判断推理修改湿地植物提取物对致病性细菌的抑制作用

M.S.MasterInhibitoryEffectsofWetland ntExtractonPathogenicBacteriaCandidate:JiaqiGeSupervisor:Prof.WanhongWeiMajor:：导师：教、作用，因此本研究选用湿地植物芦苇（Phragmitesaustralias）、空心莲子草（Alternantheranuciferabispinosa苦草（Vallisnerianatans）、芡实（Euryaleferox）、辣蓼（Polygonumhydropiper）、酸模dubia）、水芹（Oenanthejavanica）、芙蓉莲（Pisitiastratiotes）、蒲公英（Taraxacummongolicum）、鸭跖草（Commelinacommunis） pescapraesieboldii共36种植物，采用水提取、乙醇提取法提取有效成分，确定它们对金黄色葡萄球菌、（Staphylococcusaureus）、大肠杆菌（Escherichiacoli）、铜绿假单胞菌aeruginosa）、鼠伤寒沙门氏菌（Salmonellatyphimurium）、嗜水气单胞菌（Aeromonas7种细菌的抑菌活性，并从中筛选具有较强抑菌作用的植物提取物，进一步采用不同的溶剂萃取分离，选出抑菌能力最强的萃取物，将其添加至克氏原螯虾（Procambarusclarkii）菱、芡实、辣蓼、、茜草、绶草、毛茛7种植物的乙醇提取物对大肠杆菌有一定的抑制作用；菱、芡实、辣蓼、水芙蓉、、茜草、绶草、毛茛8种植物的乙醇提取物对金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用；菱、芡实、、茜草4种植物的乙醇提取物对沙门氏菌有一定的抑制作用；菱、芡实、辣蓼、、茜草、毛茛6种植物的乙醇提取物对铜绿假单胞菌有一定的抑制作用；空心莲子草、菱、鸭舌草、、茜草、马齿苋、绶草、毛茛、活血丹、藻、芙蓉莲11种植物的乙醇提取物对嗜水气单胞菌有抑制作用；空心莲子草、菱、、茜草、绶草、金钱草、活血丹、马齿苋、菱、茜、芡、4对7细菌有较的菌性，将其醇提物采用不同溶剂进行萃取，发现菱乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物的抑菌效果明200m/mL26.38mm27mm1.00%25.73mm，对副溶血2.25mm0%氯霉素的抑菌效果。15天后，菱乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物组动物的总蛋白的含量、碱性磷酸酶和酸性磷酸酶的活性显著高于对照组动物和毛茛、空心莲子草、鸭舌草、马齿苋、活血丹、藻、蒲公英、繁缕、金钱草菌都有显著的抑菌活性，它可提高动物中总蛋白的含量、碱性磷酸酶和酸性磷酸InhibitoryEffectsofWetland ntExtractonPathogenicBacterM.S.Candidate:JiaqiGeThediscoveryofantibioticsisoneofthegreatachievementsinthefieldofmedicine.Antibioticshasyedanimportantroleintheimprovementofhumanhealthandtheguaranteeoflifesafety,andyedapositiveroleinpromotingthedevelopmentofaquaculture.However,inrecentyears,therearelotsofproblemsinaquaculture,suchastheresiduesofantibioticsinanimalsinducedbytheneglectofthedosage,themedicationtimesandthewithdrawalperiodofantibioticswhenitwasusedMe,theexcessiveintakeofantibioticsorresidueofantibioticsinfoodmadeitconcentrateinhumanbodyandattenuateditseffectonpathogenicbacteria.So,itisurgenttofindothernaturaldisinfectanttoreceantibiotics.Wetlandntsmayhaveauniqueroleinresistingpathogenicmicroorganismsduetotheparticularityoftheirlivingenvironment.Therefore,thisresearchselected36speciesofwetlandntsassubject,theywerePhragmitesaustralis,Alternantheraphiloxeroides,Eichhorniacrassipes,Nelumbonucifera,Trapabispinosa,Vallisnerianatans,Euryaleferox,Polygonumhydropiper,P.lapathifolium,P.Jucundum,Acoruscalamus,Potamogetoncrispus,P.malaianus,Salvinianatans,Ceratophyllumdemersum,Monochoriavaginalis,Hydrillaverticillata,Hydrocharisdubia,Oenanthejavanica,Pisitiastratiotes,HerbaTaraxaci,Commelinacommunis,Solanumnigrum,Lysimachiachristinae,RubiacordifoliaLinn.,Slariamedia,Oxalispescaprae,Zizanialatifolia,Portulacaoleracea,Ranunculussieboldii,Kyllingabrevifolia,Eleusineindica,Glechomalongituba,Equisetumramosissimum,Spiranthessinensis,Alopecurusaequalis.Theiractiveingredientswereextractedbywaterandethanol.Andtheantimicrobialactivityofextrctsagainstsevenkindsofbacteria,suchasStaphylococcusaureus,Escherichiacoli,Pseudomonasaeruginosa,Salmonellatyphimurium,Aeromonashydrophila,AeromonasaeruginosaandVibrioparahaemolyticus,wasdetemined.Then,thentextractswithstrongantibacterialactivitywerescreenedandpurifiedbydifferentsolventextraction.Finally,thentextractswiththestrongestbacteriostaticabilitywereaddedtothefoodofProcambarusclarkiitoobsevertheeffectoftheseextractsaonthesurvivalrateandnon-specificimmunityofProcambarusclarkii,So,theresultsofthisresearchwouldbehelpfultofindnewwaytocontrolbacterialdiseasesandbebenefittoapplysafeadditivesinanimalfood.Theresultswereasfollows.Theethanolextractsof36ntsinhibiteddifferentbacteria.TheextaractsofTrapabispinosa,Euryaleferox,Polygonumhydropiper,Solanumnigrum,Rubiacordifolia,RanunculussieboldiiandSpiranthessinensishadacertaininhibitoryeffectonEscherichiacoli.AndtheextractsofTrapabispinosa,Euryaleferox,Polygonumhydropiper,Solanumnigrum,Rubiacordifolia,Ranunculussieboldii,SpiranthessinensisandPisitiastratiotescouldinhibitStaphylococcusaureus.ThentswhichcouldinhibitthegrowthofSalmonellatyphimuriumareTrapabispinosa,Euryaleferox,SolanumnigrumandRubiacordifolia.AndtheextractsofTrapabispinosa,Euryaleferox,Polygonumhydropiper,Solanumnigrum,RubiacordifoliaandSpiranthessinensiscouldinhibitPseudomonasaeruginosa.AeromonashydrophilawasinhibitedbytheextractsofAlternantheraphiloxeroides,Trapabispinosa,Monochoriavaginalis,Rubiacordifolia,Portulacaoleracea,Spiranthessinensis,Ranunculussieboldii,Glechomalongituba,CeratophyllumdemersumandPisitiastratiotes.AeromonassobriawasinhibitedbytheextractsofAlternantheraphiloxeroides,Trapabispinosa,Polygonumhydropiper,Solanumnigrum,Rubiacordifolia,Spiranthessinensis,Portulacaoleracea,RanunculussieboldiiandGlechomalongituba.TheextractsofAlternantheraphiloxeroides,Trapabispinosa,Solanumnigrum,Lysimachiachristinae,Rubiacordifolia,Portulacaoleracea,RanunculussieboldiiandGlechomalongitubainhibitedthegrowthofVibrioparahemolyticus.Theantibacterialeffectofwaterextractionislessthanthatofethanolextract.TheminimalinhibitoryconcentrationofSpiranthessinensiswaterextractionagainsttoEscherichiacoliwas200mg•mL-1,anditsinhibitionzonediameterwas12.38mm.ThewaterextractsofAlternantheraphiloxeroides,Euryaleferox,HerbaTaraxaci,Solanumnigrum,Slariamedia,andSpiranthessinensishadacertaininhibitoryeffectonAeromonashydrophila.AndthewaterextractsofAlternantheraphiloxeroides,Monochoriavaginalis,HerbaTaraxaci,Slariamedia,Glechomalongituba,SpiranthessinensisinhibitedAeromonassobria.VibrioparahemolyticuswasinhibitedbywaterextractsofAlternantheraphiloxeroides,Monochoriavaginalis,Spiranthessinensis,Slariamedia,GlechomalongitubaandSolanumnigrum.TheethanolextractsofTrapabispinosa,Euryaleferox,Solanumnigrum,Rubiacordifoliawereextractedwithothersolventbecauseoftheirhigherantibacterialactivity.AndwefoundthattheethylacetateextractofTrapabispinosahadobviousantibacteriaeffect.Whenitsconcentrationis200mg•ml-1,itsantibacteriadiameterwas26.38mmtoStaphylococcusaureusand27mmtoVibrioparahaemolyticus,respectively.Theinhibitionzonediameterof1.00%chloramphenicolwas25.73mmtoStaphylococcusaureusand25.25mmtoVibrioparahaemolyticus,respectively.SoitindicatedthattheantibacterialeffectofTrapabispinosaethylacetateextractwassignificantlyhigherthanthatof1.00%chloramphenicol.Thecontentoftotalprotein,activitiesofalkalinephosphataseandacidphosphataseintheethanolextractgroupwassignificantlyhigherthanthoseofthecontrolgroupand1.00%chloramphenicolgroupwhenaddedtheethylacetateextractofTrapabispinosatothefoodofProcambarusclarkiifor15dayslate,anditcouldimprovethesurvivalrateofProcambarusTheresultsshowedthattheantibacterialactivityoftheactiveingredientswasdifferentaccordingtothemethodstheywereextractedandtheantibacterialactivityofthealcoholextractwashigherthanthatofthewaterextract.TheethanolextractofTrapabispinosa,Euryaleferox,Polygonumhydropiper,Pisitiastratiotes,Solanumnigrum,Rubiacordifolia,Spiranthessinensis,Alternantheraphiloxeroides,Monochoriavaginalis,Portulacaoleracea,Glechomalongituba,Ceratophyllumdemersum,HerbaTaraxaci,Slariamedia,Lysimachiachristinaehadacertainantibacterialeffect.TheethylacetateextractofTrapabispinosahadthebestantibacterialactivityandcouldenhancetheimmunityandsurvivalrateofProcambarusclarkii.：Procambarusclarkii;ntextracts;Antibacterialactivity;中 细菌性疾病的危 植物提取物应用于疾病的防治及对水生动物的免疫机 植物提取物对疾病的防 植物提取物对水生动物的免疫机 实验材 供试植 供试菌 实验动 实验仪 实验试剂及其配 实验方 植物提取物及萃取物的植物提取物抑菌活性的测 萃取物对克氏原螯虾非特异免疫能力影响的测 萃取物对克氏原螯虾率影响的测 数据统计与分 植物提取物对动物致病菌的抑菌活 植物提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌活 植物提取物对大肠杆菌的抑菌活 植物提取物对沙门氏菌的抑菌活 植物提取物对铜绿假单胞菌的抑菌活 植物提取物对嗜水气单胞菌的抑菌活 植物提取物对温和气单胞菌的抑菌活 植物提取物对副溶血弧菌的抑菌活 植物萃取物对动物致病菌的抑菌活 植物萃取物对金黄色葡萄球菌的抑菌活 植物萃取物对大肠杆菌的抑菌活 植物萃取物对铜绿假单胞菌的抑菌活 植物萃取物对副溶血弧菌的抑菌活 植物萃取物对温和气单胞菌的抑菌活 植物萃取物对嗜水气单胞菌的抑菌活 菱乙醇提取物、乙酸乙酯萃取物对克氏原螯虾非特异性免疫的影 植物萃取物对克氏原螯虾存活率的影 植物提取物对动物致病菌的抑菌作 菱乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物对克氏原螯虾免疫力的影 扬州大学性 使用 类之间广泛（韩果方和,2003），造成的危害日益加剧。龙等（2010）对恒河猴（Macacamulatta）进行细菌染，观察脏器的病理学变化，发现沙门氏菌（Salmonella）可使脏器出现伤寒肉芽肿，结核杆菌（Mycobacteriumtuberculosis）可使脏器出现结核肉芽肿，志贺菌（Shigella）和空肠弯曲菌（Campylobacterjejuni）可使动物表现出急性炎和浅表性溃疡等症状。在肉鸭养殖过程中，大肠杆菌（Escherichiacoli）病、巴娟等,2015）。鸡大肠杆菌是一种条件原微生物，机体抵抗力下降时细菌的致病性使的鸡发病，并引起某些传染病的并发病或继发病（杜永庆等2015）。水产养殖中，水产动物易细菌性疾病、性疾病、营养性疾病等诸多病原菌，而细菌性疾病是其中最重要的类群，所造成的经济损失约占全部疾病所造成的经济损失的一半以上（等,2013）。世界第一水产养殖国家，每年的养殖产量为世界养殖总产量的70%左右,细菌性疾病在密集型的养殖体系中的极高，已经严重影响我国水产养殖业的可持续发展（月等,2015）。细菌性疾病具有病原种类多、暴发频率高、病原菌耐药性强和防（Aromons葡萄球菌（Staphylococcusaureus）和大肠杆菌等共患的细菌及其的危害进行综述的海水和海洋动物体内，是一种导致多种淡水虾及鱼类的致病菌。弧菌对淡水鳌虾的是全身性的，尤以肝胰腺最为严重（EavesandKetterer,1994）。对（Litopenaeusvannamei）是我国养殖面积最大、产量最高的虾种，但因其饵料、残骸和排泄物的积累，使育苗水质，导致细菌大量滋生，极易诱导弧菌病害暴发，造成幼体大的损失（Fanetal.,2006）；2007年地区南美白对虾（Penaeusvanname)红体病发病率达到95%，率达100%，造成巨大经济损失（,2009）。Himmel等（2010）的研究，拟态弧菌(Vibriomimicus)可引起淡水龙虾的直接大面积。等japonicus）烂鳃、烂尾病的病原菌为鳗弧菌（V.Anguillarum）。副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)主要存在水中,附着于海洋生物的体表生长繁殖；进食未煮透的了副溶血弧菌的食物后,可引起胃肠黏膜的急性炎症反应（等,2008），表现出腹绞痛、腹泻、、发烧、寒颤、等临床症状（HondaandIida,1993）。溶藻弧菌（V.alginolyticus）是牙鲆（Paralichthysolivaceus）和鳗鲡（Anguillajaponica）等许多名贵鱼类发生细菌性疾病的主要病菌（Chenetal.,2006），它也是引起人肠道炎、伤口感1983；Labreucheetal.,2006）。气单胞菌（Aeromonas）属革兰氏菌（JandaandAbbott,2010），广泛分布于水体立或者混合多种水产动物，且危害程度高于其它细菌性疾病，已经成为我国淡水水产养殖业发展的主要因素（,2007）。维氏气单胞菌（Aeromonasveronii）存在于水体和淤泥等环境中，它可斑点叉尾鮰（Ictaluruspunctatus）（Huangetal.,2010），（Li,2002）。吴雅丽等（2013）认为，中华鳖（Trionyxsinensis）（Ctenopharyngodonidellus）的细菌性肠炎均与气单胞菌的密不可分。嗜水气单胞（A.hydrophila）、豚鼠气单胞菌（A.caviae）及温和气单胞菌（A.sobria）等是多种水产动物的病原菌。嗜水气单胞菌与鱼类和甲壳类的疾病有关，同时可引起人类的疾病发生（Tulsidasetal.,2008）；嗜水气单胞菌可引起虾的败血症、鱼类的细菌溶血性腹水研究表明，嗜水气单胞菌可通过饮水、皮肤等多种途径机体，对机体的不同造成损伤；Ouagilo等（2006）认为，淡水龙虾出现体色变暗、腮腺变黄、肝胰腺萎缩等腐皮病、溶血性腹水病等均由温和气单胞菌（祥和,2002），其和孙（2002）的研究表明，温和气单胞菌能够引起罗非鱼(Oreochromisniloticus)性败血症；等（2009）认为，温和气单胞菌引起异育银鲫（CarassiusauratusGibelio.）患病，表现为皮肤溃烂、鳍条及鳃盖等身体表面，并使其大量；该菌亦可以使人患病，引起食物和胃肠，出现腹泻、、中耳炎、、胆管炎、脑膜炎等病症，造成血管内因产生大量气体而使动物（Yukioetal.,2003）。豚鼠气单胞菌会引起白鲢（Hypophthalmichthysmolitrix）的腐皮病、鲤鱼（Cyprinuscarpio）的竖鳞病（安等,1998）、鲫鱼（Carassiusauratus）的性败血症等（等,2003）；克氏原螯虾豚鼠气单胞菌后，出现暴发性，虾体全身发红，头胸部形成积液，肝胰腺发生腐烂（等,2014）。和（2014）从体表鳞片少量脱落、胸腹鳍尾部轻血、腹腔内有淡黄色积液、肝脏严重充血的发病鲈鱼（Lateolabraxjaponicus）中分离到豚鼠气单胞菌；毓等（2012）对南方鲇（Silurusmeridionalis）致病性和病理损伤的研究表明，豚鼠气单胞菌对南方鲇的半致死剂量（LD50）0.29mg，溶血素具有较强的毒金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）是自然界常见的致病菌，常引起人和动物皮肤软组织、败血症、脓毒血症、心内膜炎、脑膜炎及导管相关染等多种疾病（李丽民等,2014；等,2015）。金黄色葡萄球菌是一种需氧或兼性厌氧革兰氏阳性球型萄球菌引起的食物屡见不鲜，2000年由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的事件致使14000多人（,2004)，河北的为21.2%（108/510）(Suoetal.,2008)，的为21.2%（44/204）；金黄色葡萄球菌在生奶、生肉与水产品2004）。和（2007）将分离的葡萄球菌注射到健康鸡的肌肉中，20小时后注病原的主要细菌，它致病力强，速度快，常出现多重耐药性和交叉，治疗大肠杆菌（Ehihiaoli）及等病大菌特力编应毒白。年，由性大肠杆菌引起的毒黄瓜”席卷整个欧洲，造成12个国家近290030,201203）采用琼脂稀释法测定了不同动物来源的大肠杆菌对157%%的率达到72%，对养禽业造成重大经济损失（学,2007）。等（2009）研究表明，动源大肠杆菌的耐药性更为广泛，其耐药强度耐性，人禽肠的可相禽家的可过肉其品到。菌环星药超%，对左（Phillipsetal.,2004）世纪初人类发明青霉素以来，许多性疾病得到了有效的控制，青霉素对人类健康水平的提高和生命安全的保障起到了极其重要的作用（和,2010）。但是，在抗用逐渐增加，对公众的健康造成了潜在危害（等,2004）具有丰富的植物资源，应用植物药来防治疾病有着悠久的历史(宋理,2005)。植物药抗应激能力（和马小能,2005），因此植物药的开发和利用受到国内外学者的广泛细菌性和真菌性疾病是日常生活中最常见的疾病，共患病的病原体主要包括细菌、、、真菌、立克次体和衣原体，其中以细菌和诱发病源的的比例最高（林立峰等,2007）。在水产行业中，真菌疾病有水霉病、鳃霉病、链壶菌等，细菌性一年蓬（Erigeronannuus）为菊科（Asceae）二年生草本植物，分布范围广（等,抵抗多种气体及烟尘，叶可入药，用于主治高血压（等,2001）；一年蓬和广玉兰的提取物对棉花枯萎病菌具有较强的抑菌作用，而且对孢子萌发的抑制作用可达用蕨类多有清热解毒、舒筋活络、抗菌消炎、消肿散淤等功效（丁恒山等,1982），许柑叶等（2005）的研究发现，蕨类水提物对啤酒酵母菌有明显的抑菌作用；伞形科麦纹枯病菌菌丝的生长（胡林峰等,2012）；紫苏（Perillafrutescens）为传统常用中药，是唇形科紫苏属一年生草本植物（等,2005），紫苏叶具有解表散寒，行气和养胃功效，紫苏梗具有理气、止痛作用（郑万均等,1983），紫苏子具有降气消、平喘、润肠效；紫苏、鸭跖草石油醚和乙酸乙酯叶提取物对志贺氏菌（ShigellaCaslani）、枯草杆菌（Bacillussubtilis）有较强的抑菌作用；陆风（2009）紫茉莉（Mirabilisjalapa）根的功效，叶有利尿作用，有溶血和凝血成分（,1982）；等（2011）利用索氏抽提乙醇回流法获得泽漆（Euphorbiahelioscopia）提取物，它对大肠杆菌的抑制作用最强，野老鹳草（Geraniumcarolinianum）提取物对枯草芽孢杆菌的抑制作用最强；（Lonicerajaponica）中的绿原酸对食品致病菌具有一定的抑菌活性，对不同菌种抑菌活性不同，对大肠杆菌的抑菌最强，其次为黑曲霉（Aspergillusniger）。有关水生致病（2001）究（Liquidambarformosana）叶进行水煎煮投洒或混合饵料饲喂鱼类，赤霉菌的明显（2008bialniointali大黄（Rheumpalmatum）可以防治虾、蟹、鳖等水产动物的烂鳃病、烂尾病、腐皮等细菌性疾病；龙须菜（Gracilarialemaneiformis）乙酸提取物可以降低链球菌，提高罗非鱼的存活率(Abutbuletal.2005)；马齿苋对鳝鱼（Monopterusalbus）水霉病有预防和治疗作用（，2008）；唇形科的植物用于控制鱼类的疾病效果明显（Bulfonetal.,2014）。蒽醌类、生物碱、挥发油等（和涂瑶生,2009），它们可以提高动物的体液免疫的体水平，增强巨噬细胞的吞噬功能，激活T、B淋巴细胞，诱导产生多种细胞因子等途径来提高机体的免疫力，增强动物的抗病能力（Tanetal.,2015）。究水生动物的免疫系统主要由细胞免疫和体液免疫组成。（2010）研究表明，甲液免疫包含抗蛋白酶、凝集素、溶菌酶、转移因子以及补体等（Ellis,1999;,2012）。是细胞免疫重要组成部分（Johanssonetal.,2000）。鱼类的细胞免疫涉及非特异免疫，它包含吞噬细胞的呼吸暴发、吞噬和杀菌等（孙德文等,2002）。于爱清（2014）研究表明，病原菌虾类等甲壳动物的巴后，它们会通过细胞免疫作用被清除，等黄酮类化合物（flavonoidscompounds）是植物中最广泛分布的一类多酚化合物，是重要的植物次生代谢物（Morimotoetal.,2003）。延玺等（2008）研究表明，黄酮类种类繁多，有抗氧化、抗菌、抗、抗炎、抗过敏等功能，对增强动物的免疫力有重要的作效；在饲料中添加黄芩苷有利于提高罗非鱼总抗氧化能力、碱性磷酸酶及溶菌酶的活物对金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌具有较强的抑菌效果（和,2008）。作为自由基的抗氧化剂之一，黄酮类化合物可以有效细胞的损伤，通过抗氧化和抗自由基、抑制癌细胞生长因子、抗因子、抑制血管生成等发生作用，从而达到防癌、抗癌的功效（等,2003）。科、百合科等植物中（盼等,2016）。蒽醌类化合物抑菌的机制是依赖抑制菌体糖和（和,2012）。Asma等（2010）研究表明，从芦荟（Aloevera）中提取的蒽醌类化合物对由细菌引起的皮肤具有明显的抑制作用，其抑菌效果比抗生素更为显著。康文艺等（2009）首次利用DPPH法从茜草中分离得到蒽醌及其苷类化合物化，抗氧化化等作用。从大黄中提取的蒽醌类化合物能提高沼虾的总抗氧化活性、碱性磷酸酶、溶菌霉活性，对其免疫能力有显著的提高（Linetal.,2010）。（等,2009）。和（2006）发现，丁香（Syringaoblat）挥发油对肠炎沙门菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌有抑制作用，也具有抗、清除氧自由基的功能毒具有明显的抑制作用，浓度在31.25mg/mL时即能达到抑制的增殖，浓度在250mg/mL时对鸡胚内流感有4倍的抑制作用。等（2009）利用水蒸气蒸馏法色谱法对其成分进行分析，郁金挥发油对金黄色葡萄球菌、球菌（Micrococcustetragenus）、大肠、枯草杆菌（Bacillussubtilis）均有明显抑制作用。和遥（2007）发现陈皮（Citrusreticulata）andHastings,1998;Cabello,2006）。但抗生素的使用导致许多细菌产生抗药性，抗生素对红霉素和链霉素产生了多重耐药性，导致斑节对虾因哈氏弧菌的引起大量的（Karunasagaretal.,1994）；水产养殖中残留的抗生素可以改变内正常的肠道菌群，从而对产生过敏及毒理学效应（Cabello,2006）。随着现代医学的快速发展，医疗模式已由单纯的疾病治疗转变为预防、、治疗、康复相结合的模式（,2001）。在水产饲料中添加植物性的添加剂可以有效防治细菌性疾病（等,2000）。植物药具副作用小、残留物少、对环境污染程度优点，所以从植物中提取和筛选具有明36种扬州市区典型的湿地植物，利用天然植物提取技术，筛选对嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、副溶血弧菌、金黄色葡萄球菌7种细菌扬州市公道镇；眼子菜、黑藻、水芙蓉购于宿迁室内水生植物栽培馆。将选用的植物136Table136ntsspeciesuedintheSolanum4.Nelumbo5.TrapaRubiaSEuryalePolygonumZizaniaP.AlopecurusP.jucundumSpiranthesAcorusPortulacaSalvinia藻MonochoriaEleusineHydrillaGlechomaHydrocharisOenantheHerba本实验供试菌株包括嗜水气单胞菌（A.hydrophila）、温和气单胞菌（A.sobria）、.（Escherichiacoli）、铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）、鼠伤寒沙门氏菌其它菌株均由扬州大学江苏省人畜共患病提供。克氏原螯虾购于扬州市杨寿镇。选择健康、规格重量基本一致（15~20g）的动物22植物机 泰斯特仪器R系列旋转蒸发器 上海申生科技有限公司EYELA-CCA-111冷凝机爱朗仪器EYELA-OSB-2100水浴锅爱朗仪器EYELA-N-1100旋转蒸发仪爱朗仪器SHB-3循环水真空泵 申生科技SHELLAB水浴 SW-CJ-2HD超净工作 QYC2102恒温摇 ThermoScientific公司 5417R型高速冷冻离心机 Eppendoff公司752N紫外可见分光光度计 Epoch酶标仪 Biotek公司GHX9160B-1培养 pH7.4，超纯水定容到100mL。琼脂10g，pH7.4，超纯水定容到500mL。纯水定容到100mL。pH7.2，超纯水定容到500mL。考马斯亮蓝G-250、4.7%（w/v）乙醇、8.5%（w/v）磷酸。M的盐酸:16.7mL1000mL加1g叠氮化钠防腐，保存于冰箱。并加蒸馏水至1L，置棕色瓶中保存。3-4次，合并滤液；利用旋转蒸发仪减压浓缩至粘稠状，即萃取物的：分别取上述每种溶剂提取的提取物30g，各按1:10的比例用蒸馏水溶每种溶剂萃取3-4次后合并同种萃取液，用旋转蒸发仪减压浓缩至粘稠状，即得各种萃取上，28℃、150rpm18-22h，再用麦氏比浊法测出液体培养基的浓度，将浓度稀释至106cfu/mL。200mg/mL、100mg/mL、50mg/mL、25mg/mL12.5mg/mL的药液。同采用滤纸片法测定不同提取物的不同浓度对7种菌的抑菌圈直径。选用定性滤纸，用6mm的圆形纸片，12120min，60℃烘干，用无菌镊子分别夹取到不同提取物、不同浓度的药液中浸泡24h；用移液枪吸取15μL菌悬液涂布含药琼脂的：将每种植物的各类提取物用二甲基亚砜配制成1g/mL的母液，然后用二甲基亚砜将其稀释为200mg/mL、100mg/mL、50mg/mL、25mg/mL、12.5mg/mL5个浓度梯度;1mL90mm的培养皿内做好种菌悬液15μL（含菌量约106cfu/mL）。2936h，观察并记录实验结果。若无菌群力影响。将提取物和萃取物分别按基础饲料质量的1.00%添加至预先的上述配合饲料素氯霉素按基础饲料的1.00%添加至预先的上述配合饲料中，然后重新制成含有氯霉础饲料空白对照组，每组35只克氏原螯虾，不同的组饲喂不同添加物的饲料。实验箱底饵料略有剩余为准，每天换水并吸污以保证水质，饲喂实验持续15d。标准曲线绘制10ml5mL的考马斯亮蓝染液，然后在各管1.0、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5mLpH6.40.1M的磷酸钾盐缓冲液，然后各管再测定595nm处的吸光值，即得吸光值，并制作蛋白含量的标准曲线。2min595nm处吸光值，根据标准采用磷酸苯二钠法测定磷酸酶活性（2）。以磷酸苯二钠为底物，由碱性磷酸酶催5 铁化钾溶液(Potassiumferricyanide,5 以柠檬酸缓冲液替代碳酸盐缓冲液，3760min，酸性磷酸酶的活性单位定或每克样液蛋白所含酚的mg数来表示。将上述实验的，在饲喂不同组饲料15d后，对每个从第2-3腹节间肌肉注射和48小时统计动物的率。SPSS16.036种醇提物中，只有菱、芡实、辣蓼、水芙蓉、、茜草、绶草和毛茛8种植物的乙醇提取物对金黄色葡萄球菌有抑制作用（3）；200mg/mL时，菱、、茜草、毛茛的抑菌活性较强，其抑菌圈直径均显著大于其它植物提取物的抑菌圈直径（P<0.05）（1）；辣蓼和芙蓉莲醇提物的抑菌活性相对较弱，当它们的浓nt nt TrapabispinosaEuryaleferoxPisitiastratiotesSolanumnigrumRubiacordifoliaSpiranthes注:6mm的琼脂孔;标有相同字母的数据表示没有显著差异，标有不同字母的差Note:Inhibitionzonediametercovers6mmofagarhole.Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05. Pistia菱

RubiaFig.1InhibitionzoneofethanolextractsfromTrapabispinosaPisitiastratiotes,Rubiacordifolia,RanunculussieboldiiagainstStaphylococcusaureus Polygonum Pisitia图2辣蓼、芙蓉莲乙醇提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径Fig.2InhibitionzoneofethanolextractsfromPolygonumhydropiper,PisitiastratiotesagainstStaphylococcusaureus芡实、辣蓼、、茜草、绶草、毛茛7种植物的乙醇提取物对大肠杆菌有抑制作用种植物的水提物在浓度为200mg/mL时对大肠杆菌具有抑制作用，其抑菌圈直径为nt nt 浓度TrapabispinosaEuryaleferoxSolanumnigrumRubiacordifoliaSpiranthessinensisRanunculus注:6mm的琼脂孔;标有相同字母的数据表示没有显著差异，标有不同字母的差Note:TInhibitionzonediametercovers6mmofagarhole.Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05.

SpiranthesFig.3InhibitionzoneofextractsfromRanunculussieboldii,Trapabispinosaethanolextract,SpiranthessinensiswaterextractagainstEscherichiacoli4种植物的乙醇提取物对沙门氏菌有抑制作用（表5），菱、芡实、、茜草抑菌活性11.50mm35种植物的水提取物在浓度为200mg/mL时也均未表现出对沙门氏菌的抑菌作用。nt nt Solanum TrapabispinosaEuryaleferoxRubia注:6mm的琼脂孔;标有相同字母的数据表示没有显著差异，标有不同字母的差Note:Inhibitionzonediametercovers6mmofagarhole.Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05.

Rubia

Spiranthes

Fig.4InhibitionzoneofextractsfromTrapabispinosa,Pisitiastratiotes,Rubiacordifolia,Euryaleferoxethanolextract,SpiranthessinensisWaterextractagainstSalmonellatyphimurium种植物的水提物中，在浓度为200mg/mL时也均未表现出对铜绿假单胞菌的抑菌作用。心莲子草、菱、鸭舌草、、茜草、绶草、马齿苋、金钱草、毛茛、活血丹、的水提物中，空心莲子草、茜草、、绶草、繁缕、蒲公英6种植物的水提物对嗜水气单胞菌有抑菌作用（8）。芡实和绶草的抑菌活性最强；繁缕和蒲公英的抑菌活性最弱nt nt TrapabispinosaEuryaleferoxSolanumnigrumRubiacordifoliaRanunculus注:6mm的琼脂孔;标有相同字母的数据表示没有显著差异，标有不同字母的差Note:Inhibitionzonediametercovers6mmofagarhole.Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05.菱

Solanum

PolygonumFig.5InhibitionzoneofextractsfromTrapabispinosa,Pisitiastratiotes,Ranunculussieboldii,PolygonumhydropiperethanolextractagainstPseudomonasaeruginosant nt AlternantheraphiloxeroidesTrapabispinosaMonochoriavaginalisSolanumnigrumRubiacordifoliaPortulacaoleraceaSpiranthessinensisLysimachiachristinaeRanunculussieboldiiGlechomalongituba注:6mm的琼脂孔;标有相同字母的数据表示没有显著差异，标有不同字母的差Note:Inhibitionzonediametercovers6mmofagarhole.Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05.3636种醇提物中，空心莲子草、菱、、茜草、绶草、金钱草、活血丹、马齿苋、毛茛、辣蓼10种植物的乙醇提取物对温和气单胞菌有抑制作用（表9）。、茜草、绶草、活血丹、36种植物的水提物中，空心莲子草、鸭舌草、子草水提物的抑菌活性最强芡实和绶草的抑菌活性最强（9）29种植物的水提取在浓度为200mg/mL时仍无法检测出对嗜水气单胞菌的抑菌活性。 SpiranthesRubia

菱

GlechomaFig6InhibitionzoneofethanolextractsfromTrapabispinosa,Pisitiastratiotes,Ranunculussieboldii,Portulacaoleracea,Rubiacordifolia,GlechomalongitubaethanolextractagainstAeromonashydrophilant nt EuryaleferoxSolanumnigrum laria Herba 注:6mm的琼脂孔;标有相同字母的数据表示没有显著差异，标有不同字母的差Note:Inhibitionzonediametercovers6mmofagarhole.Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05. laria

Spiranthes

Euryale

HerbaFig.7InhibitionzoneofwaterextractsfromSpiranthessinensis,Euryaleferox,S media,HerbaTaraxacigainstAeromonashydrophilant nt AlternantheraphiloxeroidesTrapabispinosaSolanumnigrumRubiacordifoliaSpiranthessinensisLysimachiachristinaeSpiranthessinensisPortulacaoleraceaRanunculussieboldiiPolygonum注:6mm的琼脂孔;标有相同字母的数据表示没有显著差异，标有不同字母的差Note:Inhibitionzonediametercovers6mmofagarhole.Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05.Solanum

Rubia Glechoma

Fig.8InhibitionzoneofethanolextractsfromSolanumnigrum,Ranunculussieboldii,Pisitiastratiotes,Rubiacordifolia,GlechomalongitubaagainstAeromonassobriant nt SpiranthessinensisSolanumnigrumHerbaTaraxaciSlariamedia注:6mm的琼脂孔;标有相同字母的数据表示没有显著差异，标有不同字母的差异Note:Inhibitionzonediametercovers6mmofagarhole.Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05. Herba Solanum

Glechoma Spiranthes

Fig.9InhibitionzoneofwaterextractsfromSpiranthessinensis,Alternantheraphiloxeroides,HerbaTaraxaci,Glechomalongituba,SolanumnigrumagainstAeromonassobria36种植物的水提物和醇提物对副溶血弧菌的抑菌实验表明，在36种醇提物中，空心莲子草、菱、、茜草、绶草、金钱草、活血丹、马齿苋8种植物的乙醇提取物对副溶血弧菌有抑制作用（表11）。、毛茛、空心莲子草、菱、茜草、活血丹的抑菌活性较强（10）；28200mg/mL时仍无法检测出对副溶血弧菌的抑菌活性。在36种植物的水提物中，空心莲子草、菱、绶草、繁缕、、200mg/mL19.00mm200mg/mL

nt nt 菱 RubiaPortulacaoleraceaGlechomalongituba注:6mm的琼脂孔;标有相同字母的数据表示没有显著差异，标有不同字母的差Note:Inhibitionzonediametercovers6mmofagarhole.Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05. Glechoma Solanum

Rubia

菱

Fig.10InhibitionzoneofethanolextractsfromRanunculussieboldii,Alternantheraphiloxeroides,Rubiacordifolia,Glechomalongituba,Solanumnigrum,Trapabispinosaethanolextractagainstnt nt TrapabispinosaSpiranthessinensisSolanumnigrum lariaGlechoma注:6mm的琼脂孔;标有相同字母的数据表示没有显著差异，标有不同字母的差Note:Inhibitionzonediametercovers6mmofagarhole.Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05.菱

Fig.11InhibitionzoneofwaterextractsfromSpiranthessinensis,S lariamedia,Glechomalongituba,TrapabispinosaagainstVibrioParahemolyticus.植物提取物对动物致病菌的抑菌活性实验表明，芡实、菱、茜草和的乙醇提取物312种萃取物和抗200mg/mL时对金黄色葡萄球菌的抑菌活性显著霉素最低抑菌浓度和最小杀菌浓度为2.5mg/mL。 ExtractantandPetroleumetherextractantofethanolextractfromEuryaleferoxextractfromEuryaleN-butanolextractantofethanolextractfromEuryaleferoxextractfromTrapaextractfromTrapaextractfromTrapaextractfromRubiaEthylAcetateextractantofehanolextractfromRubiacordifoliaextractfromRubiaextractfromSolanumextractfromSolanumextractfromSolanum1.00%注:6mm的琼脂孔;标有相同字母的数据表示没有显著差异，标有不同字母的差Note:Inhibitionzonediametercovers6mmofagarhole.Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05.表14植物乙醇提取物的萃取物对金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度（MIC)Table14MinimuminhibitoryconcentrationoftheextractantsfromethanolextractagainstExtractantandExtractantand 5Petroleumetherextractantofethanol -﹢﹢﹢fromEuryaleEthylAcetateextractantofehanolextract ﹢﹢﹢﹢EuryaleN-butanolextractantofethanolextract ﹢﹢﹢﹢EuryalePetroleumetherextractantofethanol ﹢﹢﹢﹢fromTrapaEthylAcetateextractantofehanolextract -﹢﹢﹢TrapaN-butanolextractantofethanolextract ﹢﹢﹢﹢TrapaPetroleumetherextractantofethanol ﹢﹢﹢﹢fromRubiaEthylAcetateextractantofehanolextract ﹢﹢﹢﹢RubiaN-butanolextractantofethanolextract ﹢﹢﹢﹢RubiaPetroleumetherextractantofethanol ﹢﹢﹢﹢fromSolanumEthylAcetateextractantofehanolextract ﹢﹢﹢﹢SolanumN-butanolextractantofethanolextract ﹢﹢﹢﹢Solanum1.00%氯霉 --﹢﹢ 1.00%注：“-”“+”表示平板上有细菌生长。Note：meansnoantibacterialactivity;meansgrowthofbacteria.ExtractantandExtractantand 5Petroleumetherextractantofethanol -﹢﹢﹢fromEuryale.EthylAcetateextractantofehanol ﹢﹢﹢﹢fromEuryaleN-butanolextractantofethanolextract ﹢﹢﹢﹢EuryalePetroleumetherextractantofethanol ﹢﹢﹢﹢fromTrapaEthylAcetateextractantofehanol -﹢﹢﹢fromTrapaN-butanolextractantofethanolextract ﹢﹢﹢﹢TrapaPetroleumetherextractantofethanol ﹢﹢﹢﹢fromRubiaEthylAcetateextractantofehanol ﹢﹢﹢﹢fromRubiaN-butanolextractantofethanolextract ﹢﹢﹢﹢RubiaPetroleumetherextractantofethanol ﹢﹢﹢﹢fromSolanumEthylAcetateextractantofehanol ﹢﹢﹢﹢fromSolanumN-butanolextractantofethanolextract ﹢﹢﹢﹢Solanum1.00%氯霉 --﹢﹢ 1.00%注：“-”“+”表示平板上有细菌生长.Note：meansnoantibacterialactivity;meansgrowthofbacteria200mg/mL1.00%氯霉素为5mg/mL，茜草乙醇提取物乙酸乙酯萃取物最低抑菌浓度和最小杀菌浓为10mg/mL，1.00%氯霉素最低抑菌浓度和最小杀菌浓度为5mg/mL。Extractantand Petroleumetherextractantof extractExtractantand Petroleumetherextractantof extractfromEuryaleEthylAcetateextractantof extractfromEuryaleN-butanolextractantof extractfromEuryalePetroleumetherextractantof extractfromTrapaEthylAcetateextractantof extractfromTrapaN-butanolextractantof extractfromTrapaPetroleumetherextractantof EthylAcetateextractantof extractfromRubiaN-butanolextractantof extractfromRubiaPetroleumetherextractantof extractfromSolanumEthylAcetateextractantof extractfromSolanumN-butanolextractantof extractfromSolanum 1.00% 注:6mm的琼脂孔;标有相同字母的数据表示没有显著差异，标有不同字母的差Note:Inhibitionzonediametercovers6mmofagarhole.Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05.Extractantand ﹢ ﹢extractfromEuryaleEthylAcetateextractantofehanol fromEuryale﹢﹢﹢﹢N-butanolextractantofethanol ﹢﹢﹢﹢fromEuryalePetroleumetherextractantof ﹢﹢﹢﹢extractfromTrapaEthylAcetateextractantofehanol ﹢﹢﹢﹢fromTrapaN-butanolext