卫生学评价化妆品详解演示文稿

卫生学评价化妆品详解演示文稿1当前第1页\共有56页\编于星期六\22点（优选）卫生学评价化妆品2当前第2页\共有56页\编于星期六\22点是否含有禁用物质？限用物质是否超标？微生物超标？含有致病微生物？功效成分过量？含有违禁成分？当前第3页\共有56页\编于星期六\22点2006年9月14日，国家质检总局在日本SK-Ⅱ品牌的多项化妆品中，查出禁用成分铬和钕。检验检疫部门在对一批SK-Ⅱ重点净白素肌粉饼进行检验后发现，其钕成分含量达4.5mg/kg。此外，SK-Ⅱ清透防晒乳液、SK-Ⅱ多元修护精华霜、SK-Ⅱ护肤洁面油、SK-Ⅱ护肤精华露、SK-Ⅱ重点净白肌粉底液OB-2、SK-Ⅱ护肤面膜、SK-Ⅱ重点净白素肌粉底液OD-3、SK-Ⅱ润采活肤粉凝霜OB-2系列进口产品中均被检出禁用物质铬，其含量为0.77mg/kg至2.0mg/kg，对皮肤眼睛有损害。当前第4页\共有56页\编于星期六\22点2007年10月24日《广州日报》香港消费者委员会抽检发现，玉兰油、H2O+、巴黎雪完美等品牌的部分化妆品含有致癌物丙烯酰胺的单体。机构检测表明：化妆品中存在5ppm以下的丙烯酰胺残留是安全的。中国香料香精化妆品工业协会说明：丙烯酰胺不会作为化妆品组分添加到产品中。专家说：丙烯酰胺在化妆品中所存有极微量的丙烯酰胺是生产上的背景残留，就是一种低残留量的聚丙烯酰胺附属品。聚丙烯酰胺在全世界范围内被长期使用于数百种护肤品中来达到理想的稠度和触感。作为化妆品工业界的重要原料，聚丙烯酰胺的作用包括稳定剂、发泡剂、结合剂、增稠剂、成膜剂、抗静电剂和头发定型剂。当前第5页\共有56页\编于星期六\22点2009年4月6日《广州日报》

2009年4月2日，韩国媒体报道称，韩国保宁制药和Babyra等著名婴幼儿用品制造企业所生产的婴幼儿爽身粉中，被发现含有1级致癌物质石棉，其中涉及了中国市场上非常有名的进口产品德国NUK婴儿爽身粉。根据中国国家卫生部关于化妆品卫生规范，石棉为化妆品原料成分中的禁用物。相关背景：婴幼儿爽身粉检测出石棉是由于原料滑石。滑石是矿物质中的一种，它与含有石棉成分的蛇纹岩共同埋藏在地下，因而在自然形态下常常含有石棉成分。正因为如此，美国和欧洲等发达国家规定，2005年以后婴幼儿制品中禁止使用滑石。当前第6页\共有56页\编于星期六\22点2010年8月7日《南方日报》香港文汇报报道，洗发水类别中，有23款日化产品含有低量的二恶烷。日化产品和化妆品里多多少少含二恶烷的，因为它是日化产品表面活性剂AES（脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠）合作过程中不可避免产生的，会随着AES进入产品。当前第7页\共有56页\编于星期六\22点强生致癌门事件背景：美国“安全化妆品运动联盟”在当地时间2011年11月1日发表一份报告，报告指出，今年的7~10月，组织购买并检查了强生在13个国家销售的婴儿洗发水的标签，结果发现，中国、美国、加拿大、印尼、澳大利亚5个国家销售的上述产品含有季铵盐-15，而日本、英国、瑞典、荷兰、南非等国家销售的同类产品不含有季铵盐-15。上述产品还含有很可能受二恶烷污染的化学物质。该组织质疑强生在全球采用双重标准。专家认为：季铵盐-15是很多洗发水中普遍和广泛使用的防腐剂，也是国家允许添加的，在中国卫生部关于化妆品的法规中，只要添加量小于0.2%就是合法的。季铵盐-15类白色粉末，属甲醛供体类防腐剂。世界卫生组织、美国全国癌症研究所和美国国家毒物管理局认定，季铵盐-15和甲醛均为潜在烈性过敏原，可引发皮疹等皮肤炎症。当前第8页\共有56页\编于星期六\22点第一节化妆品卫生学方面的主要要求《化妆品卫生标准》《化妆品卫生化学标准检验方法》《化妆品微生物学标准检验方法》《化妆品安全性评价程序和方法》1978《化妆品卫生规范》1999《化妆品卫生规范》2007当前第9页\共有56页\编于星期六\22点总则毒理学试验方法卫生化学检验方法微生物检验方法人体安全性和功效评价检验方法《化妆品卫生规范》2007版包括：规范对化妆品原料和终产品卫生要求以及安全性评价的技术规定，在我国生产和销售的化妆品必须符合该规定。当前第10页\共有56页\编于星期六\22点作为化妆品的原料及产品应符合以下卫生要求：

(1)化妆品应该是安全的产品，在正常以及合理的、可预见的使用条件下，不能对人体健康产生危害。

(2)化妆品使用的原料必须符合原料的规定。化妆品产品必须使用安全，不得对施用部位产生明显刺激和损伤，且无感染性。当前第11页\共有56页\编于星期六\22点一、化妆品原料管理有机类：油脂、蜡、烃、醇、酸、酯无机类：酸、碱、盐、氧化物高分子（水溶性）：天然高分子、合成高分子、有机高分子、无机高分子天然：动物、植物、矿物合成：全合成、半合成主体原料和辅助原料及添加剂按来源分按化学结构分按性能用途分当前第12页\共有56页\编于星期六\22点《化妆品卫生规范》-2007版：发布了化妆品中的禁用、限用成分表，还规定了限用成分的使用浓度和限量，使用目的或相关的警示用语等，从多角度确保化妆品的安全性。

《化妆品卫生监督条例》-第九条：新原料：化妆品新原料是指在国内首次使用于化妆品生产的天然或人工原料。使用化妆品新原料生产化妆品，必须经国务院卫生行政部门批准。《已使用化妆品成分名单》-2003版：3176种一般原料：2128植物原料：502特殊原料：546（一般限用、防腐、防晒、色素）当前第13页\共有56页\编于星期六\22点1.禁用成分《关于解释化妆品禁用物质概念的复函

》-卫生部监督局2007.2我国《化妆品卫生标准》和《化妆品卫生规范》规定的禁用物质是指不能作为化妆品生产原料即组分添加到化妆品中的物质。如果技术上无法避免禁用物质作为杂质带入化妆品时，则化妆品成品必须符合《化妆品卫生标准》和《化妆品卫生规范》对化妆品的一般要求，即在正常及合理的、可预见的使用条件下，不得对人体健康产生危害。《化妆品卫生规范》-2007版：化学物质1208种-石棉、二恶烷、铬、钕中药/植物78种-半夏、乌头当前第14页\共有56页\编于星期六\22点《化妆品卫生规范》-2007版：化学物质73种-甲醛、氢氧化钠、过氧化氢、水杨酸防腐剂（均为加入化妆品中以抑制微生物在该化妆品中生长为目的的物质）56种-DMDM乙内酰脲、水杨酸、甲醛防晒剂（为保护皮肤免受辐射所带来的某些有害作用而在化妆品中加入的物质）28种-紫外线屏蔽剂（二氧化钛、氧化锌），紫外线吸收剂（胡莫柳酯）着色剂（符合规定范围及使用范围，采纳了“欧盟准用着色剂CI号”）156种-使用索引号CI染发剂（在允许原料范围，并符合限制使用要求和标签标注）93种-对苯二胺、间苯二酚、氢醌2.限用成分当前第15页\共有56页\编于星期六\22点二、制成品1.化妆品生产过程中微生物的存在是另一影响化妆品质量的重要因素。2.汞、砷、铅等重金属这类污染成分随化妆品原料进入化妆品并叠加。3.制备化妆品的机械和设备可能将某些重金属带入化妆品成品中。当前第16页\共有56页\编于星期六\22点1.化妆品微生物的质量要求化妆品受微生物污染后可使化妆品的色、形、气味等发生变化，品质下降。致病菌的污染可导致人体健康损害，如化脓性细菌污染可引起皮肤和眼部的感染。当人体抵抗力低时，某些非病原菌或条件致病菌也会引起感染。菌落总数粪大肠菌群铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌霉菌和酵母菌化妆品微生物控制指标当前第17页\共有56页\编于星期六\22点具体规定：眼部化妆品及口唇等粘膜用化妆品以及婴儿和儿童用化妆品菌落总数不得大于500CFU/mL或500CFU/g。其它化妆品菌落总数不得大于1000CFU/mL或1000CFU/g。每克或每毫升产品中不得检出粪大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌。化妆品中霉菌和酵母菌总数不得大于100CFU/mL或100CFU/g。当前第18页\共有56页\编于星期六\22点化妆品中所含有毒物质（常见污染物）不得超过下表中规定的限量。2．化妆品中所含有毒物质(常见污染物)的限量规定当前第19页\共有56页\编于星期六\22点化妆品的包装千姿百态、所用材料多种多样，难以对各种包装分门别类作出规定，因此，仅对其作了原则性规定，即要求化妆品的直接容器材料必须无毒，不得含有或释放可能对使用者造成伤害的有害物质。三、化妆品外包装主要包括：纸容器（盒、袋、管、罐、桶\杯）塑料容器（盒、软管、罐、瓶\杯）玻璃容器（瓶\杯）金属容器（盒、罐、瓶\杯）当前第20页\共有56页\编于星期六\22点第二节卫生化学检验方法一、化妆品中无机成分的测定1.汞元素测试

汞是有害金属元素，汞及其化合物都能穿透皮肤，进入体内，对人体造成伤害。汞的测试分析方法有三种：碘化亚铜比色法、无火焰原子吸收法和中子活化法。由于汞元素容易挥发，因此在检测样品时要避免采取高温灼烧干灰化法。通常预处理方法有：湿式回流消解法、湿式催化消解法和浸提法。测定时将标准汞液的吸光值绘成标准曲线，再将消解后得到的样品溶液加入氯化亚锡，使汞离子变成游离态的汞原子，并导人测汞仪测出吸光度值，再从标准曲线上查出对应的汞含量。当前第21页\共有56页\编于星期六\22点2.铅元素测试铅对所有生物体都有毒性，铅中毒能引起神经、血液、代谢和分泌等系统的病变，严重时还会损坏肝、肾等器官。由于铅和铅化合物可以增白或调配色彩，常有添加过量铅元素的违规化妆品混入销售市场，因此对化妆品中铅含量的测试很有必要。铅的样品预前的处理方法有湿式消解法、干湿消解法和浸提法，其测定方法有火焰原子吸收分光光度法、双硫腙萃取分光光度法。当前第22页\共有56页\编于星期六\22点3.砷元素测试砷元素虽为人体必需的元素，但由于不同形态的砷毒性差别很大，因此使用时应严格区分。

单质砷元素无毒性，但其化合物都有毒，三价砷的毒性更大。砷的样品预前的处理方法有湿式消解法和干灰化法，其测定方法有二乙氨基二硫代甲酸银分光光度法、砷斑法。AsArsenic

74.92

当前第23页\共有56页\编于星期六\22点4.其他无机元素镉：原子吸收、微分电位溶出法等。锶、铍、钴及可溶性锌盐：原子吸收分光光度法。砷、铅、镉、锶、铬、铋等：微波消解ICP-AES法（应用于测定固体类化妆品中）。硒：微波消解-气相色谱法、原子荧光光谱法等。硼：甲亚胺-H与硼的显色反应。5．无机阴阳离子阳离子，如K+、Na+、Ca2+、Mg2+：原子吸收法；阴离子，如F一、CI一、Br一、NO3一、SO42一和阳离子NH4+，可采用离子色谱法测定。当前第24页\共有56页\编于星期六\22点二、有机禁限用物质的测定1.甲醇甲醇是无色、易挥发的有机溶剂，有毒。甲醇对人体眼睛的危害较大，国家标准限量<0.2％(体积分数)。甲醇的测定方法有气相色谱法和比色法。其中气相色谱法简便、快速、准确，已定为国家标准。2.防腐剂防腐剂可采用气相色谱法、高效液相色谱法、气相色谱-质谱(GC-MS)法或液相色谱一质谱法等测定化妆品中易挥发或高沸点的化学物质。

3.美白祛斑成分可采用气相色谱法、气相色谱-质谱法测定《化妆品卫生规范》中的禁用成分苯酚和氢醌；用气相色谱法、液相色谱法、薄层色谱法等分析技术测定熊果苷、曲酸、抗坏血酸磷酸酯镁、L-抗坏血酸棕榈酸酯等功效成分。当前第25页\共有56页\编于星期六\22点4.紫外线吸收剂紫外线吸收剂的检测以高效液相色谱法为主。5.激素激素的检测仍以性激素为主，雌二醇、雌三醇、睾丸酮、雌酮、甲基睾丸酮、黄体酮、己烯雌酚等7种性激素采用高效液相色谱法测定。也有先用七氟丁酸酐衍生化后，再以GC-MS联用技术测定性激素。6.染发剂染发剂种类非常多，如氧化型染发剂中的苯胺、苯酚、邻甲酚、邻苯二胺、邻苯二酚、间苯二胺、对苯二酚、对苯二胺、间苯二酚、对甲苯二胺、间甲苯二胺、仅萘酚等可采用气相色谱法、高效液相色谱法、气相色谱-质谱法、高效毛细管电泳法测定。当前第26页\共有56页\编于星期六\22点7．其他有机成分①斑蝥素（育发类产品中的限用成分）：可采用气相色谱-质谱法进行测定。②酞酸酯（如邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸丁基苄基酯、邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯和邻苯二甲酸二正辛酯六种酞酸酯等）：可采用高效液相色谱法和气相色谱法测定，方法的检出限、回收率、精密度等指标均能满足分析要求。③抗氧化剂（如丁基羟基茴香醚和二丁基羟基甲苯）：液相色谱法和气相色谱-质谱法均可用于测定化妆品中的检测。④二恶烷（具有致癌活性，是化妆品组分中的禁用物质）：可以采用顶空气相色谱法测定。当前第27页\共有56页\编于星期六\22点第三节微生物检验方法化妆品的原料为油脂、胶质、蛋白质、维生素等微生物生长、繁殖所必需的碳源、氮源及矿物质；其次，化妆品中的水分是微生物生长、繁殖所必备条件；第三，pH值一般为4～7，最适宜微生物的生长；另外，化妆品生产、存放和使用时的温度，也适宜大多数病源菌的生长、繁殖。因此，当化妆品接触这些微生物后将发生变质腐败而不能使用；不仅会造成经济损失，而且更为严重的是，若化妆品污染上了致病菌，将危及消费者的身体健康。当前第28页\共有56页\编于星期六\22点一、常见污染化妆品的微生物对化妆品质量影响大的主要是病源细菌和致病真菌等致病菌。

1.病源细菌病源细菌主要包括革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。（1）革兰氏阳性菌主要包括：①葡萄球菌：金黄色葡萄球菌是兼性细菌，人体受到此菌的感染，可引起生疖子、化脓性炎症，眼部引起麦粒肿、结膜炎等炎症。②链球菌：兼性细菌，受感染后，可引起急性咽喉炎、风湿热与急性肾炎等。当前第29页\共有56页\编于星期六\22点③芽孢及梭状芽孢杆菌：炭疽杆菌能引起炭疽病，破伤风桶状杆菌是破伤风的病原体。④棒状杆菌：白喉棒状杆菌是白喉的病源菌。当前第30页\共有56页\编于星期六\22点（2）革兰氏阴性菌。①假单胞菌：绿脓杆菌可使烧伤病人感染，还可引起肺炎。②沙门氏菌：沙门氏伤(副伤)寒杆菌是引起伤(副伤)寒的病源菌。③弧菌：霍乱弧菌能引起霍乱病。④埃希氏杆菌：大肠杆菌能引起腹泻、肾盂肾炎和膀胱炎。⑤志贺氏杆菌：志贺氏痢疾杆菌是痢疾的病源菌。⑥双球菌：肺炎链球菌能引起大叶肺炎、脑膜炎和结膜炎。当前第31页\共有56页\编于星期六\22点2.致病真菌表皮癣菌、白色念球菌、新型隐球菌。当前第32页\共有56页\编于星期六\22点3.霉菌青霉、曲霉、根霉、毛霉。当前第33页\共有56页\编于星期六\22点不同类型的化妆品具有不同的染菌特点：膏霜类化妆品含有水分、碳源和氮源，这类化妆品的微生物污染率最高，检出的微生物种类也最多：类大肠菌群、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌等。洗发类化妆品中含有大量的水分和微生物生长所需的营养，其含有的大量的表面活性剂，特别容易受到革兰氏阴性菌的污染，使得其活性成分失效。霉菌和酵母菌引起的污染会使其产生异味，黏度会发生改变。粉饼类的污染源主要是来自于原材料，此类化妆品检出抵抗力较强的需氧芽孢菌较多。美容类化妆品的染菌率不高，一旦被致病菌污染，将会对人体健康产生较大的影响，特别是眼部化妆品和唇膏。当前第34页\共有56页\编于星期六\22点污染菌产品微生物数目（cfu/g或mL）铜绿假单胞菌护手霜1.2x103嗜麦芽假单胞菌睫毛油7.0x105类产碱假单胞菌洗面奶3.1x104类产碱假单胞菌发乳1.9x104荧光假单胞菌发油4.0x104恶臭假单胞菌啫哩膏2.5x104奥斯陆莫拉菌保湿霜1.3x103阴沟肠杆菌牙膏2.3x105产气肠杆菌牙粉3.4x106化妆品成品中的常见微生物35当前第35页\共有56页\编于星期六\22点微生物污染一级污染：化妆品在生产过程中的污染。因此原材料本身的理化性质、含水量、生产环境和设备、生产工艺、包装容器和环境、生产工人的健康状况等均与化妆品产品的卫生质量有关。二级污染：化妆品在使用过程中受到的污染。化妆品启封后，使用或存放过程中发生的污染，包括手部接触化妆品后将微生物带入，空气中的微生物落入而被污染。一些美容美发店的化妆品是共用的，更可造成交叉感染。尽管化妆品中的防腐剂可抑制微生物的繁殖，但其作用有限。二、微生物对化妆品污染的途径当前第36页\共有56页\编于星期六\22点三、化妆品中微生物的检测方法参照《化妆品卫生规范》(2007版)，主要对化妆品微生物检验方法涉及的菌落总数测定方法，粪大肠菌群、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、霉菌等致病菌检测方法进行介绍。微生物检验的基本要求微生物检验样品的采集、保存及制备适用范围当前第37页\共有56页\编于星期六\22点随机抽取相应数量的包装单位。应从批的整体中各部位抽取，如从四角+中间；分上、中、下层；或上、中上、中、中下、下层；梅花点式等。

所有接触样品的工具、容器都必须保持清洁。

样品的采集1、具有代表性当前第38页\共有56页\编于星期六\22点3、检验量

检验时，应分别从两个包装单位以上的样品中共取10g或10mL。包装量小于20g的样品，采样量可适当增加样品包装数量。2、抽/采样数量

按照抽样批及抽样方案

符合《JJF1070－2005定量包装商品净含量计量检验规则》当前第39页\共有56页\编于星期六\22点液体样品膏、霜、乳剂半固体状样品固体样品无菌容器、材料及操作样品的均一性样品的制备样品的制备及注意事项当前第40页\共有56页\编于星期六\22点样品应放在室温阴凉干燥处样品先进行微生物检验，再做其他指标须防止微生物的再污染和扩散如检出粪大肠菌群或其它致病菌，自报告发出之日起该菌种及被检样品应保存一个月样品的检验及保管当前第41页\共有56页\编于星期六\22点1.化妆品中细菌总数的检测菌落总数（Aerobicbacterialcount）是指化妆品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等），1g（1mL）检样中所含菌落的总数。所得结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性菌落总数。测定菌落总数便于判明样品被细菌污染的程度，是对样品进行卫生学总评价的综合依据。当前第42页\共有56页\编于星期六\22点数据处理混合平板的制备细菌的培养检查结果、观察与计数供试液的制备书写检验记录单★细菌总数检查流程图当前第43页\共有56页\编于星期六\22点化妆品中防腐剂抑制细菌的生长作用。在含卵磷脂、吐温80营养琼脂培养基进行中和。对尼泊金类、苯甲酸类、六氯酚类等有效，但对卡松类的防腐剂的中和效果有限。卡松的中和剂半胱氨酸,可较好的中和卡松的抑菌效果。 因此，检测时不同的防腐剂加入不同的中和剂。当前第44页\共有56页\编于星期六\22点为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每100mL卵磷脂吐温80营养琼脂中加入1mL

0.5％的TTC（,3,5-三苯基氯化四氮唑）溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化。在膏霜类化妆品中，微生物都是吸附或附着于颗粒状的原料中，检测时不易洗脱下来。因此，需要验证检测方法的有效性。当前第45页\共有56页\编于星期六\22点2.化妆品中粪大肠菌群的检测粪大肠菌群（Fecalcoliforms）是一群需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌，在44.5℃±0.5℃培养24h～48h，能发酵乳糖产酸并产气。该菌来自粪便，是重要的卫生指示菌。当前第46页\共有56页\编于星期六\22点基本操作方法1、取稀释后的检液加到双倍乳糖胆盐培养基中，置于44.5℃培养24~48h，如不产酸也不产气，则为阴性。2、如产酸产气，则接种到琼脂平板上，置37℃培养18~24h，典型特征为紫黑色，中心颜色较深。挑选可疑菌落，涂片做革兰染色镜检。3、同时接种到蛋白胨水中，置44℃培养24h，加入靛基质试剂约0.5mL，观察。阳性者液面呈玫瑰红色，阴性呈试剂本色。4、两种现象共存，可报告样品中检出粪大肠菌群。当前第47页\共有56页\编于星期六\22点44±0.5℃24±2h0.5mL靛基质产酸：黄色产气：气泡产酸产气书写检验记录单不产酸不产气增菌培养供试液的制备配培养基和稀释液检查结果判断44±0.5℃24~28h分离培养蛋白胨水中培养最终结果判断特征菌落36±1℃18~24h双倍乳糖胆盐EMB琼脂液面玫瑰红色紫黑色★粪大肠菌群检查流程图当前第48页\共有56页\编于星期六\22点3.化妆品中铜绿假单胞菌的检测铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在42℃±1℃条件下能生长。该菌对人有致病力，可使伤处化脓，引起败血症等。当前第49页\共有56页\编于星期六\22点基本操作步骤1、增菌培养：将稀释样加到SCDLP（SoyaCaseinDigestLecithinPolysorbateBroth）培养基中37℃培养18~24h，若有菌，则生成一层薄菌膜，呈黄绿色或蓝绿色。2、分离培养：从上述薄膜处挑取培养物，划线接种在十六烷基三甲基溴化铵琼脂平板上，37℃培养18~24h。绿脓杆菌的菌落扁平无定型，向周边扩散或略有蔓延，表面湿润，呈灰白色，周围有水溶性色素。验证试验：a染色镜检：挑取可疑菌落，涂片，革兰染色，镜检为革兰阴性者进行氧化酶试验。b氧化酶试验：将可疑菌落涂在滤纸片上，滴加新配制二甲基对苯二胺，15~30s出现红色为阳性。c绿脓菌素试验：取可疑菌落，接种在绿脓菌素测定培养基上，37℃培养24h，加入氯仿，待氯仿提取液呈蓝色，加盐酸，如盐酸呈红色，则被检物中含绿脓菌素。当前第50页\共有56页\编于星期六\22点d硝酸盐还原产气试验：挑取可疑菌落，接种在硝酸盐蛋白胨水培养基中，37℃培养24h，观察。产生气体者，表明该菌能还原硝酸盐，分解亚硝酸盐产生氮气。e明胶液化试验：取可疑菌落，穿刺接种在明胶培养基中，37℃培养24h，放冰箱约20min，仍呈溶解状为阳性。f42℃生长试验：取可疑菌落，穿刺接种在明胶培养基中，3