初始污染菌实验方法验证

初始污染菌试验方法验证方案产品名称：一次性环切缝合器 日期： 日期： 日期：江西狼和医疗器械股份限名目初始污染菌试验方法验证方案概述验证目的职责与验证申请验证依据验证打算验证内容初始污染菌试验方法验证方案概述：成品热原及内毒素有直接关系，故而要对其检测方法进展验证，确认其有效性及检测准确性，从而优化产品灭菌工艺及把握产品热原及内毒素，确保产品的安全性。目的：通过试验验证检测方法的适用性及计数用培育基的适用性。职责与验证申请：质量治理部供给检测工程方案、接收标准、评价等级及相关试验。生产技术部负责按验证方案生产相关样品初始污染菌试验方法验证申请表验证组姓名职务单位黄燕组长质量治理部经理龙章宏组员化验员江西狼和医疗器械股份有限公苏俊组员化验员司胡梓鹏组员化验员批准经争论：同意以上成员组成验证小组，依据此方案对本公司的产品的初始污染菌试验方法进展验证。经争论：同意以上成员组成验证小组，依据此方案对本公司的产品的初始污染菌试验方法进展验证。批准人：年月日《中国药典》2023版5.验证打算：试验操作人员确认；试验室试验设备及器材确实认；6.验证内容：菌种和菌液制备菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代〔从菌种保藏中心获得的枯燥菌种为第0代菌液制备接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培育物至胰酪大豆胨液体培育基中或胰酪大豆胨琼脂培育基上，30?35℃培育18?24小时；接种白色念珠菌的培育物至沙氏葡萄糖液体培育基中或沙氏葡萄糖琼脂培育基上，20?25℃培育2-3天上述培育后的颖培育物用PH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成的菌悬液接种黑曲霉的培育物至沙氏葡萄糖琼脂面培育基上，20?25℃培育 5?7天，加人3?5ml0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液将孢子洗脱然后承受适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内用0.05%(ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml孢子数量小于100cfu的孢子悬液。菌悬液假设在室温下放置，应在22?8℃在24h内使2?8℃，在验证过的贮存期内用。计数培育基适用性检查需氧菌的计数1ml黑曲霉各菌悬液，接种至胰酪大豆胨液体培育基管或胰酪大豆胨琼脂培育基平板。金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌在30-35℃，培育不超过3天；20-2552管2个平皿。同时，用相应的比照培育基替代被检培育基进展上述试验。霉菌和酵母菌的计数1ml20-25℃，培育不超过52管或2个平皿。同时，用相应的比照培育基替代被检培育基进展上述试验。结果判定被检固体培育基上的菌落平均数与比照培育基上的菌落平均数的比值应在0.5-2基管与比照培育基管比较，试验菌应生长良好。试验结果见表1计数方法验证供试液的制备：洗脱液用0.9%的灭菌生理盐水，检品液制备在10000级环境中进展。接种和稀释按以下要求进展供试液的接种和稀释,制备微生物回收试验用供试液。所加菌液的体积应不超过供试液体积的1首先应选择最低稀释级的供试液进展计数方法适用性试验。试验组 取上述制备好的供试液，参与试验菌液，混匀，使每1ml供试液或每张滤膜所滤过的供试液中含菌量不大于100cfu。供试品比照组 取制备好的供试液,以稀释液代替菌液同试验组操作。菌液比照组 取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液,按试验组操作参与试验菌液并进展微生物回收试验。假设因供试品抗菌活性或溶解性较差的缘由导致无法选择最低稀释级的供试液进展方法适用性试验时，应承受适宜的方法对供试液进展进一步的处理。如果供试品对微生物生长的抑制作用无法以其他方法消退，供试液可经过中和、稀释或薄膜过滤处理后再参与试验菌悬液进展方法适应性试验。抗菌活性的去除或灭活供试液接种后，按以下“微生物回收”规定的方法进展微生物计数。假设试验组菌落数减去供试品比照组菌落数的值小于菌液比照组菌数值的50%，可承受下述方法消退供试品的抑菌活性。微生物的回收6.2承受平皿法和薄膜过滤法。6个直径90mm的无菌平皿。2个分别注入照上述“试验组”制备的供试1ml；2个分别注入照上述“供试品比照组”制备的供试液1ml；2个分别注入照1ml15～20ml温度不超过45℃熔化的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培育基，混匀，凝固，倒置培育。计算各试验组的平均菌落数。薄膜过滤法0.45μm50mm,假设承受其他直径的滤膜,冲洗量应进展相应的调整。选择滤膜材质时应保证供试品及其溶剂不影响微生物的充分被截留。滤器及滤膜使用前应承受适宜的方法灭菌。使用时,应保证滤膜在过滤前后的完整性。供试液经薄膜过滤后,假设需要用冲洗100ml1000ml,以避开滤膜上的微生物受损伤。适量〔1g、1ml或10cm2的供试品,假设供试品中所含的菌数较多时，供试液可酌情减量洗滤膜。每株试验菌每种培育基至少制备一张滤膜。假设测定需氧菌总数，转移滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培育基平板上；假设测定霉菌和酵母总数，转移滤膜菌面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培育基平板上。6.3.4.43初始污染菌试验方法验证报告1、目的2、概述

名目初始污染菌试验方法验证报告3、测试方法与试验结果4、结论5、重验证条件目的：参照《中国药典》2023版，通过试验验证检测方法的适用性及计数用培育基的适用性，从而验证现在使用初始污染菌试验方法是否准确合格。概述：产品型号为26型：批号为：3.测试方法及检验结果：试验设备及器材：设备名称是否校量是否在有效期结论设备名称是否校量是否在有效期结论已校量在有效期内符合要求已校量在有效期内符合要求已校量在有效期内符合要求已校量在有效期内符合要求已校量在有效期内符合要求已校量在有效期内符合要求内灭菌锅台柜电子天平内灭菌锅台柜电子天平电热恒温培育箱箱确认人/日期：审核/日期：菌液制备：接种金色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的培育物至胰酪大豆胨液体培育基中或胰酪大豆胨琼脂培育基上，30?35℃培育18?24小时；接种白色念珠菌的培育物至沙氏葡萄糖液体培育基中或沙氏葡萄糖琼脂培育基上，20?25℃培育2-3天，上述培育后的颖培育物用PH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成〕的菌悬液。接种黑曲霉的培育物至沙氏葡萄糖琼脂面培育基上，20?25℃培育5?73?5ml0.05%(ml/ml)聚山梨酯80pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，承受适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.05%(ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯lml100cfu菌悬液假设在室温下放置，应在22?8℃在24h内使2?8℃，在验证过的贮存期内用。培育基适用性检查需氧菌的计数1ml黑曲霉各菌悬液，接种至胰酪大豆胨液体培育基管或胰酪大豆胨琼脂培育基平板。金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌在30-35℃，培育不超过3天；20-2552管2个平皿。同时，用相应的比照培育基替代被检培育基进展上述试验。霉菌和酵母菌的计数1ml20-25℃，培育不超过52管或2个平皿。同时，用相应的比照培育基替代被检培育基进展上述试验。结果判定被检固体培育基上的菌落平均数与比照培育基上的菌落平均数的比值应在0.5-2基管与比照培育基管比较，试验菌应生长良好。试验结果见表1培育基菌落数cfu结论培育基菌落数cfu结论培胰酪大豆胨琼养参与菌种胰酪大豆胨琼脂胰酪大豆胨琼脂对脂培育基/胰条培育基照培育基酪大豆胨琼脂件比照培育基铜绿假单胞菌平均值形态大小33℃,4金黄色葡萄球菌于比照培8平均值养基上的枯草芽孢杆菌菌落全都平均值

23℃,72培育基菌落数cfu 沙氏葡萄糖琼参与菌种

件

脂培育基/沙氏葡萄糖琼脂沙氏葡萄糖琼脂对 氏葡萄糖琼脂培育基 照培育基比照培育基白色念珠菌 菌落黑曲霉平均值

23℃,72

计数。验证人/日期： 审核/日期：计数方法验证供试液的制备：洗脱液用0.9%的灭菌生理盐水，检品液制备在10000级环境中进展。接种和稀释按以下要求进展供试液的接种和稀释,制备微生物回收试验用供试液。所加菌液的体积应不超过供试液体积的1首先应选择最低稀释级的供试液进展计数方法适用性试验。试验组 取上述制备好的供试液，参与试验菌液，混匀，使每1ml供试液或每张滤膜所滤过的供试液中含菌量不大于100cfu。供试品比照组 取制备好的供试液,以稀释液代替菌液同试验组操作。菌液比照组 取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液,按试验组操作参与试验菌液并进展微生物回收试验。假设因供试品抗菌活性或溶解性较差的缘由导致无法选择最低稀释级的供试液进展方法适用性试验时，应承受适宜的方法对供试液进展进一步的处理。如果供试品对微生物生长的抑制作用无法以其他方法消退，供试液可经过中和、稀释或薄膜过滤处理后再参与试验菌悬液进展方法适应性试验。抗菌活性的去除或灭活供试液接种后，按以下“微生物回收”规定的方法进展微生物计数。假设试验组菌落数减去供试品比照组菌落数的值小于菌液比照组菌数值的50%，可承受下述方法消退供试品的抑菌活性。微生物的回收6.2承受平皿法和薄膜过滤法。6个直径90mm的无菌平皿。2个分别注入照上述“试验组”制备的供试1ml；2个分别注入照上述“供试品比照组”制备的供试液1ml；2个分别注入照1ml15～20ml温度不超过45℃熔化的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培育基，混匀，凝固，倒置培育。一次性环切缝合器一次性环切缝合一次性环切缝合器一次性环切缝合器一次性环切缝合器1回收率100%88.3%92.6%11冲洗一次263025冲洗二次042冲洗三次000冲洗四次000平均回收率平均回收率修正系数93.7%1.07结论：以上产品各做三套平均回收率达80%以上，一次回收率到达要求。正常试验中可承受冲洗一次后*回收系数进展估算。试验人/日期：审核/日期薄膜过滤法0.45μm50mm,假设承受其他直径的滤膜,冲洗量应进展相应的调整。选择滤膜材质时应保证供试品及其溶剂不影响微生物的充分被截留。滤器及滤膜使用前应承受适宜的方法灭菌。使用时,应保证滤膜在过滤前后的完整性。供试液经薄膜过滤后,假设需要用冲洗100ml1000ml,以避开滤膜上的微生物受损伤。适量〔1g、1ml或10cm2的供试品,假设供试品中所含的菌数较多时，供试液可酌情减量洗滤膜。每株试验菌每种培育基至少制备一张滤膜。假设测定需氧菌总数，转移滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培育基平板上；假设测定霉菌和酵母总数，转移滤膜菌面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培育基平板上。3.5.4.4薄膜过滤法计数方法验证明验结果见表34.验证结论从以上检测结果可知，上述培育基适用性检测符合规定，承受的薄膜过滤法计数方法符合规定，产品初始污染菌一次冲洗回收率符合规定，上述方法适用于产品的日常检测。再验证周期当培育基批号转变时须对计数培育基进展适用性检查产品生产环境或原料发生转变时须进展计数方法的验证当检测环境发生转变时须重验证试验组

产品名称

369

菌菌液组数85658381.85/7290658381.85/7290761ml8973球菌