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文档简介

(1)37℃(2)(2)细胞培养液D-MEM（ gibco成品高糖D-MEM培养液500ml装，自行添加谷氨酰胺5ml、双抗5ml和胎 50ml进行配置）70%～75%的（2.细胞复苏步骤1200r/min1.0ml缓慢二、MDCK细胞传生长成片的MDCKT-25细胞培养瓶高糖D-MEM(gibco生产青、链霉素母液（10,000U/ml青霉素G；10,000µg/ml硫酸链霉素(5).(5).胎 （德国产，无需任何处理/56℃30min灭活补体(7PBS(7PBS缓冲液() ，(95ml、10ml(需配置放置移液枪的支架(10(10).70%～75%2、MDCK(1)(2)(2)加PBS缓冲液适 培养瓶两次，除去残留 孵育细胞瓶直至细胞从塑料表面分离（5～10分钟。必要时可以摇动或吹打9ml完全型D-MEMT-256ml（600,000细胞）悬液，剩余的细胞悬液可以加T-756ml细胞悬液数日可长成片生长的细胞。三、细胞染耗材：维持液：1%谷氨酰胺+1%双抗+TPCK胰1将细胞1:6稀释后，培养与六孔板上（每2ml，孵1天22取出六孔板，弃去上层培养液，加PBS（每孔1- 2遍。900ul样品+100ul三抗混371-1.5h（或4度过夜加于六孔（每孔200ul）作用1-1.5H（37度弃去液2ML维持四、细胞的冻成片的MDCK细胞：细胞生长良好存活率高，80%～90%二甲基亚砜(3(3)完全型D-MEM移液管：5ml，10ml(7)(7)程序降温盒或者可装冻存管的白 冻存液的配 方案一：胎方案一：胎 二甲基亚砜：0.6ml（两者之比方案二：培养液4.2ml，胎 内（每管约1ml。 细胞冻存浓度为1×106方案一：细胞置于程序降温盒，放置-80℃方案二：细胞置方案二：细胞置 盒，放置-80℃过夜，而后放入液氮长期保方案三：4℃2小时，-20℃2培养前准备白大白大衣、手套（小号，不带粉末最好、鞋细胞培养所需试1、生长成片的MDCK细胞及vero（80%～90%2、高糖D-MEM(gibco生产，成品购置3、青、链霉素母液（10,000U/ml青霉素G；10,000µg/ml硫酸链霉素44、胎 （德国产，无需任何处理/56℃30min灭活补体5、L-6、6、PBS缓冲液() ，8、二甲基亚砜99、70%～75% （可喷洒 10、HEPES细胞培养所需耗1、T-25，T-75细胞培养瓶25ml、10ml3、15ml455、程序降温

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