第四章抗体制药ar

第四章抗体制药抗体？1937年Tiselius用电泳法将血清蛋白分离为白蛋白、α（甲种球蛋白）、β（乙种球蛋白）、γ球蛋白（丙种球蛋白），并证明抗体活性主要存在于γ球蛋白组分。在相当一段时间内丙种球蛋白称为抗体的同义词。第一节概述抗体？

抗体是指能与相应特异性结合的具有免疫功能的球蛋白（Ig）。它是机体免疫系统受抗原物质刺激后，B淋巴细胞被活化、增值和分化为浆细胞合成和分泌的球蛋白。第一节概述抗原决定簇？

是指抗原分子中决定抗原特异性的特殊化学基团，又称表团，通常由5-7个氨基酸残基或5-7个多糖残基/核苷酸组成。抗原决定蔟是T细胞受体、B细胞受体和抗体识别结合的基本单位，他们之间的相互作用具有高度特异性。如：菌体抗原（O抗原）、鞭毛抗原（H抗原）等。第一节概述多克隆抗体？

病原微生物含有多种抗原决定簇的抗原物质，因此这些抗体制剂也是多种抗体的混合物，故称多克隆抗体，会给治疗和诊断带来误差。第一节概述单克隆抗体？1975年Kohler和Milstein首先利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备出单克隆抗体。他们将抗体产生细胞于具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系，此细胞系能产生结构和特异性完全相同的高纯度抗体。第一节概述单克隆抗体？由一种抗原决定簇刺激机体，由一个B淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体。单克隆抗体具有高度特异性、均一性、来源稳定、可大量生产等特点。第一节概述以单克隆抗体作为载体的药物可对肿瘤进行定向治疗。但是，临床应用的实践证明，免疫导向法并没有成功，其障碍有：①单克隆抗体均是鼠源性抗体，应用于人体内可产生人鼠抗体，加速了排斥反应，在人体内半衰期只有5~6h，难以维持有效药物作用靶组织时间。②完整的抗体分子，即Ig的相对分子质量过大，难以穿透实体肿瘤组织，达不到有效的治疗浓度。第一节概述基于上述原因，需从两个方面对单克隆抗体加以改造：①降低单克隆抗体的免疫原性。②降低单克隆抗体的相对分子质量。利用基因工程技术制备出基因工程抗体，即可达到上述目的。第一节概述单克隆抗体药的现状抗体药的销售额97年~99年由4.68亿美元增长到13亿美元03年抗体类药物总销售额将会达到50亿美元250多种抗体类药物在临床试验中1/3已进入三期临床1/4已通过临床三期试验美国市场上有种治疗用的抗体药物第一节概述单克隆抗体药的现状1994年，Centocor的Reopro一种血小板表面受体的单克隆抗体片段被批准用于临床来预防治疗血栓形成1997年批准上市的12种生物新药中有2种是抗体药1998年上市的12种新药中有6种是抗体药2000年又批准了Mylotarg用于治疗急性髓细胞白血病的抗CD33单克隆抗体2001年已批准及预期会被批准的10多种生物新药中，也有5种是属于抗体类药第一节概述抗体药物市场稳步增长第一节概述第一节概述全球有超过200家上市或未上市公司正在研发用于临床诊断和治疗的单克隆抗体正在进行临床试验的抗体公司（38家）第一节概述当前美国治疗性抗体市场第一节概述当前挡美国饮治疗冰性抗俗体市浆场第一解节聋概默述中国网抗体列研究过现状第一给节绩概慰述第二近节份单克蝇隆抗催体及雪其制叶备一、臂抗原拖与动趟物免摄疫二、伴细胞碍融合跃与杂邻交瘤殿细胞震的选瞒择三、缠筛选赶阳性坛克隆射与克共隆化四、酿杂交奇瘤细健胞抗恨体形手状的岭鉴定五、嘉单克甜隆抗该体的纵大量辟制备六、闲单克脸隆抗陕体的城纯化第二买节苏单克协隆抗秋体及董其制铸备设计唐方案钻：一个B淋巴立细胞--笋--只分蜻泌一秒种特热异性母抗体小鼠枕骨髓胖瘤细究胞--宵--能无丸限增妻殖杂种捆细胞第二婶节脸单克忠隆抗似体及顺其制嘱备第二结节街单克留隆抗现体及蒜其制穿备㈠杂交蔽瘤技是术产裂生的3个技筹术关老键1.淡B淋巴孔细胞占与骨庄髓瘤瓦细胞富的特栗性：B淋巴财细胞更（B糊ly虎mp乎ho品cy针te蛛s）：接受梨抗原宵刺激榴后，级能分母泌针过对该珍抗原甘的特魄异性熔抗体，绞在体剃液免史疫中挖具有呀重要四功能贞。B淋巴寇细胞晃本身知是一泡种终撇末分第化细较胞，总通常医不再进行楼细胞处分裂膀，存餐活一满点时怕间后虾便会鲜死亡--纵--割-短命细胞第二定节僻单克配隆抗庸体及叫其制鲁备骨髓安瘤细竭胞（my处el问om岁ace冲ll各s）：恶性厕增殖预的转某化细忠胞，肾只要娘营养千条件云适合苗可永石远分裂延和存邻活--惩--塘-长命许细胞。经筛危选与帽驯化足，现顾已建枯立多忍种骨才髓瘤丘细胞--钢--孔-没有抗辞体分印泌物。第二拢节华单克嫩隆抗糕体及米其制乓备2.细胞坦融合谨技术旧：第二词节订单克暗隆抗碧体及爪其制辆备3.杂交宪瘤细负胞的嘱筛选废：第二阿节外单克桐隆抗释体及肚其制右备第二封节望单克钉隆抗轿体及籍其制郊备第二丸节散单克饱隆抗绣体及多其制蛇备第二禾节推单克晓隆抗息体及腰其制商备第二水节扑单克佛隆抗上体及饿其制卵备一、爽抗原彻与动相物免艺疫第二体节耍单克轨隆抗撞体及陵其制福备第二游节湿单克汉隆抗性体及悦其制悲备1.抗原动物脏体内抗体特异叉性差煎、纯捡度低广产量违低，签反应吐不够状灵敏2.抗原动物苍体内抗体抗原闯不纯抗体菌不纯筛选虽单一彩效应B细胞不能贿增殖昆，产仔生大齐量抗哗体刺激效应B刺激效应B第二难节呀单克御隆抗铸体及偿其制舱备动物撕免疫:特定目标多抗原动物脾脏惭中B淋巴典细胞B淋巴叶细胞大量钳繁殖免疫刺激能分档泌针视对于芹该抗司原的特异葵性抗富体目的垒：在细无胞融劣合后赏获得尽扇可能双多的圆分泌针鼠对于胸该目该标抗原宋的特壮异性酱抗体的语杂交败瘤细势胞第二台节浸单克瞎隆抗规体及狸其制么备常用街免疫伏方法文：常规弦免疫壁法“稳武妥；直优势初克隆侮”脾内暂一次健性免涛疫法“省趁时；炼省抗今原”短程复免疫碗法“省齿时”体外拿免疫畜法“操药作繁陈琐”免疫宗途径辱：皮下榴注射腹腔魔注射静脉没注射第二申节通单克挂隆抗模体及美其制杠备常规槽免疫浑法：第二胆节暖单克穴隆抗美体及沙其制近备脾内过免疫毕法：脾内猎免疫初法即姿在麻唇醉条躬件下产直接盗把0.角1~创0.爬2ml的抗粘原注视入脾两脏进姥行免妨疫。制脾内栋免疫锁法可追提高小唐鼠对绕抗原散的免混疫反涉应，致节省潜抗原换用量搏，细胞抗打原只猛需105个左妄右，是可溶耍性抗枣原只镇需10μg左右导。第二波节装单克劫隆抗锯体及胶其制己备体外往免疫于法：体外洞免疫戴法的危优点证很多明，所励需抗猜原量混少，具一般尼只需冒几微糟克，耕免疫蹦期短炕，仅4~自5天，艺干扰因素苹少，洁已成俘功的休制备友出针阅对多巨抗原能的单毫克隆抗校体，务但融贿合后遇产生棵的杂剥交瘤花细胞竭株不由够稳定。第二逼节碗单克骑隆抗李体及滤其制暮备二、却细胞甲融合睬与杂惠交瘤记细胞轧的选鸦择细胞盯融合宣方法迁：病毒痕介导悦的细赞胞融乳合PE戒G介导堆细胞是融合电极倦融合第二臣节联单克雾隆抗前体及棉其制览备细胞便悬液仇的制风备与轧融合⑴脾细震胞悬壮液的采制备展：最后会一次市免疫掀后第3天制备⑵骨髓菌瘤细执胞悬淋液的盆制备青：于对旨数生黎长期突制备⑶福细胞旋融合觉：5%会P旗EG（10暖00果~4妇00隔0），pH按8.驾0，38℃，1m旨in第二嫂节何单克眉隆抗狗体及猎其制盟备2.或H四AT培养驱基的欠筛选融合基后细报胞混谁合液HA务T培养您基HT培养系基正常夫培养公基2确we圣ek桌s棋la叉te础r1闭we厌ek赶l浮at龄er第二听节久单克祝隆抗吐体及尺其制矛备三、文筛选依阳性打克隆他与克仆隆化常用沃方法征：要求棕：简便棋、快辉速、蒜敏感温；在短构时间脖能检津测大池量样舰品酶联棚免疫歌吸附毅法（en模zy量me折-l知in秆ke储dim诉mu惊no妥so烫rb倚en夹tas米sa茧y，EL悄IS巷A）间接沸免疫啄荧光欺法（In辈di器re扣ctim勇mu昆no内fl木uo灭re粪sc栽en跃ce，IF翅A）放射旋免疫遇法（ra时di揪oi僵mm刊un玩oa述ss胡ay，RI纪A）双向吸扩散快法第二捐节隆单克巷隆抗哥体及还其制蒜备酶联散免疫俭吸附腔法（EL次IS愿A）技术脖原理烦：第二谋节烫单克藏隆抗孔体及旷其制洽备四、聪克隆懂化常用稿克隆明化方辽法：有限意稀释始法软琼祝脂平短板法显微驱操作种法80个细/9浆6孔饲养期细胞期（fe添ed敬er天c汤el屡ls）EL南IS购A法检蹈测单殃克隆懒杂交荡瘤细穿胞的阳培养宿上清闻，选出笼分泌达特异匪性抗负体的事阳性短孔，稳所分皆泌抗冒体即妙为单克棒隆抗汇体。第二黄节胞单克投隆抗录体及蕉其制大备单克立隆抗嘱体（mo佣no零cl悉on陶al隆a羡nt爹ib岸od朱y，MA材b）由单券一克籍隆的藏杂交侧瘤细乞胞分迈泌的猾抗体先，只画针对纠于一渐个抗原震决定吗簇--投--单克耳隆抗丸体（mo症no险cl下on誉al宴a开nt艺ib脆od雄y，MA更b）单克医隆抗是体优娃点：高度纳纯一高度瘦专一应用狸：疾病酒的论违断和永治疗（生凯物导州弹）生物柔大分项子的跳鉴定注、定疯位和垦分离若纯化细胞滚器的租鉴定凭、定巩位和老分离特定牵细胞轰或病元毒的臭鉴定勾、定义位很兰分离第二柱节骗单克碍隆抗烧体及宪其制名备五、慰单克矩隆抗环体的哨大量颗制备常用拼的大徐规模皱培养顽方法宰：动物倘接种粘法转瓶栏培养射法细胞荒培养千罐法第二辨节徐单克临隆抗轮体及极其制宰备五、达单克屯隆抗侄体的销大量歼