氨基酸类药物的分析最终

氨基酸类药物的分析最终第一页，共二十九页，编辑于2023年，星期日Contents.氨基酸的鉴别试验2氨基酸药物检查3氨基酸含量测定4氨基酸及在医药中的应用1第二页，共二十九页，编辑于2023年，星期日氨基酸是构成蛋白质的基本单位，具有高度营养价值的蛋白质补充剂，有着广泛的生化作用和临床疗效，可治疗蛋白质代谢紊乱、蛋白质缺损所引起的一系列疾病的重要生化药物。第三页，共二十九页，编辑于2023年，星期日一：氨基酸

的结构与物化性质1.结构

氨基酸（aminoacid）：是含有一个碱性氨基和一个酸性羧基的有机化合物，氨基一般连在α-碳上。是生物功能大分子蛋白质的基本组成单位。氨基酸（aminoacid）——蛋白质的基本结构单元第四页，共二十九页，编辑于2023年，星期日2.物理性质晶型α氨基酸为白色晶体，不同氨基酸其晶体形状不相同。熔点氨基酸熔点一般在200—300°C,而且多在溶解时分解。溶解度均溶于水，但水中溶解度差别大，能溶解于强酸强碱，不溶于非极性溶剂。旋光性除Gly外，所有的天然氨基酸都有旋光性。构成蛋白质的20种氨基酸在可见光区都没有光吸收，在红外区和远紫外区（λ＜200nm）都有光吸收.第五页，共二十九页，编辑于2023年，星期日3.化学性质－氨基参加的反应－羟基参加的反应－氨基&－羧基

化学性质第六页，共二十九页，编辑于2023年，星期日（1）－氨基参加的反应与亚硝酸反应VanSlyke（范斯来克）法测定氨基酸的基础。与酰化试剂反应酰化试剂在多肽和蛋白质的人工合成中被用作氨基的保护试剂。烃基化反应氨基酸氨基中的第一个H原子可被-OH取代，如与2，4－二硝基氟苯的反应。形成席夫碱反应氨基酸的-氨基能与醛类化合物反应生成弱碱，即席夫碱。脱氨基反应经氨基酸氧化酶催化即脱去-氨基而转化为酮酸。第七页，共二十九页，编辑于2023年，星期日（2）－羧基参加的反应成盐和成酯反应在特定的化学反应中保护羧基，活化氨基。氨基酸酯是制备氨基酸的酰胺或酰肼的中间物成酰氯反应可使氨基酸的羧基活化，使它容易与另一氨基酸的氨基结合，用于多肽人工合成。脱羧基反应第八页，共二十九页，编辑于2023年，星期日（3）－氨基&－羧基共同参加的反应茚三酮反应

茚三酮在酸性溶液中与α-氨基酸共热，引起氨基酸氧化脱氢、脱羧反应，最后生成紫色物质。成肽反应

一个氨基酸的氨基和另一个氨基酸的羧基缩合成肽，形成肽键。第九页，共二十九页，编辑于2023年，星期日鉴别试验旋光性薄层色谱法（TLC）红外吸收光谱法（IR）紫外分光光度法（UV）茚三酮反应...氨基酸的鉴别试验第十页，共二十九页，编辑于2023年，星期日旋光度不同氨基酸比旋度不同旋光仪第十一页，共二十九页，编辑于2023年，星期日薄层层析色谱法第十二页，共二十九页，编辑于2023年，星期日紫外分光光度法（UV）

在20种天然氨基酸中，只有酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸在紫外区有最大吸收。酪氨酸的max＝275nm275=1.4x103苯丙氨酸的max＝257nm257=2.0x102色氨酸的max＝280nm280=5.6x103第十三页，共二十九页，编辑于2023年，星期日1：酪氨酸2：色氨酸3：苯丙氨酸。紫外分光光度法（UV）这三种氨基酸可以通过紫外吸收光谱加以鉴别。精密称取酪氨酸、色氨酸、苯丙氢酸各适量。用水制成每1mL含20μg（色氨酸）、40μg（酪氨酸）、200μg（苯丙氨酸）。在波长230～300nm测定各氨基酸的吸收光谱，如右图。第十四页，共二十九页，编辑于2023年，星期日红外吸收光谱法（IR）

氨基酸在红外区都有特性图谱，可以通过与标准氨基酸图谱比较作为氨基酸的鉴别依据。第十五页，共二十九页，编辑于2023年，星期日红外吸收光谱法（IR）用红外分光光度法进行氨基酸鉴别时，除另有规定外，通常固体供试品均采用溴化钾片法，在400～667cm-1范围内测定其吸收图谱。所得的吸收图谱各主要吸收峰波长和各吸收峰间的相互强度关系均应与对照的图谱一致。第十六页，共二十九页，编辑于2023年，星期日茚三酮反应当茚三酮在酸性条件下和氨基酸反应时，氨基酸被氧化分解生成醛，放出氨和二氧化碳，水合茚三酮则成还原型水合茚三酮。然后还原型茚三酮与氨，另一分子茚三酮进一步缩合生成蓝紫色物，最大吸收值的波长为570nm。第十七页，共二十九页，编辑于2023年，星期日氨基酸检查：根据《中国药典》有关物质测定利用紫外—可见光度法测定氨基酸纯度。第十八页，共二十九页，编辑于2023年，星期日氨基酸含量测定方法含量测定ACEDB非水溶液滴定法酸碱滴定法其他方法定氮法碘量法或溴量法第十九页，共二十九页，编辑于2023年，星期日酸碱滴定法谷氨酸、天冬氨酸等氨基酸，其分子结构中均有羧基，故对其原料药一般采用氢氧化钠滴定液滴定。赖氨酸分子结构有氨基，故可以用酸碱滴定。

天冬氨酸 AspCOOHCHNH2

CH2COHOCOOHCHNH2

谷氨酸 GluCH2COHOCH2(CH2)4

赖氨酸 LysCOOHCHNH2H2N第二十页，共二十九页，编辑于2023年，星期日非水溶液滴定法中国药典、美国药典和英国药典对所收载氨基酸类药物，除谷氨酸用氢氧化钠为标准溶液的酸碱滴定法，其余均根据其结构特性，采用了非水酸碱滴定法。用冰醋酸作溶剂，高氯酸作标准溶液滴定，电位法或指示剂法确定终点。适用于常量氨基酸的含量测定。第二十一页，共二十九页，编辑于2023年，星期日非水溶液滴定法【例】电位滴定法测定酪氨酸的含量P148

电位滴定法是在滴定过程中通过测量电位变化以确定滴定终点的方法。

优点：1、不需要准确的测量电极电位值

2、其准确度优于直接电位法电位滴定法是靠电极第二十二页，共二十九页，编辑于2023年，星期日非水溶液滴定法滴定方法：

★将盛有供试品溶液的烧杯置电磁搅拌器上，侵入电极，搅拌，并自滴定管中分次滴加滴定液。

★开始时可每次加入较多量，搅拌，记录电位；至将近终点前，则应每次加入少量，搅拌，记录电位；至突跃点已过，仍应继续滴加几次滴定液，并记录电位。

★然后用坐标纸以点位（E）为纵坐标，以滴定液体积（V）为横坐标，绘制E-V曲线，以此曲线的陡然上升或下降部分的中心为滴定终点第二十三页，共二十九页，编辑于2023年，星期日非水溶液滴定法计算式：P%=FT(V-V0)/S×100%

P%:酪氨酸的百分含量；

F:高氯酸的滴定液的浓度正因子；

T:高氯酸滴定液（0.1mol/L）对酪氨酸的 滴定度，18.12；

S:酪氨酸样品质量；

V:供试品消耗的高氯酸滴定液的体积；

V0：空白消耗的高氯酸滴定液体积；每1mL的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当18.12mg的无水酪氨酸第二十四页，共二十九页，编辑于2023年，星期日定氮法——基本原理1.有机物中的胺根在强热和CuSO4，浓H2SO4

作用下，硝化生成（NH4)2SO42NH2+H2SO4+2H=(NH4)2SO4（其中CuSO4做催化剂）2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3

，收集于H3BO3

溶液中(NH4)2SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO42NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O第二十五页，共二十九页，编辑于2023年，星期日定氮法——基本原理3.用已知浓度的H2SO4（或HCI）标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3第二十六页，共二十九页，编辑于2023年，星期日定氮法中国药典：每1mL硫酸滴定液（0.05mol/L）相当于6.606mg天冬氨酰第二十七页，共二十九页，编辑于2023年，星期日碘量法或溴量法盐酸半胱氨酸因其分子结构中含有—SH，可用碘量法测定每1mL碘滴定液相当于15.76mg的C