药物的杂质检查

Contents特殊杂质检查方法3概述1一般杂质检查方法2展望4当前第1页\共有76页\编于星期四\12点中国药典（2010年版）二部凡例中规定：检查项下包括安全性(safety)、有效性(efficacy)、均一性(homogenization)、纯度(purity)四个方面。

第一节概述当前第2页\共有76页\编于星期四\12点第一节概述一、药物纯度的概念与要求1.纯度（Purity）药物的纯净程度。2.杂质

(Impurities)

药物中存在的无治疗作用或影响药物的稳定性和疗效，甚至对人体健康有害的物质。ChP将任何影响药品纯度的物质均称为杂质。当前第3页\共有76页\编于星期四\12点2010版药典，二部，附录XIXF药品杂质分析指导原则(GuidelinesfortheAnalysisofImpuritiesinDrugs)任何影响药品纯度的物质均称为杂质。Anysubstancethataffectsthepurityofadrugisconsideredasanimpurity)

药品质量标准中的杂质系指在按照经国家有关药品监督管理部门依法审查批准的规定工艺和规定原辅料生产的药品中，由其生产工艺或原辅料带入的杂质，或在贮存过程中产生的杂质。不包括变更生产工艺或变更原辅料而产生的新的杂质，也不包括掺入或污染的外来物质。当前第4页\共有76页\编于星期四\12点杂质控制的理念纯度控制限度控制杂质谱控制（impurityprofiles）当前第5页\共有76页\编于星期四\12点纯度控制早期的药物质量控制主要基于容量法、分光光度法等经典的化学分析方法,对杂质的控制主要是通过对药品的纯度控制间接实现的。BP(1980)提出了有关物质(relatedsubstances)的概念。当前第6页\共有76页\编于星期四\12点限度控制BP(1988)

“与已知杂质相比,对药品中的未知(潜在)杂质的控制更为重要”。BP(1998)在附录中首次增加了有关物质和残留溶剂检查通则,增加了杂质控制指导原则;同时在各论中对化学药品的已知杂质给出了具体的名称、分子式和结构式,并通过“已知杂质”、“任意单个杂质”和“总杂质”实现对化学药品中杂质的控制。标志着对药品中杂质的“限度控制”理念已经成熟。年版当前第7页\共有76页\编于星期四\12点杂质谱(impurityprofiles)控制药品中的诸杂质的种类与含量被总称为杂质谱理想的控制理念应是针对药品中的每一个杂质,依据其生理活性逐一制定其质控限度。当前第8页\共有76页\编于星期四\12点3.药物纯度与试剂纯度共同点——均规定所含杂质的种类和限量.不同点①药物纯度从用药安全、有效和对药物稳定性等方面考虑,只有合格品和不合格品.

②试剂纯度是从杂质可能引起的化学变化对使用的影响以及试剂的使用范围和使用目的加以规定,它不考虑杂质对生物体的生理作用及毒副作用。化学试剂不能代替药品！当前第9页\共有76页\编于星期四\12点硫酸钡（BaSO4)药典规定检查可溶性钡盐。化学试剂一般分为4个等级〔基准试剂、优级纯（GR）或特种试剂(光谱纯、色谱纯、农药残留检测级)、分析纯（AR）和化学纯（CR）〕当前第10页\共有76页\编于星期四\12点二、杂质的来源与种类杂质的来源生产过程储藏过程合成过程中，原料不纯或反应不完全，中间体、副产物在精制中未除尽制剂过程试剂、溶剂、还原剂残留异构体、多晶体使用的金属器皿、装置、工具引入的金属杂质在温度、湿度、日光、空气等外界条件影响下，或因微生物的作用，引起药物发生水解、氧化、分解、异构化、晶型转变、聚合、潮解和发霉等变化当前第11页\共有76页\编于星期四\12点当前第12页\共有76页\编于星期四\12点一般杂质（generalimpurities)指在自然界中分布较广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质，如酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、砷盐、重金属等。特殊杂质（specialimpurities）指在特定药物的生产和贮藏过程中引入的杂质，这类杂质随药物的不同而不同。

当前第13页\共有76页\编于星期四\12点异烟肼(isoniazid)的合成路线4-甲基吡啶蒸气、水蒸气在钒触媒存在下与空气中的氧气作用，氧化为异烟酸；再与水合肼反应，即得。若最后一步反应不完全，产品中可混有游离肼。当前第14页\共有76页\编于星期四\12点三、杂质的限量(LimitTest)药物中所含杂质的最大允许量。通常用百分之几或百万分之几(partspermillion,ppm)杂质限量控制限量检查对照法灵敏度法比较法定量测定杂质含量注意平行原则当前第15页\共有76页\编于星期四\12点注意单位统一！当前第16页\共有76页\编于星期四\12点示例一茶苯海明中氯化物检查取本品0.30g

置200ml量瓶中，加水50ml、氨试液3ml和10%硝酸铵溶液6ml，置水浴上加热5min，加硝酸银试液25ml，摇匀，再置水浴上加热15min，并时时振摇，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，放置15min，滤过，取续滤液25ml置纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水稀释至50ml，摇匀，在暗处放置5min，与标准氯化钠溶液(10μg

Cl-/ml)1.5

ml制成的对照液比较，求氯化物的限量。C=10μg/mlV=1.5mlS=?答案：L（%）=0.04%当前第17页\共有76页\编于星期四\12点示例二肾上腺素中酮体的检查取本品0.2g,置100ml量瓶中，加盐酸溶液(9-2000)溶解并稀释至刻度，摇匀，在310nm处测定吸光度不得超过0.05，酮体的百分吸收系数为435，求酮体的限量。V=100mlC=A/E=0.05/435=1.15×10-4

g/100ml

S=0.2g答案：L（%）=0.0575%当前第18页\共有76页\编于星期四\12点示例三磷酸可待因中吗啡的检查取本品0.10g,加盐酸溶液(9-1000)使溶解成5ml，加亚硝酸钠试液2ml，放置15min，加氨试液3ml，所显颜色与吗啡试液[取无水吗啡2.0mg，加盐酸溶液(9-1000)使溶解成100ml]5.0ml用同一方法制成的对照液比较，不得更深。问限量是多少？当前第19页\共有76页\编于星期四\12点示例四苯巴比妥钠中重金属的检查取本品2.0g,加水32ml，溶解后缓缓加入1mol/L盐酸溶液8ml，充分振摇，静置数分钟，滤过，取滤液20ml，加酚酞指示液1滴与氨试液恰显粉红色，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml与水适量成25ml，依法检查，含重金属不得超过10ppm。试计算应取得标准铅溶液(每1ml相当于10μgPb)的体积。当前第20页\共有76页\编于星期四\12点第二节杂质的检查方法杂质的检查方法化学方法色谱方法光谱方法其他方法显色反应检查法、沉淀反应检查法生成气体的检查法、滴定法薄层色谱法、HPLC法GC法、毛细管电泳法UV法、IR、原子吸收分光光度法热分析法、酸碱度检查法物理性状检查法当前第21页\共有76页\编于星期四\12点氯化物检查法硫酸盐检查法铁盐检查法重金属检查法砷盐检查法干燥失重测定法水分测定法第三节药物中一般杂质的检查炽灼残渣检查法易炭化物检查法残留溶剂测定法溶液颜色检查法溶液澄清度检查法当前第22页\共有76页\编于星期四\12点一、氯化物检查法(limittestforchlorides)供试品稀HNO310mlH2OAgNO31ml标准溶液稀HNO310mlH2OAgNO31ml

暗处放置5min(避免AgCl分解)NaCl当前第23页\共有76页\编于星期四\12点ToeachoftheNesslercylinderdescribedaboveadd1.0mlofsilvernitrateTS,dilutewithwaterto50mlandmixwell.Allowtostandinthedarkfor5minutes,comparetheopalescenceproducedbyviewingdowntheverticalaxisofthecylindersagainstablackbackground.

加入硝酸目的可避免弱酸银盐如碳酸银、磷酸银以及氧化银沉淀的形成而干扰检查，同时还可加速氯化银沉淀的生成外产生较好的乳浊。酸度以50ml供试溶液中含稀硝酸10ml为宜。为了避免光线使单质银析出，在观察前应在暗处放置5分钟。当前第24页\共有76页\编于星期四\12点二、硫酸盐检查法(limittestforsulfates)K2SO4(1)灵敏度。(2)反应需在盐酸酸性条件下进行。(3)试剂：氯化钡；标准：硫酸钾溶液。(4)比浊：同置于黑色背景上，自上向下观察。测定条件当前第25页\共有76页\编于星期四\12点三、铁盐检查法(limittestforiron)1.硫氰酸铁法

(Ch.P

和USP采用)硫酸铁铵硫氰酸铵红色当前第26页\共有76页\编于星期四\12点供试品显色，立即与同法制成的对照溶液比较加水溶解25ml稀HCl

4ml过硫酸铵50mg加水稀释35ml30%硫氰酸铵溶液3ml加水定容当前第27页\共有76页\编于星期四\12点加盐酸的目的在盐酸酸性条件下反应，可防止Fe3+的水解。加过硫酸铵的作用加入氧化剂过硫酸铵氧化供试品中Fe2+成Fe3+，同时可防止由于光线使硫氰酸铁还原或分解褪色。当前第28页\共有76页\编于星期四\12点2.巯基醋酸法

(BP采用)红色当前第29页\共有76页\编于星期四\12点四、重金属检查法(limittestforheavymetals)附录ⅧH重金属检查法本法所指的重金属系指在规定实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。如铅(Pb)、银(Ag)、汞(Hg)、铜(Cu)、镉(Cd)、锡(Sn)、锑(Sb)、铋(Bi)、钴(Co)、锌(Zn)、钼(Mo)等。在药品生产过程中遇到铅的机会较多，铅在体内又易积蓄中毒，故检查时以铅为代表。当前第30页\共有76页\编于星期四\12点方法使用范围硫代乙酰胺法溶于水、稀酸和乙醇的药物炽灼后的硫代乙酰胺法含芳环、杂环以及难溶于水、稀酸和乙醇的药物硫化钠法溶于碱性水溶液而难溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物当前第31页\共有76页\编于星期四\12点第一法

硫代乙酰胺法(thioacetamide)条件：

介质：醋酸盐缓冲液

(pH3.5)

2ml

试剂：硫代乙酰胺(CH3CSNH2)2ml杂质对照液：Pb(NO3)2(10µg/ml)灵敏度范围：10~20g/27ml黄色至棕黑色混悬液同置白纸，由上向下透视当前第32页\共有76页\编于星期四\12点第二法炽灼后的硫代乙酰胺法

缓缓炽灼放冷H2SO40.5-1.0ml供试品炭化

加热

HNO3500-600℃H2SO4

除尽放冷完全灰化

蒸干HCl2ml水15ml

中性按第一法检查

蒸干氨试液注意：做空白试验

当前第33页\共有76页\编于星期四\12点第三法

硫化钠法当前第34页\共有76页\编于星期四\12点五、砷盐检查法(limittestforarsenic)砷盐是有毒的物质，多由药物生产过程所使用的无机试剂引入。砒霜(As2O3)对照品雄黄（As4S4）、雌黄（As2S3）ChP采用古蔡氏法和二乙基二硫代氨基甲酸银法检查药物中微量的砷盐。当前第35页\共有76页\编于星期四\12点Ag2S（黑）古法验砷现代方法白田道夫法古蔡氏法

Ag-DDC法当前第36页\共有76页\编于星期四\12点五、砷盐检查法

(一)古蔡氏法(Gutzeit)

黄色棕色黑色当前第37页\共有76页\编于星期四\12点8cm有孔玻璃旋塞导气管AsH3发生瓶溴化汞试纸醋酸铅棉花(60mg)HClZn粒碘化钾试液酸性氯化亚锡试液生成砷斑吸收硫化氢气体当前第38页\共有76页\编于星期四\12点a.KI的作用还原剂：As5+→As3+反应速度慢反应速度快b.酸性SnCl2的作用还原剂①As5+→As3+当前第39页\共有76页\编于星期四\12点②将KI氧化生成的I2→I-稳定的络离子进而促进AsH3不断生成③与Zn粒表面形成Zn-Sn齐SnCl2起去极化作用,使氢气均匀而连续地发生当前第40页\共有76页\编于星期四\12点白田道夫法—含锑药物棕褐色胶态砷加入少量HgCl2,灵敏度可提高至2g/10ml。当前第41页\共有76页\编于星期四\12点注意事项砷斑不稳定，应干燥、避光、立即比较。有机结合态的砷应破坏后检查（加酸或碱），但温度应低于600C。供试品若为铁盐，能消耗碘化钾和氯化亚锡，可加酸性氯化亚锡，使高铁离子还原后检查。供试品（硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐）若在酸性条件下生成硫化氢或二氧化硫，与溴化汞试纸作用生成黑色硫化汞和金属汞，可先用硝酸处理，使其氧化为硫酸盐。锑盐含量较多时，可改用白田道夫（Bettendorff）法检查砷当前第42页\共有76页\编于星期四\12点(二)二乙基二硫代氨基甲酸银法[Ag(DDC)法]

红色胶态银目视比色法510nm测定A值当前第43页\共有76页\编于星期四\12点线性范围：1～10μg/40ml含锑药物不干扰测定用于砷盐的限量检查和微量砷盐的含量测定当前第44页\共有76页\编于星期四\12点(三)次磷酸法

棕色用于硫化物、亚硫酸盐以及含锑药物的砷盐检查，不产生干扰。灵敏度较古蔡法低。当前第45页\共有76页\编于星期四\12点六、干燥失重测定法(DeterminationofLossonDrying)干燥失重：药品在规定的条件下，经干燥后所减失的量。用于检查药物中的水分及其他挥发性物质。恒重：供试品连续两次干燥或炽灼后称重的差异在0.3mg以下。（干燥至恒重的第二次及以后每次称重都应在规定的条件下继续干燥1h后进行）常压恒温干燥法减压干燥器恒温减压干燥器当前第46页\共有76页\编于星期四\12点七、水分测定法(DeterminationofWater)第一法（费休氏法）A.容量滴定法B.库仑滴定法以卡尔-费休氏法（Karl-Fischer）反应为基础，应用永停滴定法测定水份。滴定剂碘不是从滴定管加入，而是由含有碘离子的阳极电解液电解产生。

第二法（甲苯法）当前第47页\共有76页\编于星期四\12点八、炽灼残渣检查法

(DeterminationofResidueonignition)系指有机药物经炭化或挥发性无机药物加热分解后，高温炽灼所产生的非挥发性无机杂质的硫酸盐。0.1%～0.2%1～2mg当前第48页\共有76页\编于星期四\12点九、残留溶剂测定法(DeterminationoforganicSolventResidue)残留溶剂：在合成原料药，辅料或制剂生产的过程中使用的，但在工艺中未能完全除去的有机溶剂。中国药典采用GC法测定溶剂残留当前第49页\共有76页\编于星期四\12点色谱系统与系统适用性试验(SystemSuitabilityTests;SSTs)以直径为的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球作为固定相，柱温为80-170℃；并符合下列条件：⑴用待测物的色谱峰计算的N应大于1000；⑵内标物与待测物的两个色谱峰的R≥1.5；⑶每个标准溶液进样5次，所得待测物与内标物峰面积之比的RSD≤5%；若以外标法测定，所得待测物峰面积的RSD≤10%当前第50页\共有76页\编于星期四\12点进行有机溶剂限度测定时，根据残留溶剂的限度规定来确定对照品溶液的浓度；进行定量测定时，应根据供试品中实际残留溶剂的实际残留量确定对照品溶液的浓度。对照品溶液的色谱峰面积与供试品溶液中对应的残留溶剂的色谱峰面积以不超过2倍为宜。当前第51页\共有76页\编于星期四\12点顶空技术（headspacetechnology）顶空分析是一种样品预处理技术,它是通过样品基质上方的气体成分来测定这些组分在原样品中的含量。具有简便、快捷、灵敏度高等优点。当前第52页\共有76页\编于星期四\12点AgilentG1888顶空进样器

当前第53页\共有76页\编于星期四\12点当前第54页\共有76页\编于星期四\12点静态顶空1.注射器2.密封隔垫3.螺帽4.容器5.样品6.恒温浴7.温度计当前第55页\共有76页\编于星期四\12点动态顶空（吹扫-捕集）当前第56页\共有76页\编于星期四\12点第四节特殊杂质的检查方法增修订项目2005年版2010年版红外光谱鉴别原料530580制剂073有关物质HPLC方法142707残留溶剂2497当前第57页\共有76页\编于星期四\12点一、色谱分析法(一)TLC法比移值一般要求：颗粒直径10~40µm薄层涂布：无粘合剂含粘合剂：常加入10~15%

煅石膏(CaSO4·2H2O,180℃烘4h)或0.5~0.7%羧甲基纤维素钠水溶液当前第58页\共有76页\编于星期四\12点①杂质对照品法

适用于已知杂质并能够得到杂质对照品的情况②供试品溶液的自身稀释法对照法适用于杂质的结构不能确定或无杂质对照品的情况。本法虽不及①法理想，但其优点是不需要制备杂质的对照品，还可配成几种限量的对照溶液，比较简单易行，所以应用较多。采用本法时应注意供试品与所检杂质对显色剂所显的颜色应相同，显色灵敏度也应相同或相近。测定法当前第59页\共有76页\编于星期四\12点供试品10µl

N-甲基哌嗪10µl

50mg/ml

50µg/ml

枸橼酸乙胺嗪I2蒸气显色对照品法当前第60页\共有76页\编于星期四\12点1.样品高浓度2.样品低浓度（对照溶液）自身对照法当前第61页\共有76页\编于星期四\12点③杂质对照品法与供试品溶液自身稀释法对照法并用

有对照品用①，无对照品或未知杂质用②法④对照药物法无合适的杂质对照品，或者是供试品显示的杂质斑点颜色和主成分颜色有差异，难以判断限量。当前第62页\共有76页\编于星期四\12点对照药物法1.样品高浓度2.样品低浓度3.对照药物（浓度同1）当前第63页\共有76页\编于星期四\12点(二)HPLC法当前第64页\共有76页\编于星期四\12点内标法：用于有杂质对照品时能够测定杂质的校正因子杂质的。含量测定。可避免因样品前处理及进样体积误差对测定结果的影响。外标法(Externalstandardmethod)：用于有杂质对照品或杂质对照品易制备的情况。加校正因子的主成分自身对照法：用于有杂质对照品时，杂质的含量测定。不加校正因子的主成分自身对照法：用于没有杂质对照品的情况。峰面积归一化法：粗略测量供试品中杂质的含量。

当前第65页\共有76页\编于星期四\12点内标法（internalstandardmethod）内标法：使用内标法可以抵消仪器稳定性差，进样量不够准确等原因带来的定量分析误差。如果在样品预处理前加入内标物，则可抵消方法全过程引起的误差。校正因子（Correctionfactor）：等量的不同物质在相同的实验条件下在同一检测器上的响应值经常不同，为了校正这种响应的差别，引入了校正因子的概念。当前第66页\共有76页\编于星期四\12点AS：内标物质的峰面积CS：内标物质的浓度AR：杂质对照品的峰面积CR：杂质对照品的浓度CX：供试品中杂质的浓度当前第67页\共有76页\编于星期四\12点220260300nm肾上腺酮及肾上腺素的紫外吸收曲线λmax