流式细胞的原理及临床应用

流式的原理及临床应用杭州辉图生物有限公司技术支持部胡荣连什么是流式细胞仪？检测流动中细胞（颗粒）的仪器目标物可以是细胞、细菌或各种微粒0.5um~50um范围内流式细胞仪原理介绍流式细胞仪基本原理示意图流式细胞仪检测什么信号？细胞抗原抗体荧光激光束通过流式细胞仪我们可以得到以下信息

-相对细胞颗粒密度和内部复杂度(SSC)

-相对细胞大小(FSC)

-染色过细胞的相对荧光强度

流式细胞仪标本准备染色的一般原则及方法标本来源：外周血、骨髓、组织块、培养细胞、脱落细胞及其他。以及血清或各类体液样本。抗体染色一般方法外周血白细胞分析：100ul全血血小板分析：1~5ul全血（根据样本血小板数量）红细胞分析：1ul全血（根据样本中红细胞数稀释后使用）骨髓：100ul其他样本，计数后决定使用体积目标细胞数量及检测终浓度：1×106/ml孵育、溶血、固定抗体孵育：室温下避光15分钟（某些情况下如：细胞内因子检测需冰育）溶血：如样本含中有红细胞需溶血样本溶血后离心上机检测（固定后可放置较长时间）流式细胞仪分析报告及图谱SS（侧向散射光）--反应细胞内物质的多少FS（前向散射光）--反应细胞大小设门：选择要分析的细胞群体设定阴性、阳性范围目前流式细胞仪临床检测项目流式细胞仪的临床应用HIV免疫分型，CD4绝对计数白血病和淋巴瘤的免疫分型肿瘤的细胞周期和倍体分析网织红细胞计数细胞移植的交叉配型和免疫状态监测干细胞计数残量白血病细胞检查HLA-B27检查血小板功能及相关疾病1、HLA-B27的检测强直狂性脊腔柱炎株（an顶ky今lo耻si扫ngsp雅on残dy晃li岸st匠is）意为测弯曲朗的脊医柱。汪它是奇和种角慢性碎、进买行性两和炎狂性疾浑病，址主要激累及亏骶骼疮关节别、脊站柱、桂脊柱汤骨软碰组织晌及四睡肢关摘节，恢表现纳为椎舱间盘裕维环传和纤墙维环伐附近尊结缔归组织干的骨址化，探椎间朽动关苏节和规四肢女关节献滑膜驳的炎搂症和己增生奸，严护重者臣可失凝去劳露动能竭力。群强直确性脊慈柱炎漫是血腔清阴躁性脊害柱关悼节病救中具赞有代袋表性参的疾崇病，究临床业上曾城长期柿把AS误认叠为是分类风花湿性雨关节肉炎的突一个芹亚型絮，60年代洽以来脊人们始才认筝识到会期无遗论从福病因喷学、机遗传逃学、以流行弱病学丧和临垫床表片现特币点等塌诸多帆方面控来看匙，AS都是茫一种预不同孙于类佩风湿符性关年节炎蓝的独展立疾谊病。赵就目季前的版研究嚷文献类而言沙，HL冠A-吸B2鼠7与AS并非勇绝对演相关刃，有钉些AS患者偏表现龄为HL裂A-窗B2爱7阴性茅，而俩且并种非所还有HL广A-搏B2讲7阳性恰者均虫出现AS症状第。B2束7与强箩直性各脊柱慢炎HL备A-顽B2惰7诊断溪的临衫床意划义强直怪性脊匹柱炎－90贺-1现00凝%的强护直性佣脊柱盼炎患佣者HL梦A－B2芝7为阳云性。轿但是HL唉A-头B2植7阳性奇的人沫群中炒只有8－20％是炕强直罩性脊户柱炎罢。瑞特偏综合伪征－65－90％瑞兄特综秃合症敞患者HL即A-杂B2险7为阳气性。扁如果HL惨AB高27论+个体役是非抗淋菌村性尿赌道炎母，那生么有20联-2钻5%的可慢能性嗓发展饺为瑞穿特综清合症势，只桐有1％的渣可能株性正梢常。HL驻A－B2秤7不是墙该疾兽病发饱生的刘必要跃条件延，但爱是却撑与病崖程发厘展有淹紧密萝联系切。“反炎应性片关节摔炎”－是一鹿种自交身限驰制的指少关刻节型孩关节陈炎伴散随着开革兰谎氏阴语性细斧菌如撑杆菌忠性痢崇疾，世沙门晶氏菌更，弧挖形杆咱菌，晒耶尔贯森氏椅菌和唤至贺发氏菌被引起拳的胃经肠感乔染。银屑骑病关翼节炎-90正%的银弯屑病她关节财炎联居合荐恩肠关灰节炎异和脊兄椎炎迷患者HL暗A坟B2治7阳性趣。急性闲前葡胸萄膜基炎－通常肚表现推为疼菌痛，琴畏光越和流平泪。拾可能起是虹疑膜感象染或训结合脊了睫其状体闯或视薯网膜设萎缩别。青少掌年风巧湿症/慢性车关节俩炎II－这些颈儿童由中75％为HL存A徐B2彻7+。相违反，洋青少税年风膛湿症/慢性英关节辅炎I，同刚样也当是少大关节洗性的在，但佩是更额常见农于女灵孩，策与慢祝性虹守膜睫樱状体前炎(3恐0%趟)，阳炎性的AN膨A第(8乱0%邮)和HL货A莫DR旺5关联栋，却普不是B2廊7。HL泄A-茫B2局7的临嫩床检汽测HL贫A-义B2同7属于1型MH咱C基因牺。基予本上寻表达桃在机院体所娇有有惹核细树胞上吨，特呈别是户淋巴鞠细胞蹈表面涛有丰凝富的夺含量户。使询用荧呢光定承量标仁准微恐球，溜校正HL钉A-视B2价7实验黑条件辛后，坛测定啊样本冬中T淋巴侨细胞HL牵A-绢B2赔7表达时水平鸣。若HL暖A-拦B2顺7表达载水平供大于却标准控微球残设定MA伤RK，则供为阳凳性结贞果；妄若HL雾A-夺B2激7表达感水平御低于仍标准蕉微球柔设定MA钱RK，则嚷为阴委性结五果。An蜓ti早-H堵LA惑-B会27值K毙it雾(美国BD暂B锋io煎sc熊ie铁nc懂es公司逆；CA漠T:辣34哗01童83悄)，其中居包括旨：1、An挪ti配-H秘LA逆-B作27袭-F盟IT竹C/羽CD铸3-身PE2、HL夏A-异B2略7妹Ca吴li西br饼at影io俊n蛾be享ad纽奉s3、FA机CSLy迎si林ngSo站lu忧ti像onHL悠A-吴B2造7流式锈细胞岭仪检赏测2、淋饮巴细碗胞亚重群分乡丰析淋巴数细胞恒亚群沫基础弊知识T淋巴取细胞球：主护要杀文伤病绢原体挠感染屯细胞瓶及肿符瘤细砌胞。表面以标志穗物：CD弄3，与TC功R形成幼复合陡体，落是T细胞然识别泪抗原键和转绍导信标号的炉主要状单位盒。CD肺3+霜/C推D4卧+：辅助情性T细胞CD光3+叛/C抹D8摇+：杀伤库性T细胞CD漏8+越T细胞触又称赚细胞朴毒性T细胞都，Tc或CT绕L，它在T细胞档免疫虎应答喜中发乔挥重赞要功非能。Tc细胞殃识别步抗原宿活化赴后释迅放胞退浆内怨颗粒信毒素乐：穿句孔素pe哈rf董or己in和颗棒粒酶gr孤an踏zy泽me，杀伤崭靶细堤胞。B淋巴赖细胞B淋巴片细胞蛾是免森疫系恐统中叼的抗完体产懒生细诉胞。1，产完生的虑抗体坛可与教抗原挤起特装异性勤的结蛮合，慌如中捡和细臂菌的撞外毒患素使夜其失巷去毒扰性作杀用；2，抗盯体与至抗原抗结合关后形授成的脖复合给物易酷被吞姓噬细包胞清柴除；3，抗蚁体与落抗原愉结合籍后再丧结合叙补体茄清除抚病原法体。B细胞摘特异亭性标容志物羡：CD颗19NK细胞NK自然袄杀伤评细胞葬：识言别病赔毒感外染细油胞表露面表螺达的慰相应朗配体魔，NK细胞陆一经再识别着病毒竟感染残细胞井后即斥对之盏施加佩杀伤板作用镜。NK细胞捉表面暗标志缸物：CD鱼3-洪/C凳D1蜜6+最CD崖56德+通过闭淋巴状细胞盛亚群袭的检糟测可交了解伯在不停同情打况下芒体内游免疫沃功能疑状态明，辅蕉助临安床疾扶病的弄诊断景，探疗索疾傍病发堪病机饶理、世病程穗、预园后，踩监测哑、指趋导临税床治越疗方仿案。淋巴免细胞茧亚群吼的临艺床检状测总T和总B判断因某些植免疫好缺陷负和自谣身免垄疫性沙疾病T-淋巴挪细胞熄上升多见页于：阵慢性肠活动级性肝么炎或帆慢性免迁延太性肝厉炎；感器官奏移植渗排斥斤反应广；重首症肌眠无力搬；甲代亢与起甲状些腺炎粉患者挡；何网杰金赔病T-淋巴顽细胞森下降多见送于：常恶性当肿瘤字；自寺身免葵疫性拦疾病票，如放系统尸性红粮斑狼橡疮、姥类风忙湿关疾节炎盐等；投原发栗性免毕疫缺众陷病源，如甩生天辈性胸市腺发笼育不稻全等跨、艾锻滋病螺；接级受放茅疗、淋化疗结或者屑使用换肾上息腺皮哨质激默素等近免疫缠抑制偶剂B-淋巴认细胞竞上升多见滚于：伏多发税性骨梅髓瘤她；巨多球蛋副白血使症；吹淋巴扰瘤；般艾滋廊病B-淋巴邪细胞劈燕下降多见逃于：世原发鲁性免巩疫缺逗陷病庭，如凳性联朵无丙仿种球漆蛋白哥血症匪等、扩恶性骄肿瘤T-淋巴镰细胞谋与B-淋巴裹细胞住同时槐下降多见粪于：茫联合死免疫泥缺陷芒病，会如重姨症状疏联合偷免疫辫缺陷斧病等CD嘱4+和CD晴8+歉T细胞碰有助艇于监汉测患辫有免疫亚缺陷仰疾病（如SC答ID、AI营DS的病辱人体剩内CD傍4+细胞汗亚群袍的百傻分率史相对贼降低辣，而CD唉8+群体缴的百思分率笑相对狂升高秩），自身浴免疫期性疾轮病（如厦在SL港E病人凳中，CD赏8+淋巴仇细胞靠的相勿对百垦分比衰往往乞会降出低，放但当吉使用毫类固裹醇药垂物治恶疗时逗，也纠可能斤上升柜。在急性GV岭HD和移孝植排伏斥中，CD拉8+淋巴锦细胞罢所占礼的比矛例有连可能暴在正喜常人连的范吵围之压外）Th和Ts淋巴愚细胞手的百亡分数CD吧4+炭/C值D8寇+的比泡值：协评价核那些世自身孩免疫脱失调似或被钻怀疑缴是免祥疫失元调或舰已知廊患有柴免疫爸缺陷浅的病余人的定免疫讯状态怖，此淘外，钞这一傍比值闯还可粮用来疑监测何骨髓赞移植孕病人灶以免煤受到每急性GV刺HD的攻抗击CD馆4/优CD屿8升高茎：自色身免吩疫性逆疾病飞，如串类风颈湿性轰关节雀炎、SL浓E。CD屈4/蔑CD谎8降低域：病冒毒感泰染、崇恶性惜肿瘤疮、再隆生障补碍性甲贫血欠等。Th/Ts比值自然键杀伤例细胞骡（NK）NK细胞奋增高常见捐于：血某些盈病毒欺感染觉性疾拳病的种早期存；长心期使捕用干票扰素旷或使异用干循扰素你的诱英导物恨；骨乓髓移哥植后蛾；习厦惯性攻流产浮。NK细胞勉降低常见痛于：槐恶性视肿瘤弹，特天别是煎中晚驳期或朴伴有权转移轧的肿惑瘤；博免疫层缺陷浅病及薯使用返肾上拘腺激洒素等狐免疫穷抑制优剂。横部嫩分病僵毒感鸽染、肢细菌顽感染括及真由菌感红染；籍某些利白血燥病及领白血澡病前储期。恶性秩肿瘤塞患者T细胞群亚群仁和SI码L22R的变笔化及草意义抽卢香帐兰1音,李霞1库,王萍辩萍1剧,李玲2瘦,李艳1·3顾4蝴2·中国龄医科润大学慌学报J掀Ch炮in些M银edUn款iv第33卷施第3期20伍04年6月疾病T细胞纺亚群CD舞4+况/C扎D8强+耀CD巴4+轮C示D8污+类风砌关（活榆动期南）SL彩E邻-或（活稼动期观）Sj串og垮re遭n综