广西临检中心 微生物质量控制会议课件 肺炎病原学检查方法

肺炎病原学检查方法广西壮族自治区人民医院呼吸内科秦志强TEL13978840819FAXMAIL：qinzhiqiang148@主要内容¾病原体分离¾抗原抗体检测¾病原体基因检测用于病原体分离的标本¾

上呼吸道冲洗液和印片¾

痰液–

普通采痰–

诱导采痰–

深部吸痰¾

血液¾

胸水¾

支气管肺泡灌洗液病原体分离方法¾涂片染色直接观察–

痰液或者上呼吸道分泌物¾培养–

各种标本：痰液，血液，支气管灌洗液，胸水①上呼吸道标本—鼻咽冲洗液、印片¾主要用于传染性非典型肺炎（SARS）和人感染高致病性禽流感¾检测方法：病毒分离¾优点：采集方便，早期即可获得诊断¾缺点：代表性差NEnglJMed,2003,348:1953-66.NEnglJMed,2004,350:1179-88.上呼吸道标本—鼻咽冲洗液、印片¾SARS–

病毒分离阳性率低（3／15）¾人感染高致病性禽流感–

病毒分离阳性率低（1／10）NEnglJMed,2003,348:1953-66.NEnglJMed,2004,350:1179-88.②痰液病原体分离——采痰方法¾普通喀痰–

方便，普遍应用，污染可能性大¾诱导采痰–

5%氯化钠溶液5ml雾化吸入，成功率72%¾导管吸痰–

喀痰困难或者人工气道患者(气管插管，气管切开）临床护理杂志,2008,7(5):76-77.普通喀痰细菌培养¾

阳性判断标准：107¾

阳性率低CUF／ml–

63例痰培养20例(31.7%)阳性–

610例痰培养195例(32.0%)阳性–

299例痰培养93例(31.1%)阳性¾

病原体构成中非细菌因素CHEST,

2007,

131:779–787.中华结核和呼吸杂志，2006，29(1):3-8.山东医药,2008,48(34):61-62.痰培养可靠性¾60例CAP患者同时进行肺穿刺和痰液检查¾经胸腔穿刺灌洗培养阳性率50.0%(30/60)¾痰培养阳性率36.7%(22／60）¾痰培养阳性占穿刺阳性病例70.0%(21/30)¾痰培养与穿刺细菌符合率30.0%(9/30)Internal

Medicine,2001,

40:

873-877③导管气管深部吸痰¾

插入无菌导管至气管远端吸痰¾

定量培养≥105cfu/mL¾

20例经纤支镜诊断的VAP患者18例阳性（90%）¾

19例纤支镜检查阴性的VAP中6例（31%)假阳性¾

与纤维支气管镜采集标本比较：Kappa＝0.638J

Trauma.

2005,

59(4):891-895.④纤维支气管镜检查¾方法：保护性毛刷，支气管灌洗液¾优点：污染相对较少¾缺点：有创性检查¾定量培养判断标准：–

保护性毛刷：103CUF／ml–

支气管灌洗液：105CUF／ml纤维支气管镜灌洗液培养¾纤支镜下灌洗：NS

20ml灌洗后回收¾定量培养：≥105cfu/mL¾阳性率51.2%（20／39

可疑VAP）J

Trauma.

2005,

59(4):891-895.⑤经胸腔细针穿刺采集标本¾10ml注射器抽取5ml生理盐水¾注入4ml（留1ml在注射器）后回抽1ml或以上¾标本注入血培养基送检¾培养阳性率50%(30/60)–

先前抗菌药物治疗者39.2%(9/23)–

先前无抗菌药物治疗者56.8%(21/37)Internal

Medicine,2001,

40:

873-877经胸腔细针穿刺采集标本培养可靠性¾以PCR作为金标准¾5ml注射器含生理盐水2.5ml，注入1.5ml后持续负压吸引状态下拔针¾肺炎链球菌PCR阳性者细针穿刺培养阳性率56.3%(9/16)¾复合度好–

9例中只有1例两种方法细菌不同Clinical

Infectious

Diseases

2002;

34:583–90⑥血培养¾

与经胸腔穿刺培养比较–

阳性率13.3%(血培养／穿刺培养阳性＝4／30）–

细菌符合率高(4/5)¾

CAP血培养阳性率低–

165例血培养19例(11.5%)阳性–

84例血培养4例(4.8%)阳性Internal

Medicine,2001,

40:

873-877CHEST,

2007,

131:779–787.山东医药,2008,48(34):61-62.⑦胸水培养¾8例CAP仅1例阳性Respiration

2007;74:387–393主要内容¾病原体分离¾抗原抗体检测¾病原体基因检测抗原抗体检测标本¾血清¾胸水¾尿液血液检查¾抗原检测–

肺炎链球菌抗原阳性率35.8%(EIA法)，菌血症患者45%¾抗体检测–

主要用于SARS和非典型病原体（肺炎支原体、衣原体和军团菌）–

早期测定IgM阳性或者恢复期抗体滴度较早期升高4倍J

Infect.

2006,53(1):21-4.J

Korean

Med

Sci

2006;

21:

602-7血液抗体检测注意事项¾抗体产生时间¾抗体分类¾抗体阳性的价值胸腔积液¾胸腔积液肺炎链球菌抗原测定–

敏感性：79%–

特异性：93.6%.¾同时胸水肺炎链球菌分离阳性Clin

Microbiol

Infect,

2006,

12:

682–684胸水肺炎链球菌抗原与其它方法比较血培养

胸水培养

胸水抗原

尿抗原12/3211/3424/34

23/28(37.5%)

(32.3%)

(70.6%)

(82.1%)敏感性：70.6%特异性：93.3%CHEST

2007;

131:1442–1447尿液¾肺炎链球菌抗原¾敏感性：59%~87%¾特异性：80%~99%Respiration

2007;74:387–393CLIN.

VACCINE

IMMUNOL.

2006,13(10):1092–1097主要内容¾病原体分离¾抗原抗体检测¾病原体基因检测病原体基因检测的标本¾上呼吸道冲洗液和印片¾痰液¾血液¾胸水¾支气管肺泡灌洗液上呼吸道标本—鼻咽冲洗液、印片¾SARS–

基因测定阳性率高（11／12）¾人感染高致病性禽流感–

基因测定阳性率高（10／10）NEnglJMed,2003,348:1953-66.NEnglJMed,2004,350:1179-88.痰液肺炎链球菌实时PCRJ

Microbiol

immunol

Infect,

2006,39:452肺炎链球菌PCR检测与其它方法比较Clinical

Infectious

Diseases

2002;

34:e1–11肺炎链球菌CAP检查方法比较¾血培养：15%(27/179)¾尿肺炎链球菌抗原：20%(33/169)¾痰培养：15%(19/128)¾痰实时定量PCR：27%(34/127)¾34例痰PCR阳性者，其它方法检测肺炎链球菌阳性，但痰培养17例阴性Diagn

Microbiol

Infect

Dis.

2008,

60(3):255-61.多种标本肺炎链球菌肺炎Real-time血清学检查阳性(%)

阴性(%)46

(90.2%)

8

(2.1%)PCR阳性阴性5