自身抗体课件张

自身抗体课件张第一页，编辑于星期日：二点五十三分。第1页，共57页。自身抗体是诊断自身免疫性疾病的重要依据

自身免疫泛指机体免疫系统受某些内因、外因或遗传等因素作用产生针对自身正常或变性的组织、器官、细胞、蛋白质或酶类等自身抗原发生的免疫应答反应，出现自身抗体或自身致敏淋巴细胞的现象。

因自身免疫招致组织器官损伤或功能障碍所致疾病称自身免疫性疾病(AID)。

自身抗体是自身免疫性疾病的重要标志。第二页，编辑于星期日：二点五十三分。第2页，共57页。自身免疫性疾病的共同特征1.可以有诱因，也可以无诱因，但多数病因不清。2.患者以女性居多，随年龄增加发病率有所增加。3.有遗传趋向。4.血清中有自身抗体或体内有针对自身组织细胞的致敏淋巴细胞。自身抗体在不同的自身免疫病中有交叉和重叠现象。

5.疾病的重叠现象,即一个病人可同时患一种以上自身免疫病。6.自身免疫病一般病程较长,病情发展和缓解呈反复交替现象,易成为终生痼疾。免疫抑制剂治疗可取得一定疗效。第三页，编辑于星期日：二点五十三分。第3页，共57页。自身抗体的意义1.可帮助临床诊断，评价疗效，估计预后。2.自身抗体是自身免疫性疾病特征---称标志抗体，**标志抗体检出有助于临床医生确诊疾病**自身抗体的检测有助于临床医生更早发现疾病第四页，编辑于星期日：二点五十三分。第4页，共57页。

自身抗体可以在AID临床发病前检测到PBC患者任何临床症状前10年可检测到AMA（抗线粒体抗体）RA患者在临床症状前4-5年检测到抗CCP抗体第五页，编辑于星期日：二点五十三分。第5页，共57页。自身抗体的分类

抗细胞内抗原的抗体:抗细胞核成分的抗体(ANA)

抗细胞浆成分的抗体(ANCA)抗细胞膜成分的抗体:抗磷脂成分抗体抗细胞表面抗原抗体:抗红细胞Rh抗原抗细胞外抗原的抗体:RF、凝血因子第六页，编辑于星期日：二点五十三分。第6页，共57页。抗核抗体谱抗DNA抗体抗核糖体P抗体抗组蛋白抗体抗ENA抗体抗Sm抗体抗U1RNP抗体抗Ro/抗SSA抗体抗La/抗SSB抗体肌炎特异性抗体（MSA）抗合成酶抗体抗SRP抗体抗Mi2抗体与系统性硬化相关的抗体抗拓扑异构酶1抗体抗着丝点抗体抗核仁抗原的抗体抗中性粒细胞胞浆抗体C-ANCAP-ANCA抗磷脂抗体狼疮抗凝物抗心磷脂抗体β2糖蛋白抗内皮细胞抗体类风湿关节炎相关抗体

类风湿因子（RF）抗CCP抗体抗核周因子抗体自身免疫性肝病相关抗体

SMA，LKM，SLA，AMA，Sp100,gp210等第七页，编辑于星期日：二点五十三分。第7页，共57页。抗核抗体（ANA)抗核抗体（antinuclearantibody，ANA）传统定义：将针对细胞核内成分的抗体称为ANA。

现在对ANA靶抗原的理解已从细胞核扩大到整个细胞。是指抗核酸（nucleicacid）和核蛋白（nucleoprotein）抗体的总称。第八页，编辑于星期日：二点五十三分。第8页，共57页。ANA的检测方法间接免疫荧光法（IIF）:现多以Hep-2细胞（人喉癌上皮细胞）为底物（Ag），抗原抗体结合，加入荧光标记的二抗体。用荧光显微镜观察ANA荧光着染强度和免疫荧光图形（核型）。稀释待检血清可检测ANA效价第九页，编辑于星期日：二点五十三分。第9页，共57页。ANA常见核型核型对应抗原相关疾病均质型组蛋白和DNA所有的CTD及药物性狼疮斑点型ENASLE、SSc、pSS、MCTD周边型n-DNASLE、也见于SSc核仁型RNA多聚酶SSc、也见于SLE、pSSSCL-70着丝点型染色体CRESTsyn（局限性系统硬化症）第十页，编辑于星期日：二点五十三分。第10页，共57页。ANA的检测方法酶免疫测定试验（ELISA-ANA)商品化的试剂盒，包括吸附有抗原的固相（微孔板）、酶标记的检测抗体、洗液、底物、终止液及阴阳性质控物。通过酶标仪读取OD值，跟cutoff值比较来界定阴性和阳性。第十一页，编辑于星期日：二点五十三分。第11页，共57页。抗核抗体的分类

（1）抗ENA抗体可提取性核抗原（extractablenuclearantigens，ENA）（2）抗组蛋白抗体（3）抗DNA抗体抗双链DNA抗体（抗dsDNA）抗单链DNA抗体（抗ssDNA）。（4）抗着丝点抗体（5）抗核小体抗体第十二页，编辑于星期日：二点五十三分。第12页，共57页。ENA

不同的自身免疫病可产生不同的抗ENA抗体。通过检测抗ENA抗体的类型及其组合，可综合诊断自身免疫病的类型。抗Sm抗体抗U1RNP抗体抗Ro/抗SSA抗体抗La/抗SSB抗体肌炎特异性抗体JO-1与系统性硬化相关的抗体SCL-70第十三页，编辑于星期日：二点五十三分。第13页，共57页。ENA检测方法双向免疫扩散对流免疫电泳斑点酶免疫技术免疫印迹技术第十四页，编辑于星期日：二点五十三分。第14页，共57页。免疫印迹技术（最常用）欧蒙印迹法试剂盒用于体外定性检测血清或血浆中的人抗nRNP、Sm、SS-A（天然SS-A和Ro-52）、SS-B、Scl-70、Jo-1、CENPB、dsDNA、核小体、组蛋白和核糖体P蛋白等14种不同抗原lgG类抗体。第十五页，编辑于星期日：二点五十三分。第15页，共57页。免疫印迹技术(IBT)1.将提取的抗原,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,然后将各抗原区带转印至硝酸纤维膜上制成膜条。2.将待测血清加在已切成细条的硝酸纤维膜上,3.当再加入酶标记抗人IgG抗体,4.再加入酶的底物,出现显色反应。

凡有抗体与膜上抗原结合的位置,均会因酶促反应而显色。参照此时抗原区带的分子量及各区带的相应位置,可辨读出各特异性抗体.第十六页，编辑于星期日：二点五十三分。第16页，共57页。

抗ENA抗体的主要类型及临床意义

抗Sm抗体

抗Sm是SLE的特异性标志之一，对SLE高度特异（超过90%），约5%-40%患者阳性，同时伴抗DS-DNA抗体和U1-RNP抗体阳性。

抗u1-nRNP抗体

抗nRNP(nuclearRNP)：以抗核内的核糖核蛋白而得名。临床上应用较多的是u1RNP抗体。抗u1RNP抗体在混合性结缔组织病（MCTD）中几乎均为阳性，且其滴度很高；是区分结缔组织病和非结缔组织病的有力指标。25－30％的SLE患者存在该抗体，一般与抗Sm抗体一同出现。抗u1RNP抗体阳性的病人，常有双手肿胀、雷诺现象、肌炎和指（趾）端硬化。第十七页，编辑于星期日：二点五十三分。第17页，共57页。抗SSA抗体

抗SSA/Ro抗体与各类自身免疫性疾病相关，最常见于干燥综合征（40-80%）。SLE（20-60%）与狼疮肾病的发生相关。抗天然SS-A（60kDa）抗体对SS和SLE的特异性高。抗Ro-52抗体 不具有疾病特异性，而且还可与抗Jo-1和RNP抗体发生交叉反应。

既往认为抗SS-A靶抗原为分子量52KD和60KD，RO-52和RO-60是同一大分子复合体，现在认为RO-52和RO-60抗体并不属于同一抗体系统，两者是独立的抗体系统，而且具有不同的临床意义。第十八页，编辑于星期日：二点五十三分。第18页，共57页。抗SSB/La抗体在原发性SS病人中，抗SSA/Ro和抗SSB/La阳性率分别为60%和40%，它们是诊断干燥综合征的血清学标志。抗SSB抗体较抗SSA抗体诊断干燥综合征更为特异。另：SSA和抗SSB抗体阳性可造成新生儿狼疮及婴儿心脏传导阻滞等先天性心脏病。抗SSA和抗SSB抗体常与血管炎、淋巴结肿大、白细胞减少、光过敏、皮损、紫癜等临床症状相关。第十九页，编辑于星期日：二点五十三分。第19页，共57页。抗Jo-1抗体

几乎仅见于或最常见于多发性肌炎/皮肌炎（PM/DM）或PM/DM重叠综合征。存在于35％至40％的肌炎患者中。临床表现为：肌炎、间质性肺疾病、关节炎以及常出现雷诺现象的一组临床表现的特征性；患者的手指侧面常出现角化过度，并伴有脱屑、裂纹和色素沉着，从而形成许多肮脏的横纹。即“技工手”.50％至70％发生间质性肺疾病。肌炎常常难以通过治疗达到完全缓解。第二十页，编辑于星期日：二点五十三分。第20页，共57页。SCL-70抗体抗拓扑异构酶1抗体（抗scl70抗体）：存在于25至75％的患者；主要见于患有弥漫型硬皮病以及存在系统性损害（特别是肺间质变）的患者。抗体滴度与疾病活动性无关。第二十一页，编辑于星期日：二点五十三分。第21页，共57页。抗DNA抗体已确认出两大类抗体特异性：天然的双链DNA（dsDNA）：SLE患者的特征性标志变性的单链DNA（ssDNA）抗dsDNA抗体在SLE的发病机制中起重要作用，SLE并发的狼疮性肾炎是由该抗体介导的免疫复合物病，抗dsDNA抗体可形成多种冷沉淀而致血管炎，SLE肾炎及典型的蝶形红斑均与该抗体有关。抗dsDNA抗体诊断SLE的特异性可达95%～100%，但其敏感性仅为30%～50%，因此抗dsDNA抗体阴性不能排除SLE的诊断。抗体水平与疾病活动度相关，随着疾病活动的控制，抗dsDNA抗体滴度可以下降或消失。第二十二页，编辑于星期日：二点五十三分。第22页，共57页。抗组蛋白抗体

（Anti-HistoneAntibody，AHA）组蛋白是染色质基本结构-核小体的重要组成部分；在药物性狼疮的患者中出现率很高（78-95%）；在多种结缔组织病中出现。服用异烟肼的病人中最高，但临床上并没有出现狼疮的临床症状。第二十三页，编辑于星期日：二点五十三分。第23页，共57页。抗组蛋白抗体

组蛋白有H1,H2A,H2B,H3,H4亚型抗H1H2AH2BH3H4 系统性红斑狼疮++++++++ 长期服异烟肼+++++++++++类风湿关节炎+++ ++

第二十四页，编辑于星期日：二点五十三分。第24页，共57页。抗核小体抗体（antinucleosomeantibodies,AnuA）核小体是染色体的功能亚单位，是DNA与组蛋白形成的复合体，存在于细胞核中，核小体是SLE主要的自身抗原；AnuA对SLE诊断的敏感性和特异性分别为56.0%-64.2%和97.0%-98.8%，敏感性优于抗dsDNA，是SLE的标记抗体之一。AnuA可出现于SLE疾病进程的各个时期，并且是狼疮肾炎的标记性抗体。AnuA与抗dsDNA抗体可不同时出现，AnuA出现早于抗dsDNA抗体，这对SLE的早期诊断更为有利。第二十五页，编辑于星期日：二点五十三分。第25页，共57页。

核糖体P蛋白抗核糖体P蛋白为SLE特异性自身抗体，检出不高，通常为10%，该抗体与疾病的活动度不相关。抗着丝粒抗体90％的局限性系统性硬化症CREST综合征患者存在该抗体；见于患有原发性或继发性雷诺病的患者。第二十六页，编辑于星期日：二点五十三分。第26页，共57页。系统性红斑狼疮(SLE)靶抗原 阳性率(%)dsDNA标志性抗体 30-90Sm标志性抗体 5-30核糖体P蛋白标志性抗体 5-15核小体标志性抗体 50-95组蛋白 40-80U1-nRNP 15-40SS-A 20-60SS-B 10-20第二十七页，编辑于星期日：二点五十三分。第27页，共57页。新生儿红斑狼疮（NEL）靶抗原 阳性率(%)SS-A

100药物诱导的红斑狼疮（DIL）靶抗原 阳性率(%)组蛋白

95原发性干燥综合征（SS）靶抗原 阳性率(%)SS-A

40-95SS-B 40-95混合性结缔组织病（MCDT）靶抗原 阳性率(%)RNP

95-100第二十八页，编辑于星期日：二点五十三分。第28页，共57页。弥漫型进行性系统性硬化症靶抗原 阳性率(%)Scl-70标志性抗体 25-75局限型进行性系统性硬化症靶抗原 阳性率(%)着丝点

80-95多发性肌炎和皮肌炎（PM/DM）靶抗原 阳性率(%)Jo-1 25-35第二十九页，编辑于星期日：二点五十三分。第29页，共57页。自身免疫性肝病相关抗体是与自身免疫密切相关的特殊类型的肝病，其诊断和治疗完全不同于一般的慢性病毒性肝炎自身免疫性肝炎

(AIH)原发性胆汁性肝硬化(PBC)原发性硬化性胆管炎

(PSC)自身免疫性胆管炎（AIC）重叠综合征每种自身免疫性肝病都具有特征性自身抗体谱，自身抗体检测对自身免疫性肝病的诊断及鉴别具有重要意义。第三十页，编辑于星期日：二点五十三分。第30页，共57页。原发性胆汁性肝硬化（primarybiliarycirrhosis,PBC）女性；胆酶升高（ALP,r-GT）为主，碱性磷酸酶（ALP）/AST>3；

IgM明显升高,胆汁酸,血脂及胆固醇升高;

肝内小胆管的非化脓性炎症和梗阻，淤胆；肝内阻塞性胆汁性肝硬化；常合并其他自身免疫病如SS、桥本氏甲状腺炎等。第三十一页，编辑于星期日：二点五十三分。第31页，共57页。抗AMA-M2（抗线粒体抗体）

该抗体为原发性胆汁肝硬化（PBC)的特异性指标，对PBC特异性最强(>95%),敏感性最高(>95%)。可早于发病10年查出抗体。PBC诊断不及时危害大PBC早期隐匿，晚期疗效甚微。晚期确诊PBC患者死亡率很高。PBC误诊率可高达90%。最常见误诊为：慢性病毒性肝炎。

某传染病医院数据（2001-2010年)显示：近半数PBC患者伴有乙肝病毒感染，疾病还同时伴发各种类型肝炎（乙肝最常见）。

第三十二页，编辑于星期日：二点五十三分。第32页，共57页。自身免疫性肝炎

autoimmunehepatitis,AIHAIH临床特点：大多隐匿起病,女性多见（女：男=4-6：1）类似病毒性肝炎的症状和体征：疲乏无力、右上腹不适、肝肿大、黄疸、腹水肝功能异常：肝酶（ALT、AST）升高为主，明显高于胆酶，AST/ALP≥3；血清IgG升高，>1.5倍,r-球蛋白>2倍；各种病毒学指标检查均为阴性;（自免肝禁忌用干扰素，诊断自免肝必须排除病毒性肝炎）。第三十三页，编辑于星期日：二点五十三分。第33页，共57页。AIH（自免肝）相关的自身抗体是AIH诊断和分型的重要依据和必备条件抗核抗体（ANA）抗平滑肌抗体（SMA）抗肝肾微粒体抗体（LKM）抗肝细胞溶质蛋白1抗体（LC-1）抗可溶性肝抗原抗体（SLA）抗肝胰抗体（LP）第三十四页，编辑于星期日：二点五十三分。第34页，共57页。自身免疫性肝炎的分型I型:

最常见，约占80%

抗平滑肌抗体（SMA），ANA：常同时出现（85%-90%），

ANA及SMA被公认是诊断I型AIH的特异性抗体;II型:

LKM-1(肝肾微粒体抗原）；

LC-1(肝细胞胞质抗原)

少见，儿童多见III型:

SLA(可溶性肝抗原)

LP(肝胰抗原)第三十五页，编辑于星期日：二点五十三分。第35页，共57页。原发性硬化性胆管炎（primarysclerosingcholangitis,PSC病变特征为胆管广泛炎症纤维化、梗阻、狭窄，进而发生胆汁性肝硬化，临床特点为阻塞性黄疸。PSC血清免疫球蛋白常增高,以IgM多见。ANCA阳性在PSC高达87%。血清中可发现ANA和SMA，但滴度都比较低，一般没有抗线粒体抗体，这一点与PBC相反。胆管造影(ERCP)显示有硬化性胆管炎的典型改变，肝内外胆管狭窄与扩张相间而呈串珠状改变（决定性）。第三十六页，编辑于星期日：二点五十三分。第36页，共57页。ANCA-抗中性粒细胞胞浆抗体ANCA代表一组抗中性粒细胞胞浆特定的成分为靶抗原的抗体谱。

其靶抗原成分包括：丝氨酸蛋白酶3（PR-3）、髓过氧化物酶（MPO）、通透性杀菌蛋白（BPI）、丝氨酸蛋白酶、人白细胞弹性蛋白酶（HLE）、乳铁蛋白（LF）、组织蛋白酶G（CG）、β葡萄糖醛酸酶、溶菌酶等。

在显微镜下观察，常见到两种结合类型：C-ANCA：胞浆中细颗粒类型，主要靶抗原为PR-3；P-ANCA：核周染色。其靶抗原主要为MPO；A-ANCA或X-ANCA：前两者的混合物，非典型ANCA第三十七页，编辑于星期日：二点五十三分。第37页，共57页。ANCA的测定1间接免疫荧光法(IIF)最常用胞浆型c-ANCA

核周型p-ANCA

不典型a-ANCA2免疫印迹法第三十八页，编辑于星期日：二点五十三分。第38页，共57页。细胞质呈弥漫性颗粒样染色（不均匀）环绕细胞核周围的细胞质亮染第三十九页，编辑于星期日：二点五十三分。第39页，共57页。

ANCA两种荧光染色型

核周型ANCA（pANCA）胞浆型ANC（cANCA）第四十页，编辑于星期日：二点五十三分。第40页，共57页。

C-ANCA/PR3-ANCA丝氨酸蛋白酶3（PR3）为C-ANCA的主要靶抗原，约占C-ANCA的80%~90%。C-ANCA诊断WG的特异性大于90%，外加PR3-ANCA可超过95%。敏感性取决于疾病的活动性和病期阶段，在初发不活动的韦格纳肉牙肿（WG）中，阳性率只有50%，而活动性典型的WG，几乎100%阳性。总体敏感性为60％－70％。C-ANCA滴度与病情活动一致，强烈的致病作用。常被作为WG，判断疗效、估计复发的指标。在HIV感染和阿米巴肝脓肿的患者中也可能检测到该抗体。PR3-ANCA在其他原发性血管炎中也可被检测到，如MPA(显微镜下多动脉炎）、坏死性新月体型肾小球肾炎（NCGN）、PAN（结节性多动脉炎）等。第四十一页，编辑于星期日：二点五十三分。第41页，共57页。P-ANCA/MPO-ANCA主要靶抗原为：抗髓过氧化物酶（MPO），弹性蛋白酶、乳铁蛋白及其它尚未被确认的胞质成分为抗原。主要与50％显微镜下多动脉炎（MPA）、坏死性新月体型肾小球肾炎（NCGN）等相关。MPO-ANCA还可见于其它一些疾病，如PAN（结节性多动脉炎）、抗肾小球基底膜疾病（抗GBM病）、WG、SLE(10%~15%）、RA伴关节外损害及血管炎、药物性狼疮、Felty综合征(类风关合并WBC少）等。

MPO-ANCA与原发性血管炎相关不及PR3-ANCA与WG相关性那样紧密。但每一个怀疑血管炎或肾小球肾炎患者，只要原因不明，就应查ANCA。体内、体外资料显示MPO-ANCA参与血管炎相关疾病的致病机理。MPO-ANCA与病情活动相关，可用于判断疗效、估计复发和指导治疗。第四十二页，编辑于星期日：二点五十三分。第42页，共57页。

ANCA不仅与原发性小血管炎相关,也可见于许多其它炎症性疾病,例如炎症性肠病,包括溃疡性结肠炎和克隆氏病;自身免疫性肝胆疾病,如原发性硬化性胆管炎;类风湿性关节炎;和某些肺部非感染性炎症性疾病,如囊性纤维化、肺间质纤维化等。但上述ANCA相关的疾病并不识别PR3和MPO,其特异性ANCA靶抗原为其它胞浆成分。第四十三页，编辑于星期日：二点五十三分。第43页，共57页。甲亢治疗监测血管炎病变不仅累及血管本身，还累及血管所支配的组织和脏器，有些可以致命。甲亢：目前我国女性人群患病率达2%。甲亢未经治疗，ANCA阳性率可达到3.5%，治疗甲亢（血管炎）ANCA阳性率35%，ANCA阳性必须停药。第四十四页，编辑于星期日：二点五十三分。第44页，共57页。类风湿关节炎相关抗体

类风湿因子（RheumatoidFactor,RF）抗环瓜氨酸肽（Cycliccitrullinatedpeptide，CCP）抗体

抗核周因子（antiperinuclearfactor，APF）抗角蛋白抗体（antikeratinantibody，AKA）抗钙蛋白酶抑制蛋白抗体(ACAST)抗RA33抗体第四十五页，编辑于星期日：二点五十三分。第45页，共57页。类风湿因子（RF）

抗原：为变性的IgGFc段通常为IgM型是诊断RA的标准之一，不是唯一标准，更非RA特有,

作为类风湿关节炎（RA）的筛选试验有一定的价值，至少75％的患者RF（＋）作为血清阴性脊柱关节病区分标准。正常人2%阳性，老年人可达5%阳性。RF与其他蛋白、半抗原有交叉反应。多种结缔组织病（SLE，SD，SS，PM/DM）感染疾病（SBE，TB，hepatitis）,肝硬化，弥漫性肺纤维化，结节病等均可阳性。病后半年才产生，有关节外表现者，滴度高。持续高滴度RF预示疾病严重，预后差。第四十六页，编辑于星期日：二点五十三分。第46页，共57页。抗环瓜氨酸肽（CycliccitrullinatedpeptideCCP）抗体抗CCP抗体所针对的靶抗原是APF、AKA的共同抗原决定簇，是由19个氨基酸残基组成的瓜氨酸多肽链，ELISA法检测。抗CCP抗体对RA诊断的特异性高（90.4%～98%），敏感性约80%；有助于RA的早期诊断：该抗体可先于RA临床表现，90%以上的血清抗CCP抗体阳性的未分类的关节炎在３年内进展为RA。与RA的活动性及预后相关,浓度高往往提示预后不佳，发生关节侵蚀的危险大。是RA最好的独立参数预测指标。第四十七页，编辑于星期日：二点五十三分。第47页，共57页。RA自身抗体谱及临床意义RF 60％RA中出现，量与RA活动性及严重

性呈正相关，亦在其它CTD出现

抗CCP 在50％RA中出现（聚角蛋白微丝蛋白） 特异性高，>95％AKA（抗角蛋白抗体） 在40％RA阳性，特异性>90%APF（抗核周因子）

在52％RA阳性，特异性>90%抗RA33 RA阳性率为35％抗Sa 在部分RA阳性以上抗体阳性有助于早期RA及不典型RA的诊断和早期开展治疗，改善预后。第四十八页，编辑于星期日：二点五十三分。第48页，共57页。风湿病学中的自身抗体：结论单单出现自身抗体并不一定是风湿性疾病。试验结果阴性常常并不能除外某种风湿性疾病。必须要根据临床才能作出风湿性疾病的最终诊断。将抗体检测与临床表现结合起来，能够帮助我们鉴别这些数量众多的风湿性疾病，同时抗体的检测也有助于对疾病的活动度进行监测。第四