【幽门螺杆菌免疫学抗体检测方法研究综述4500字（论文）】

幽门螺杆菌免疫学抗体检测方法研究综述目录TOC\o"1-2"\h\u13739幽门螺杆菌免疫学抗体检测方法研究综述 17772摘要 1154001引言 1112852免疫学抗体检测方法 2198502.1免疫印迹技术 2281392.2胶乳免疫比浊法 3136302.3胶体金法 34642.4酶免疫法 383552.5临床应用 4128033小结 5522参考文献 6摘要幽门螺杆菌（helicobacterpylori，HP）是慢性胃炎，胃癌等的主要致病病因，HP感染是常见的一种全球性和广泛传播的疾病，我国一直都是幽门螺杆菌的高感染和胃癌的高发国家，其感染造成了巨大的经济负担，WHO已经将HP列为胃癌的头号致癌因子。因此选择合理的检查方法，给患者提供可靠的检查结果，进行有效的治疗，阻断炎症，溃疡进一步向恶性肿瘤发展，具有临床价值。本文就HP免疫学抗体检测的方法、应用和优缺点进行综述。关键词：幽门螺杆菌；临床价值；免疫学抗体检测1引言幽门螺杆菌（helicobacterpylori，HP）是人类胃部疾病的重要致病菌之一，与胃溃疡、慢性胃炎、胃癌及十二指肠溃疡的关系较为密切[1]，幽门螺杆菌是一种革兰阴性致病菌，全球有超过50%的人感染了H.pylori，在一些社会经济不发达的地区，感染率已超过总人数的一半ADDINNE.Ref.{3EDD8628-D001-4822-8878-5DEAFB0433DA}[2]。胃内局部pH值可达到0.9-1.8，但H.pylori依然可存活、定殖和繁殖。主要原因如下：幽门螺杆菌产生尿素酶（Urease），分解尿素产生氨气能够中和胃的酸性环境ADDINNE.Ref.{705235D9-2BB9-4FD7-A8A0-FD28A72AC6C5}[3]；H.pylori借助鞭毛在胃中自由游走逃避宿主的免疫攻击，或者阻碍了先天性免疫功能和适应性免疫ADDINNE.Ref.{C9F21090-5AFD-48D2-9D24-A2DF13AADCCC}[4-6]应答NE.Cms_Insert；另外，细胞毒素相关蛋白A(cytotoxin-associatedgeneA，CagA)、空泡毒素A(vacuolationassociatedgeneA，VacA)和γ-谷氨酰转肽酶（γ-glutamyltranspeptidase，GGT）还可以诱导树突状细胞发生免疫耐受，抑制T细胞的增殖和信号转导导致细胞凋亡，使H.pylori免受T细胞的攻击ADDINNE.Ref.{94BBC543-F01A-4386-B34C-DCA9B3662B3A}[7]。幽门螺杆菌感染导致人体胃消化不良，患萎缩性胃炎、肠化生、消化性溃疡，甚至胃癌等疾病ADDINNE.Ref.{A26EBA53-0044-44CB-8D7F-32EC9FC5AF14}[8，9]。除了胃内消化性疾病之外，H.pylori还会导致一些胃外疾病，比如神经疾病阿尔茨海默症ADDINNE.Ref.{8C45201D-84AD-4F8E-A865-C70256D941BF}[10]、血液疾病免疫性血小板减少症ADDINNE.Ref.{AAD2EFEA-EB28-42B3-AC0E-9204260E07E5}[11]、肝胆疾病酒精性脂肪肝ADDINNE.Ref.{B21A0DD8-8B08-494B-99F0-1BCDB4B19394}[12]等。因此，根除H.pylori对于治疗胃部疾病和其他与H.pylori相关疾病十分重要。目前临床治疗中H.pylori抗生素耐药性不断提高，甲硝唑、克拉霉素的耐药性在亚洲高达99.5%、85.5%ADDINNE.Ref.{1AEB3BB1-F7F4-4396-82E2-1DFF71C917AA}[13，14]。随着人们对HP的不断研究，幽门螺杆菌的检测方法也在改进与创新，并且在临床上得到广泛应用。根据HP检测时是否需要从胃部取材，可以将检测分为2类：侵入性检测和非侵入性检测[15]。侵入性检测主要包括病理学检测法、病原学检测法；非侵入性检测主要有免疫学检测法、尿素呼气实验检测法。从检验工作者和患者的感受来讲，一般认为最好的方法是能简便、快速、无创、还有准确测试的方法。因此，免疫学抗体检测更易接受和采用且更有研究意义。2免疫学抗体检测方法2.1免疫印迹技术免疫印迹技术（immunoblotting）免疫印迹是一种新的免疫化学技术。用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS–PAGE）将HP中分子量大小不同的蛋白组份分离，得到的不同区带与待检血清中相应抗体相结合，通过显色来判断患者的HP感染情况。HP临床分型一般将其分为两类:即I型和II型。有研究显示，HP分型检测对临床工作更有指导意义。若为I型感染，主张积极给予抗HP治疗，若为II型感染，可不给予治疗，随访后再观察，避免了抗生素的滥用。临床上使用于诊断HP感染的检测方法很多，而免疫印迹法是非侵入性的诊断检测方法，还因其具有敏感性高、特异性强、检测方法简单、时间短等优势，免疫印迹法检测门诊消化不良患者的HP感染简便易行，同时在临床上对抗HP的治疗中也具有很好的指导意义[16]。免疫印迹法降低对检查者的创伤，且检查费用较一般常规方法更经济实惠，减轻了经济负担，使检测幽门螺杆菌应用率提高，从而有效避免其他疾病滋生。并用其他技术对菌株进行特性分析，可控制最佳治疗效果及毒副作用，把握治疗HP的明确方向。可以增强诊断效果，为临床治疗感染幽门螺杆菌提供指导方向，值得在临床推广[17]。2.2胶乳免疫比浊法胶乳增强免疫比浊法是将一定量的抗原或抗体标记到一定颗粒直径大小的胶乳颗粒上，制备成胶乳溶液，与相应的抗体或抗原溶液混合后，会发生抗原抗体反应，形成一定的浊度，通过对浊度变化的检测来判定抗体或抗原浓度的方法[18]。这是其他方法无法比拟的。有研究用胶乳免疫比浊法检测HP抗体试剂的性能评价，得出其可用于全自动生化分析仪，，具有定量检测、操作简便、通量大、成本低等优势，适合体检人群HP感染的筛查和大规模人群的流行病学调查。并且认为胶乳比浊法定量检测血清胃HP抗体的准确性、线性、精密度、抗干扰等各性能指标均可以符合临床检测的要求[19]。而另一项试验研究通过胶乳免疫比浊法与金标法和14C呼气试验分别对HP检测，对其结果进行比对分析得知，乳免疫比浊法的检测结果假阳性和假阴性率高，与尿素14C呼气试验检测结果的一致性很不理想。该方法学敏感性较差，其方法学还有待改进[20]。这点与前一个报道不一致。可能是试剂的差异。2.3胶体金法胶体金法是检测幽门螺杆菌抗体的方法，是利用先进的金标技术，用胶体金作为显色剂或示踪标志物，用于抗原抗体反应的一种新型的免疫标记技术。这种方法具有明显的易操作、无痛并且可在加样五分钟内显示结果的快捷特点[21]。在有做过的试验可以看出，在与胃镜下的快速尿素酶试验进行比较，胶体金法的HP阳性检出率为65.71%，快速尿素酶试验的HP阳性检出率为67.14%，相比得到的P>0.05，差异不具有统计学意义，而且胶体金法检测的敏感度为91.24%，特异性为89.76%，都明显高于胃镜下快速尿素酶试验，因此胶体金法在检测HP时具有很高的可靠性。总之，胶体金法检测HP不仅具有很高的阳性检出率，而且检测所需时间短，操作无需专业人士，检测无疼痛，更易于被患者接受，无禁忌使用的患者，具有可高的可靠性，非常适合临床使用[22]。2.4酶免疫法酶联免疫吸附试验（ELISA）是用酶标记抗体，并将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相载体表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗涤，用最广的技术。ELISA可以采集病人的血液、唾液、尿液及粪便等标本检测抗体。有研究血清HP抗体ELISA检测法的优势和有效性，通过对200例疑似HP感染患者均进行血清HP抗体ELISA检测、14C-UBT法、嗜银染色法检测。其结果研究显示，嗜银染色法的Kappa值为0.915，14C-UBT法的Kappa值为0.853，血清HP抗体ELISA检测法的Kappa值为0.882；三种检测方法的特异度无明显差异(P>0.05)，说明嗜银染色法诊断HP阳性的一致性比其他两种方法更佳，但三种检测方法的一致性都为良好，并且都具有较好的特异度，则表明血清HP抗体ELISA检测法、14C-UBT法都可以满足临床诊断HP阳性的需求。而血清HP抗体ELISA检测法和14C-UBT法的操作更简单，检查费用较低，且不具有侵入性，但血清HP抗体ELISA检测法在适用人群方面比14C-UBT法更好。在此研究中，嗜银染色法与血清HP抗体ELISA检测法的灵敏度无明显差异(P>0.05)；血清HP抗体ELISA检测法的特异度、灵敏度、准确度略高于14C-UBT法，但差异无统计学意义(P>0.05)。且较多研究显示，14C-UBT法中的14C会对人体和环境造成一定污染伤害，且对孕妇和婴幼儿不适用，则说明选择血清HP抗体ELISA检测法的可行性更高[23]。因此应用血清HP抗体ELISA检测法诊断HP感染具有较好的效果，灵敏度及特异度都较高，而且操作更简便，无创伤性，患者更易接受。2.5临床应用尿素呼气试验是目前最常用的HP感染诊断和用于根除效果评价方法[24]，敏感性、特异性、准确性高，且操作简便、快速、无创伤，无交叉感染的风险。最大缺点是检测费用贵，14C有放射性，会受抗生素影响出现假阴性，所以会受到检测近期药物影响HP免疫学抗体检测因为抗体的持续存在和产生的时间，则存在着假阴性，HP抗体测定结果在治愈后也需半年才能转为阴性，不能准确反映患者当时的HP感染情况，所以不能用于愈后疗效评价[25]，抗体检测阳性的不能区分近期感染或是既往感染。但临床上可用于大批量人群初筛及流行病学调查，初筛阳性再行，呼气试验。3小结免疫学抗体检测包括免疫印迹分型技术、胶体金法、酶联免疫吸附试验及胶乳免疫比浊法，检测的抗体包括细胞毒抗体、空泡毒抗体和尿素酶亚单位A和B等抗原的抗体[26]，检测的抗体是IgG，它反映了一段时间内幽门螺杆菌感染的状况，因为目前试剂盒检测的准确性差异比较大，而且与其他细菌抗原有一定的交叉反应，所以可以出现幽门螺杆菌感染的假阳性。这些方法均具有较高的特异性和敏感度，无创性，操作简单且检测费用低，适合大批量检测。其中免疫印迹法联合分型能增强诊断效果；胶乳免疫比浊法能定量检测，适合体检初筛；ELISA可以选择检测抗体标本更多。有研究结果显示，以13C-尿素呼气试验结果作标准，胶体金法联合免疫印迹法评估HP感染的特异性、敏感性和阳性符合率都比单一使用胶体金法、免疫印迹法高，且与13C-尿素呼气试验结果的一致性较好[27]。但是在某些方面尚有值得商榷的地方:研究发现，某些检测出HPI型抗体阳性的患者，其胃镜和呼气试验并不支持患者现在患有慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌等胃肠道疾病。其原因可能是抗体的水平高低与患者本身的免疫力有关系，或既往感染HP经治疗后康复的患者，其体内HP抗体仍为阳性，因为抗体含量下降缓慢，存在血液中长达1a-2a[28]，因此HP的抗体检测不能作为HP现症感染或是疗效观察的指标，须结合胃镜或呼气试验的结果来临床治疗及判断疾病的预后[29]。参考文献[1]张永芬,昝学凯.消化系统常见疾病与幽门螺杆菌感染的关系探讨[J].基层医学论坛,2020,24(31):4468-4469.[2]HirukawaS,SagaraH,KanetoS,etal.CharacterizationofmorphologicalconversionofHelicobacterpyloriunderanaerobicconditions[J].MicrobiolImmunol.2018,62(4):221-228.[3]ChristopheB,AnthonyA.EpidemiologyofHelicobacterpyloriinfection[J].Helicobacter.2017,22.[4]FuHY,KawanoS.[AmmoniaandmonochloraminegeneratedbyureaseinHelicobacterpyloricausegastricmucosalinjury][J].NihonRinsho.2002,60Suppl2:119-123.[5]GuH.RoleofFlagellainthePathogenesisofHelicobacterpylori[J].CurrMicrobiol.201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