星期一\10点③一定的内吞速率①抗原大量特异性的表达在靶细胞表面在正常组织或细胞表面不表达或少表达②抗原应尽量不分泌，因为分泌型抗原可与血液循环中抗体结合，从而导致与肿瘤细胞结合的抗体减少④有合适的内吞转运途径要求

理想化的抗原

当前第14页\共有25页\编于星期一\10点（四）理想化的抗体靶向功能，能够有效地将细胞毒分子输送到靶细胞；具有较低的免疫原性。具有合适的连接位点，偶联毒素后，不影响ADC的稳定性、亲和力、內吞及药效当前第15页\共有25页\编于星期一\10点

④与靶细胞表面的抗原结合后，能够诱导细胞进行内吞作用，进入胞内，最终进入溶酶体并导致细胞毒分子在胞内的有效释放；（内化-流式细胞术检测；细胞内化后定位检测-共聚焦显微镜）

⑤保持裸抗体全部或部分功能，如细胞介导的抗体依赖性细胞毒作用（ADCC)、补体依赖性细胞毒作用(CDC)，即裸抗体也是有效的药物。当前第16页\共有25页\编于星期一\10点四、抗体的突变缺点：偶联的药物分子数目不定、位置不定和各种产物在体内的药物代谢动力学、药效、安全性等问题。方法：抗体进行诱导突变，现有报道在抗体的特定部位设计丙氨酸定点突变成半胱氨酸、引入非天然氨基酸、酶法和二硫键改造法等，可以获得固定偶联比的ADC。当前第17页\共有25页\编于星期一\10点五、几种ADC定点偶联的方法比较当前第18页\共有25页\编于星期一\10点

连接方式

机制缺点改进应用SGN-75(抗CD70，Val-Cit-MMAF）肽链接血液的pH高于溶酶体内的pH，溶酶体内的蛋白水解酶在血液中的活性很低，ADC在胞内被蛋白水解酶水解，释放药物药物直接连接到肽连接子上，会导致蛋白水解释放出细胞毒素药物的氨基酸加合物，会降低细胞毒活性加入间隔基，常用是双功能性对氨基苄醇基团，他通过氨基与肽连接，形成酰胺键而含胺细胞毒性药物侧通过氨基甲酸酯官能团与连接子（PABC)的苄基羟基相连。当前第19页\共有25页\编于星期一\10点七、ADC药物偶联比的测定方法1、紫外可见分光光度法抗体为蛋白质,其含有苯环的氨基酸在280nm有其特征性的吸收峰；若药物有紫外吸收其在特定的波长产生消光系数，产生特征性的吸收峰。可以用双波长发测定药物的偶联比。当前第20页\共有25页\编于星期一\10点当前第21页\共有25页\编于星期一\10点2.液质联用测定ADC药物的偶联比利用Ab、连接臂和药物极性的不同，选用合适的流动相，使其彼此分开，然后分别流入质谱仪，各样品被离子化后，经质谱的质量分析器将离子碎片按质量数分开，经检测器得到质谱图，读出其相对分子质量，进而测定其偶联比。当前第22页\共有25页\编于星期一\10点八、上市ADC药品当前第23页\共有25页\编于星期一\10点九、前景与挑战用于精确治疗疾病，减少药物在体内的毒副作用用于肿瘤的治疗，特别是后期，减少对人体的伤害当前第24页\共有25页\编于星期一\10点挑战ADCs产业化制备工艺复杂，包括重组抗体制备、化学药物与抗体的偶