第九章发育毒性与致畸作用

广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology

反应停(thalidomide)事件目前一页\总数八十一页\编于六点ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology*1953年，联邦德国一家名为ChemieGruenenthal的制药公司研究人员发现，反应停(thalidomide)具有一定的镇静安眠作用，而且对孕妇怀孕早期的妊娠呕吐疗效极佳。*在老鼠、兔子和狗身上的实验没有发现反应停有明显的副作用，公司便于1957年10月1日将反应停正式推向了市场。*“孕妇的理想选择”---当时的广告用语

广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组目前二页\总数八十一页\编于六点ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology1960年，欧洲的医生们开始发现，本地区畸形婴儿的出生率明显上升。这些婴儿以四肢畸形为主，还有的是腭裂、盲儿或聋儿，或内脏畸形。1961年11月，联邦德国汉堡大学的遗传学家兰兹博士根据自己的临床观察提示反应停可能具有致畸胎性。1961年底Thalidomide退出市场1962:FDAinspectorFrancesOldhamKelseyreceivesanawardfromPresidentJohnF.KennedyforblockingsaleofThalidomideintheUnitedStates梅里尔公司在申请前研究过“反应停”对怀孕大鼠和孕妇的影响，但没有出现畸形大鼠和畸形儿。Kelsey以数据不全为由，拒绝了梅里尔公司的申请。美国躲过一劫。

广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组目前三页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组thalidomide•导致近1万-1.2万名海豹畸形儿的出生，其中40％的婴儿生存期没有 超过一年。直到今天仍有约2800名幸存者，但他们却在承受着心理与生理的折磨。•表现：四肢短缺陷、无眼、腭裂、骨骼发育不全、十二指肠和肛门闭锁等。•支付总额1.1亿德国马克的赔偿金ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前四页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组•Thalidomide为什么导致畸形儿的出生？•为什么畸形大都是四肢短小？•为什么大鼠没有出现畸形？•为什么在梅里尔公司的研究中，Thalidomide没有导致畸形儿的出生？ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前五页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组发育毒理学（developmentaltoxicology）研究出生前后暴露于环境有害因子导致的异常发育结局及有关的作用机制、发病原理、影响因素和毒物动力学等。是在畸胎学（teratology）基础上发展起来的现代毒理学的分支学科。第一节概述ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前六页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组畸胎学(古代)现代实验畸胎学(19世纪)发育毒理学发育毒理学的研究历史ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前七页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组第二节发育毒性与致畸性•畸形(malformation)：指发育生物体解剖学上形态结构的缺陷(异常)ü可分为严重畸形和轻微畸形。ü人类常见的畸形：无脑畸形、开放性脊柱裂、腭裂、先心病、21－三体综合症等。•致畸性（teratogenicity）：致畸物引起畸形的能力•致畸物/致畸原（teratogen）：能引起畸形的环境因子一、基本概念ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology•致畸作用（teratogenesis）：致畸物引起畸形的过程目前八页\总数八十一页\编于六点•变异(variation)：指同一种属的子代与亲代之间或者子代的个体之间，有时出现不完全相同的现象，是小的或次要的结构改变•如，肋骨或椎骨数目多于或少于正常；内脏易位•一般认为变异不影响正常生理功能，更不危及生命。广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前九页\总数八十一页\编于六点•••广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology胚体毒性(embryotoxicity)：外源性理化因子对孕体着床前后直到器官形成期结束时的有害影响。表现为：胚胎期染毒而出现畸胎、生长迟缓、着床数减少和吸收胎，也偶有晚死胎。胎体毒性(fetotoxicity)：外源性理化因子对孕体器官形成期结束直到分娩时的有害影响。包括死亡、体重降低、骨化迟缓、功能缺陷以及结构异常，甚至肿瘤。

目前十页\总数八十一页\编于六点结构畸形

功能障碍 死亡

•发育毒性(developmentaltoxicity)：指出生前后接触有害因素，子代个体发育为成体之前诱发的任何有害影响。

生长迟缓

发

育 毒 性 的 表

现广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology•目前十一页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology•出生缺陷（birth

defect）：指婴儿出生前既已形成的发育障碍，包括畸形和功能障碍。

•先天性心脏病•唇腭裂•神经管畸形•尿道下裂•隐睾症•低出生体重目前十二页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology•目前十三页\总数八十一页\编于六点事件：发生受精、卵裂、进入子宫腔、囊胚形成、原肠胚形成及着床。时间：人类为受精后的第11－12天；啮齿类动物为最初的６天。特点：此期受损的是早期胚胎的相对未分化细胞，可通过代偿性的细胞增生加以修补，不会产生局部缺陷，最多出现发育迟缓，若受损的细胞较多，可造成胚胎死亡，称为着床前丢失。也有例外，如小鼠妊娠第2.5天、3.5天和4.5天用甲基亚硝脲处理可造成子代神经管缺陷和腭裂。这一发育阶段被称为早期不易感期。广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology二、发育毒性作用的特点和影响因素（一）发育各阶段发育毒性作用特点1.着床前期目前十四页\总数八十一页\编于六点2.器官形成期•孕体着床后直到硬腭闭合的一段时间。人是妊娠3-8周；大鼠和小鼠约为妊娠6～15天；家兔为妊娠6～18天。•发育中的胚胎对致畸作用的敏感期虽然主要在器官发生期，但在此广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology事件：细胞增殖、移动和组合形成器官原基，即细胞结构开始分化，并逐渐形成不同的器官和组织。时间：人类为第3－8周；啮齿类动物为第1－3周。特点：此期细胞增殖分裂速度很快，组织器官生长旺盛，胚胎对致畸物特别敏感，细胞受损可导致结构畸形、生长迟缓或胚胎死亡。从孕体着床直至硬腭闭合，这段时期被称为致畸敏感期或致畸作用危险期（criticalperiod）。2.器官形成期

着床前期目前十五页\总数八十一页\编于六点致畸敏感期实验证明器官形成期是发生形态结构畸形的关键期。迅速改变细胞分裂速度对畸形发生是极为重要的，因为增加复制速度即增强了突变的可能性。器官形成期正是细胞分裂极旺盛的时期。例如发育中的大鼠在妊娠第8～10天之间，有10次细胞有丝分裂，产生N×210新细胞(N表示器官形成期开始时的细胞数)。人的器官形成期在人妊娠的第3～8周。大多数器官又都有其对致畸作用的特殊敏感期，即“靶窗(targetwindows)”。形态畸形和功能缺陷的敏感期也不同。致畸实验的染毒时间，必须安排在器官形成期，才有可能观察到形态畸形的致畸效应。

广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前十六页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前十七页\总数八十一页\编于六点3.胎儿期广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology事件：主要是组织分化、生长和生理学成熟。时间：人类是从第56-58天起，直到分娩。特点：胚胎的器官、系统的基本结构形成后，致畸物难以使之发生结构缺陷，通常是变形或异常而非畸形。胎儿期接触外源性理化物质，很可能对生长和功能成熟产生效应，主要表现为：全身生长迟缓、特异的功能障碍、经胎盘致癌和偶见死胎。目前十八页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前十九页\总数八十一页\编于六点4.围生期和出生后的发育期

广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology此期接触外源性化学物质，主要表现为发育免疫毒性、神经行为发育异常和儿童期肿瘤。围生期接触外源化学物，会严重影响胎儿T细胞、B细胞和吞噬细胞的发育、迁移、归巢及功能，可能暂时甚至永久性地损伤机体的免疫系统。许多化学物质具有发育神经毒性，表现为对感觉、运动、自主和认知等方面的影响。围生期是一生中对致癌物最敏感的时期。目前二十页\总数八十一页\编于六点（二）发育毒性的剂量-反应模式和阈值问题广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前二十一页\总数八十一页\编于六点1.发育毒性的剂量-反应模式较常见高度致畸作用，较少见在开始生长迟缓到致死剂量之间，多设实验组，以确证无致畸作用广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前二十二页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology

A.正常胎、生长迟缓和结构畸形同时存在，但较高剂量下几乎引起全窝胚胎死亡。这种类型较常见，此类化学物低剂量下主要导致生长迟缓，随剂量的增加，导致畸形和死胎。多为细胞毒性致畸物，包括烷化剂、抗癌药及很多致突变物。目前二十三页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology

B.在远低于胚胎致死剂量下即可出现致畸，甚至全窝致畸，致畸胎儿常同时出现生长迟缓。当剂量增加到远远超过全窝畸形时才出现胚胎死亡，后者的剂量范围常常与明显的母体毒性剂量范围重叠。这种模式表示受试物有高度致畸作用，较少见，如沙立度胺、糖皮质类固醇等。目前二十四页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology

C.只有生长迟缓和胚胎致死但没有畸形发生。往往生长迟缓先出现，曲线较平缓，较大剂量时才出现胚胎死亡，其曲线较陡，接近于“全或无”。表明胚胎存活有明显的界限。这类化学物，可被认为是有胚胎毒性（包括胚胎致死性）的，但不具有致畸作用。目前二十五页\总数八十一页\编于六点2.发育毒性的阈值问题广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组•发育毒性是否有阈值尚存在争论(1)很难用实验找出一个发生率很低的剂量-反应关系，因为那需要极大的样本数量，如每剂量组几百到几千窝的动物(2)多数发育毒性机制还不了解，有的已知机制支持阈值的存在，而有些机制则不支持目前二十六页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology（三）发育毒性的物种差异

发育毒性尤其是致畸作用与遗传类型有关，存在明显的物种差异。这种差异是因为不同物种之间因代谢变化、胎盘类型、胚胎发育的速度和方式的差异引起的。例如：反应停4000mg/kg大鼠、小鼠无致畸作用0.5~1mg/kg人类极强致畸作用目前二十七页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology三、母体毒性与发育毒性(一）母体因素对发育毒性的影响母体毒性（maternal

toxicity）指化学毒物对妊娠母体的有害影响，表现为增重减慢、功能异常、临床症状甚至死亡。遗传学疾病营养应激胎盘毒性目前二十八页\总数八十一页\编于六点

（二）母体毒性与发育毒性的关系非共效应

致畸物具有致畸作用，但无母体毒性出现

共效应

致畸物母体毒性均无毒性出现致畸作用的同时也表现母体毒性 仅具有母体毒性，但不具有致畸 作用 在一定剂量下，既无母体毒性， 也不表现胚胎毒性

母体毒性与发育毒性的关系广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前二十九页\总数八十一页\编于六点非共效应

致畸物广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组影响因素：遗传缺陷、年龄因素和外界暴露因素。父源性暴露引起子代发育异常包括：流产、死胎、低出生体重、畸形、功能障碍等。ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology四、父源性发育毒性目前三十页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前三十一页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组五、已知的人类发育毒物或致畸物س

乙醇和吸烟س

乙烯雌酚س

甲基汞س铅س

视黄酸س反应停ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前三十二页\总数八十一页\编于六点•动物实验表明，具有致畸作用的化学物有2500多种(1995年Shepard)•肯定的人类致畸因素仅数十种，其中化学物或药物30多种•电离辐射(放射治疗、放射性碘等)广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前三十三页\总数八十一页\编于六点药物和化学品•

反应停•Abameetin•酒精•氨基蝶呤•雄性激素•麻醉剂•抗甲状腺药物•

白消安•咖啡因•氯代联苯类•香豆素抗凝剂•环磷酰胺•二已基乙烯雌酚•敌螨普•三氟氯溴乙烷电离辐射,•放射治疗,•放射性碘,•原子武器,感染,•风疹,•巨细胞病毒感染,•单纯性疱疹,•梅毒,•弓形体病,代谢失调,•克汀病,•糖尿病,•苯丙酮酸尿,•男性化肿瘤,•高温,••••••••••异维A酸锂甲巯咪唑有机汞化合物有机溶剂类苯妥因腐霉利四环素三甲恶唑烷二酮丙(基)戊酸广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前三十四页\总数八十一页\编于六点

第三节致畸（发育毒性）作用机制1.基因突变与染色体畸变2.干扰基因表达3.细胞损伤与死亡4.干扰细胞-细胞交互作用5.通过胎盘毒性引起发育毒性6.干扰母体稳态7.发育免疫毒性机制8.发育神经毒性机制

广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前三十五页\总数八十一页\编于六点

1.基因突变与染色体畸变广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology胚胎发育过程受众多基因的调控，这些基因在时间和空间上高度有序地表达，控制着细胞的增值和死亡，细胞形态变化和运动，细胞识别和黏着，组织分化和相互影响，直到器官形成和胚胎的生长成熟。

环磷酰胺典型的发育毒物

其活性代谢产物：丙烯醛-易与蛋白质结合

磷酰胺氮芥-易与DNA结合

有报道染色体畸变占人类发育缺陷原因的3%左右，这数字可能比实际低得多。目前三十六页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前三十七页\总数八十一页\编于六点

2.干扰基因表达•某些基因的表达受到抑制或异常表达可能引起畸形。如在培养的小鼠胚胎中用反义寡核苷酸探针抑制或剔除原癌基因Wnt-1或Wnt-3a，都可产生中脑、后脑和脊髓的畸形广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前三十八页\总数八十一页\编于六点3.细胞损伤与死亡广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前三十九页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前四十页\总数八十一页\编于六点4.干扰细胞-细胞交互作用广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前四十一页\总数八十一页\编于六点4.干扰细胞-细胞交互作用广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前四十二页\总数八十一页\编于六点5.通过胎盘毒性引起发育毒性6.干扰母体稳态7.发育免疫毒性机制•环境内分泌干扰物（EnvironmentalEndocrineDisruptors，简称EEDs），又称EnvironmentalEstrogens（环境雌激素）•EnvironmentalEndocrineDisruptingChemicals（简称EDCs，环境内分泌干扰化学物质或环境内分泌干扰化学剂）等广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology8.发育神经毒性机制目前四十三页\总数八十一页\编于六点

•最近一些年沙利度胺用于多发性骨髓瘤的治疗逐渐增加，由于它的 致畸作用人们不得不严格控制其使用。为了进一步的了解沙利度胺 的作用机理和应对不良反应，对于致畸的分子机制的明确阐述就显 得尤为重要。有鉴于此，来自东京工业大学综合研究所的研究者们 对沙利度胺的致畸分子机制进行了研究，他们把研究结果发表在

《科学》杂志上。••••与沙利度胺结合的蛋白是CRBN与DDB1CRBN,DDB1,与Cul4A形成泛素E3复合物沙利度胺对CRBN功能的抑制作用沙利度胺致畸的分子机制

广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前四十四页\总数八十一页\编于六点•极大的推动了对致畸作用和发育毒性的研究以及管理法规的建立。•建立了对致畸作用等发育毒性的评价。

反应停事件的影响：

•加深了对人类畸形发生发展的认识。ThalidomidesurvivorsandchildhoodsweetheartsDarrenMansellandLouiseMedusareplanningtheirwedding

反应停事件暴露出当时的药品申报过程中的一个严重的缺陷问题，即没有明确规定药物上市前需要做哪些研究，反应停只做了300人的上市前临床试验就被批准上市。广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前四十五页\总数八十一页\编于六点实验设计的一般考虑如下：•一、动物选择•必须以哺乳动物为实验对象。一般要求使用与其他毒理学研究中相同的物种与品系，以免必须进行另外的预试验。原则上实验动物对受试物的动力学、毒效学及其他有关参数应与人类接近，如代谢过程与生物转化应与人相近、胎盘结构与人相似、健康、生育力强、多产、孕期短、自发畸形率低、价廉、易得和操作方便。•在胚体-胎体毒性研究中，传统上要求用第二种哺乳动物进行试验第四节发育毒性和致畸作用试验与评价动物发育毒性试验广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前四十六页\总数八十一页\编于六点

•二、接触选择1.剂量 剂量选择应依据从所有已进行的药理学、急性和慢性毒性、以及动力学研究中得到的资料。••高剂量应该在母体中产生轻度的毒性低剂量不应有任何可归因于受试物的有害作用。•中剂量组应在高、低剂量之间按等比级差定位，应引起最小的毒作用。2.接触途径与频率应与人的接触途径相同，如果采用其他接触途径，必须依据动力学的资料。接触频率一般是一日一次，每日在相同时间染毒，并按体重调整染毒剂量。3.对照组•用与试验组相同的最大容量的赋形剂。当赋形剂可能有不良影响(如减少食物的摄取和利用)或影响受试物的作用时，应再设未处理对照组。

广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前四十七页\总数八十一页\编于六点

完整的生殖发育过程细分为如下阶段:A阶段交配前到受孕：检查成年雄性和雌性生殖功能，配子的发育与成熟，交配行为，受精。B阶段受孕到着床：检查成年雌性生殖功能，胚胎着床前发育、着床。C阶段着床到硬腭闭合：检查成年雌性生殖功能，胎体发育，主要器官形成。D阶段硬腭闭合到妊娠结束：检查成年雌性生殖功能、胎体的发育与生长，器官的发育与生长。E阶段出生到断乳：检查成年雌性生殖功能，新生仔对宫外生活的适应，断乳前的发育与生长。F阶段断乳到性成熟：检查断乳后的发育与生长，对独立生活的适应，达到完全的性功能。广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology三段生殖毒性试验目前四十八页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前四十九页\总数八十一页\编于六点1.研究目的评价化学物对配子成熟、交配行为、生育力、胚胎着床前和着床的影响(包括前述生殖发育过程A和B阶段的评价)。雌性包括对动情期、输卵管运输、着床和胚胎着床前阶段发育的影响。雄性包括检测对功能的影响(例如性欲、附睾的精子成熟等)。2.动物至少一种，首选大鼠。每性别、每组的动物数应足以对数据进行有意义的解释。建议每性别、每组16-20窝。3.给药期应说明交配前染毒时间的长度并提供依据。一般采取雄性交配前四周开始重复染毒，直至交配成功。若要保证雌性受孕成功，雄性也可继续染毒，仍同笼至处死。雌性交配前两周开始染毒(可覆盖至少两个完整的动情期)直至着床。4.交配及受孕检查雄大鼠给药4周，雌大鼠给药2周后开始同笼。交配期2-3周，交配比例1∶1。实验程序应能识别出各窝的2个亲本，以避免不正确结果的分析和解释。

广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology一、生育力和早期胚胎发育毒性试验目前五十页\总数八十一页\编于六点•5.终末处死雌性一般在孕中期第13-15天终止妊娠。雄性在证实交配并受孕成功后处死检查。•6.观察项目染毒期间观察雌、雄亲代(Fo)体征和死亡(至少1次／日)，体重和体重改变(至少2次／周)，摄食量(1次／周)，镜检雌性阴道涂片(交配期间1次／天)和其他毒性研究中见到的靶效应。•处死时所有成体均作尸体解剖和肉眼观察，进行所有动物的睾丸、附睾、卵巢和子宫的组织学检查，附睾或睾丸中的精子计数以及精子存活力测定。检查计数雌性的黄体数，着床数，吸收胎，死胎和活胎数。保存肉眼发现改变的脏器，以便进行可能的组织学评价，并保存足够的对照组的相应脏器，以供比较。对明显未孕的大鼠或小鼠(而不是对家兔)，可用硫化铵子宫染色鉴别胚胎着床前死亡。•7.结果评定综合对F0代观察的各项指标和参数，用合适的统计方法分析和评价。在分析对胎体(子一代，F1)的影响时，应考虑下述参数：各组受影响的窝数比；每窝受影响的胎体的组平均百分率；受影响胎体总数比。广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前五十一页\总数八十一页\编于六点二、胚体-胎体毒性试验(致畸试验)1.研究目的评价母体自胚泡着床到硬腭闭合期间接触受试物对妊娠雌性和对胚体-胎体发育的有害影响，即前述生殖发育过程中的C和D阶段，主要包括增强了与非妊娠雌性有关的毒性，胚体-胎体死亡、生长改变与结构异常。2.动物通常用两种，一种是啮齿类，首选大鼠，另一种是非啮齿类，最好是兔。若仅用一种动物，需提出正当理由。每组动物数应足以对数据进行有意义的解释。建议每组16-20窝。雌性宜用性成熟的，未交配过的动物。3.给药期从着床期到硬腭闭合，即器官形成期，大、小鼠孕期的第6～15天，兔孕期的6～18天。致畸试验除阴性对照外、应设阳性对照组。阴性与阳性对照组的作用分别是为自发畸形的发生和该批实验动物在试验条件下的敏感性提供资料广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前五十二页\总数八十一页\编于六点4.终末处死与标本制作在分娩前一天处死怀孕母体，以防止自然分娩后，母体吞食畸形子。除逐个检查所有胎体的存活和畸形外，尚需分别检查软组织和骨骼的异常。将每窝50％胎仔经茜素红染色后，作骨骼检查。另外50％胎仔经Bouin’s固定后，作内脏检查。使用新鲜标本的显微解剖技术检查软组织改变(对家兔胎体检查的最好方法)。左、右：颅骨缺损、多肋。中：颅骨缺损广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前五十三页\总数八十一页\编于六点5.观察项目

染毒期观察妊娠动物的体征和死亡(1次／日)，体重和体重改变(2次／周)，摄食量(1次／周)和在其他毒性研究中已证实的重要靶效应。有流产和早产征兆者处死并进行肉眼检查。计数黄体数，吸收胎数，活胎数与死胎数及着床点，称胎盘重并作肉眼评价，必要时可作组织学检查。称活胎体重，检查胎体性别，以及外观、内脏和骨骼畸形。6.结果评定致畸研究的发现应根据观察到的效应和产生效应的剂量水平进行评价。

对母体的终点评价指标包括：体重、体重变化、食物消耗量和母体毒性体征及母体畸胎出现率等。对胎体影响的评价应包括：受影响的窝数比、每窝受影响胎体数的组间均数、受影响的胎体总数比、畸胎率和某单项畸胎率等。广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前五十四页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前五十五页\总数八十一页\编于六点ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前五十六页\总数八十一页\编于六点ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前五十七页\总数八十一页\编于六点ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前五十八页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology正常（人类）目前五十九页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology示意图（人类）目前六十页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology腭裂（人类）目前六十一页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology腭裂（人类）目前六十二页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology脊柱裂（人类）目前六十三页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology脊柱裂（人类）目前六十四页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology无脑畸形（人类）目前六十五页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology无脑畸形（人类）目前六十六页\总数八十一页\编于六点

三、出生前和出生后发育毒性试验(围生期毒性试验)1.研究目的评价母体自着床至断乳期间接触化学物对妊娠／哺乳母体和对孕体及代发育直至成熟的有害影响(前述生殖过程的C-F阶段)。在此期间引起的毒性反应会延迟发生，故观察应继续到性成熟。有害影响主要包括增加与未妊娠雌性有关的毒性，子代出生前和出生后死亡，生长与发育的改变，子代中的功能缺陷(包括行为，青春期性成熟)和生殖(Fl代)。2.动物至少一种，首选大鼠。每性别、每组动物数应足以对数据进行有意义的解释。建议每组16-20窝。3.染毒期雌性从着床至哺乳期终止。大鼠孕15天至产后28天。

广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前六十七页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology终末处理：断乳后处死母体和部分幼仔，每窝选8只抚育到性成熟并交配，评价生育力的F1代在F2代出生后处死。观察指标母体：饮水量、摄食量、体重变化、中毒状况及死亡率、妊娠分娩时间、产仔数、受孕率；F1代：性别比例、外观畸形、出生存活率、哺育存活率、生长指数，生理发育和断乳前神经行为检测；哺乳后处死检查主要脏器及睾丸附睾或卵巢子宫重量、内脏畸形；断乳后行为测试，交配行为及受孕率。结果评定：母体毒性及NOAEL，胚胎毒性、致畸性、子代神经行为影响及NOAEL。目前六十八页\总数八十一页\编于六点流行病学研究和人类证据•人类证据的获得病例报告、出生缺陷登记广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology流行病学调查：在接触外来化合物的人群中进行调查。调查的观察指标可参照有关的临床诊断检验指标，还可进行染色体畸变检查。目前六十九页\总数八十一页\编于六点

致畸物及发育毒物的危险度评定由于致畸作用的机理尚未充分阐明，所以致畸物危险度评定方法也没有完全统一，现只介绍三种方法，供实际工作中参考。(1)致畸指数判断致畸指数：母体LD50／胎体小致畸剂量通过致畸指数可以判断致畸带的宽窄和致畸性的强弱。致畸指数小于10为一般不致畸，致畸指数10~100为致畸，大于100为强致畸。

广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前七十页\总数八十一页\编于六点(2)化学物致畸潜力分类和安全系数确定根据动物试验中发育毒性效应的类型、严重性和发生率将化学物分为四类，并规定各类型的不同的安全系数范围(表8-3)，用以评定待测物发育毒性的危险度。

广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology目前七十一页\总数八十一页\编于六点广东药学院公共卫生学院卫生毒理学教研组ChemicalTeratogenesis&DevelopmentalToxicology(2)化学物致畸潜力分类和安全系数确定根据动物试验中发育毒性效应的类型、严重性和发生率将化学物分为四类，并规定各类型的不同的安全系数范围(表9-1)，用以评定待测物发育毒性的危险度。国际生命科学院(InternationalLifeSciencesInstitute,ILSI)1989年提出

目前七十二页\总数八十一页\编于六点(3)ICH人类用药危险度分类研究设计中规定，一旦一种新药被批准，就要根据动物发育毒性的研究结果和从人类使用经验得到的信息(但通常得不到)，将该药品在妊娠用药类别中定位(共5类)，