病理组织的固定-骨质脱钙

病理检验技术

常规组织病理技术病理组织的固定骨质脱钙病理组织的固定骨质脱钙目的：为了切片时切出完整的切片,又不损伤切片刀的刀锋。在取材时如遇到骨质或钙化灶,应先进行脱钙处理后,才可转入脱水、透明。因骨质由钙盐组成,切片时既切不成完整的切片,又损伤切片刀的刀锋。一、骨质脱钙方法

酸类脱钙：骨组织或钙化组织内的钙盐多为不溶性，钙盐遇酸后生成一种可溶性的钙盐而游离出钙离子，经脱钙后的骨组织易于切片。特点：操作简单、价廉、脱钙时间较快。但脱钙时间如掌握不准确，容易破坏组织，胞核染色不良。一、骨质脱钙方法

电解脱钙：骨组织用白金丝环绕置于电解液(10%的甲酸和8%的盐酸)中,白金丝作为阳电极，另一端用碳棒作为阴电极，用6V直流电通电进行电解，使骨中的钙盐离解出钙离子，以达到脱钙的目的。特点：此法脱钙快，不伤害组织，染色结果尚佳，但需要安装一套特殊的设备。一、骨质脱钙方法

螯合剂脱钙：利用螯合剂配钙，利用整合剂乙二胺四乙酸(EDTA)与钙离子发生络合反应而脱钙。

特点：优点是组织不被破坏，某些酶类可以保存；缺点是脱钙作用非常缓慢，需时约数周。一、骨质脱钙方法

离子交换树脂脱钙法：用一种铵型潢化聚苯乙烯树脂铺在脱钙液容器底部约1.5cm厚，将骨组织放在树脂上，加入20%的甲酸(不能用硝酸和盐酸等无机酸)，钙盐和甲酸生成的可溶性钙盐游离出钙离子，离子交换树脂可吸附液体中的钙离子而脱钙。

特点：此法所用的脱钙液不宜使用无机酸而应使用甲酸。用过的树脂可用0.1mol/L的盐酸洗2次，再用蒸馏水洗3次后可反复使用多次。二、脱钙液

酸类脱钙因脱钙时间快，操作简易，是临床外检常用的一种脱钙法。常用的酸类脱钙剂有以下几种：硝酸(nitric

acid)是一种强酸，脱钙作用迅速，为常用的酸性脱钙液。脱钙时浓度为5%～10%，脱钙时间约数小时至一天，脱钙过程中应多次更换新液，以保证酸的有效浓度，否则脱钙速度会慢慢降低。加温脱钙可缩短脱钙时间，但应在37℃恒温箱内进行，并应在骨质转入酸液一段时间后每隔15～30分钟检查一次，否则如脱钙过度，组织受损，染色不良，甚至整块骨组织溶化无法制片。其缺点：如时间过长会形成亚硝酸，使溶液呈黄色，并迅即减慢脱钙速度。组织黄染后也影响染色反应，故需常换新液。二、脱钙液盐酸(hydrochloric

acid)是一种强酸，脱钙作用快，用做脱钙液的浓度为3%～10%，骨组织在盐酸久置后，组织受损伤，胞核染色不良，一般不单独使用盐酸作为脱钙剂。甲酸(formic

acid)属于有机酸，是一种良好的脱钙剂，但脱钙速度不如硝酸和盐酸，用做脱钙的浓度为10%～50%，甲酸脱钙即使脱钙时间过长对组织的破坏也较轻微。混合甲酸盐酸脱钙液由甲酸10ml、盐酸10ml和蒸馏水80m组成。此液对组织破坏较小，但脱钙时间较长些。酸类脱钙液应少量而多次更换新液，根据骨组织大小，每次用广口砂塞瓶盛装50～100ml酸液即可。如置入37℃的恒温箱加温脱钙，应在恒温箱门挂一脱钙的醒目标记，或亮一红灯，或调以定时钟以免遗忘。三、脱钙终点测定骨组织在脱钙过程中，如脱钙过度，轻者可使胞核染色不良；重者组织可严重受损，胞核不着色，红染一片；如脱钙不足，切片时仍可损伤刀锋，使切片有刀痕或切片裂开。一般用针刺，用大头针轻刺经用酸脱钙的骨组织，在刺入时如手感无阻力者则脱钙完成，如手感有阻力者则仍需继续脱钙。这种方法会给组织带来损伤。理想方法是用草酸铵测定，在脱钙过程中更换的最后一瓶脱钙酸液5ml，加少许浓氨水中和，然后加入草酸铵饱和液0.5～1ml混合，稍摇后静置片刻，如液体变白色混浊，说明脱钙尚不完全，这是由于草酸盐与脱钙液中的钙离子生成草酸钙沉淀；若液体仍透明则说明脱钙已达终点。四、脱钙后组织处理脱钙后，组织应置于流水中冲洗半小时至数小时，以除去组织内的酸液，必要时可置入5%的硫酸钠中，30