中药制剂培训课件

中药制剂分析第一章

绪

论

中药制剂分析是以中医药理论为指导，运用现代分析理论和方法研究中药制剂质量的一门应用学科。

第一节概述

一、中药制剂分析的对象中药制剂分析的对象应该是制剂组方中起主要作用的有效成分、毒性成分、或影响疗效的化学成分，对其做出定性、定量等各方面的评价。

二、中药制剂分析的特点

一）中药制剂分析的对象是复杂的混合物。

1.组成中成药的中药材具有复杂性。中药材的同名异物，同物异名现象普遍存在。有的中药更由于形态相似，容易误用。

2.中成药化学成分的多样性、复杂性。11）由多味中药组成的复方制剂，其化学成分极为复杂多样。

2)各种化学成分在中药中的含量相差悬殊。3）中药制剂由多种单味药材组成，所含化学成分相互影响。

3.中成药的剂型繁多，所用之辅料多种多样，在测定前，样品必须经过预处理，以排除各种辅料的干扰，必要时还须进行辅料的检查和测定。

4.工艺各异，很多在单味中药鲜品中存在的化学成分，经过炮制或制备工艺中经加热处理后已不复存在，或在制备过程中因挥发、分解、成盐(沉淀)反应等增加了中成药分析工程的困难。二）首先进行组方分析，随方决定测定主药，选择合适的检测指标，是目前质量分析方法的特点之一。在进行质量分析时首先以中医理论和用药原则为指导，进行组方分析，按功能主治分出主、辅、从、次药味和药群，选择某合适的化学成分为指标来说明其与质量的关系。三、影响中药制剂质量的因素

(一)原料药材的品种、规格、产地、药用部位、采收季节、加工方法的影响

(二)炮制方法的影响

（三）生产工艺的影响

(四)中药制剂的包装、贮藏、保管的影响

四、中药制剂质量控制的现状和发展趋势

一）国外药物分析发展趋势

基本的方法主要为：分离分析法、电化学法、光谱法和联用分析方法等。

各种色谱及其联用技术已成为占主导地位的常规分析方法，如HPTLC、HPLC、GC、HPCE、LC-MS联用等。

体内药物分析研究，趋向于采用在线的联用微透析分析技术，如on-lineMD-CE、on-lineMD—LC等。

手性药物作为化学药物的特殊群体，以HPLC和CE为主要拆分手段的手性药物分析方兴未艾，已成为全世界药物分析的研究热点。

二）国内中药制剂分析现状与发展趋势1、国内中药制剂分析现状

1）光谱法的应用A比色法如丹参素/丹参注射液，阿魏酸/当归浸膏--定量

B紫外-可见分光光度法单波长法如蒽醌/何首乌，香豆素/祖师栗膏--定量；双波长法靛蓝、靛玉红/喉痛消炎丸--定量；三波长法小檗碱/三黄片--定量；一阶导数光谱法绿原酸/感冒咳嗽冲剂，麻黄碱/哮喘丸--定量二阶导数光谱法胆酸/清宫冲剂，血竭/七厘散--定量；三阶导数光谱法氢溴酸东莨菪碱/中麻2号注射液--定量。等

C荧光法丹参素/丹参注射液D红外分光光度法-体、-体/山道年；番木鳖碱、马钱子碱/马钱子E质谱法F核磁共振光谱法2）色谱法的应用A纸色谱法已较少应用；B薄层色谱法应用广泛；C棒状薄层色谱法小檗碱/复方黄柏制剂、人参皂甙/人参、胆酸和去氧胆酸/熊胆--定量；D气相色谱法挥发性成分定量冰片/复方丹参片/牛黄解毒丸/冠心苏合丸等；厚朴酚、和厚朴酚/藿香正气水，麻黄碱/葛根汤；

E高效液相色谱法应用广泛，以反相HPLC为主；黄连素/半夏泻心汤，红景天甙/红景天口服液，甘草酸/千金升白冲剂等…。3）电化学分析法的应用A库仑法B电位法药物电极测定法和电位溶出分析法4）其他A原子吸收光谱法和冷原子技术B原子发射光谱CX射线分析法目前，中药体系存在的突出问题具体表现在：(1)定量分析指标与其主要药效作用间缺乏相关性；(2)与化学药物相比，中药是一个由多成分、多因素构成的复杂体系，目前还没有建立起一套有效的中药复杂体系定量分析标准。

2。国内中药制剂分析发展趋势

(1)中药有效成分的筛选与确定；应用仿生学、基因组学等学科的理论和进展，发现新的药物靶标，从分子、基因、受体、组织和整体水平系统准确地确定中药复杂体系中的药效物质；

(2)中药有效成分的提取与分析；中药化学成分非常复杂，而且有效成分也具有相对性。为了高效率地提取中药有效成分，应用各种现代提取技术，如SFE、SWE、UAE等，可用于中药复杂体系中有效成分的提取，利用准确的仪器分析方法和计算机技术，通过因子分析方法对中药复杂体系进行定性定量评价；

(3)中药药效物质与中医药理论相关性研究；利用现代分析方法研究中药复杂体系中药效物质与中医药理论的定量关系，并结合现代医学理论，阐明其作用机制，在此基础上对中药及其复方进行全面质量控制。第二节

中药制剂分析工作的基本程序中药制剂分析程序一般可分取样、测试样品溶液的制备和测定（包括定性鉴别、杂质检查、含量测定）等。一、取样

1．供试品要具有代表性：原则是均匀、合理。

2．严格按照规定的取样方法进行取样：一般应从每个包装的四角和中央五处取样，深度可达1/32/3处。取得的样品装入清洁、干燥、具磨口塞的容器或密封的塑料袋中，并注明品名、批号、数量、取样日期及取样人。3．抽取供试品的数量：各类中药制剂取样大致是至少够3次检验的用量。贵重药品可酌情取样。

粉状制剂（散剂、颗粒剂）一般取样100g，可从包装的上、中、下三层及周围间隔相等部位取样若干，将所得样品混匀，按〝四分法〞从中取出所需供试量。液体制剂（口服液、药酒、糖浆、酊剂等）一般取样200ml。同时须注意均匀取样。

固体中成药（丸剂、片剂）成品取样一般为100g，压片后取样200片。丸剂一般取10丸。

胶囊剂称取不少于20个胶囊，倾出其中的药料，称定空胶囊的重量，由总重中减去，即为胶囊内药料的重量。依标示量及供试量称取部分药料供分析。一般取样量为100g。

注射液的取样，灌注、熔封，灭菌前后应经过两次分析。灌封前将注射液混合均匀，如液体取样原则取样，再按标示量及供试量分别取部分进行检验；经灭菌后的注射液须按原来的方法进行分析检验。已封好的安瓿，取样量一般为200支。

其它剂型的中成药，可根据具体情况随意抽取一定数量，作为随机抽样。

供试样品检验完毕，应保留一半数量作为留样观察。二、

测试样品溶液的制备中药制剂测试样品溶液的制备一般分为提取、分离、净化等过程。1.中药制剂样品的提取冷浸法，6~10~20倍药重溶剂，称重，浸泡12~24~48小时，称重,，等分取样或取总样测定。适宜遇热不稳定的有效成分；

连续回流法，样品置索氏提取器中，利用溶剂反复提取，提取效率高，溶剂少，遇热不稳定的有效成分不宜用此法；

超声波提取法，样品置容器中，溶剂提取，效率高，一般样品30min内即可完成。

2．中药制剂样品的预处理液-液萃取法:溶剂直接萃取、离子对萃取，操作繁，易乳化。沉淀法：采用某些试剂沉淀杂质或沉淀待测成分。蒸馏法：利用待测成分或其分解产物具有挥发性的特点，采用蒸馏法、收集馏液进行含量测定，必须明确测定成分的结构才可用此法。色谱法（液-固萃取法），常用净化剂有三氧化二铝、氧化镁、硅胶、活性炭、大孔树脂、离子交换树脂、硅藻土、键合相硅胶C18、C8等。

其中离子交换树脂、硅藻土、键合相硅胶C18、C8等目前有较多商品预处理柱，使用方便，操作简单，净化效率高。

三、定性鉴别、检查和含量测定1．定性鉴别

1）性状鉴别系指中成药的形状、颜色、气味等，凡药典收载品，在药典中均有规定，可按要求进行检查。

2）显微鉴别因为含有中药原粉的中成药均保留中药材的显微特征。可以通过这些特征，对中成药进行定性鉴别。3）理化鉴别药典中常用的方法有：荧光法、显色法、沉淀法、微量升华法；纸色谱法、薄层色谱、液相色谱、气相色谱等。

中药定性鉴别应选择其中主药（君药）、辅药（臣药）作为主要对象，其次应鉴别毒剧药及贵重药材。

2．检查按我国药典要求，中药制剂需要检查的项目大致可分为三类：1）污染型

中成药一般杂质检查项目有：异物、灰分、酸不溶性灰分、重金属、砷盐等；卫生学检查：微生物细菌检查；以及有的产品要求农药残留量的检测。2）特殊杂质型

原料药材掺假、有毒成分的限量检查。

3）剂型的要求检查类型（制剂通则要求检查项目）

中成药一般质量要求的检查有：挥发油测定、水分测定（固体制剂）、乙醇含量测定、总固体、相对密度、pH值（酊剂、药酒）、装量差异（片重差异）、崩解度（片剂、胶囊剂）、熔点测定、旋光度测定等。

3．含量测定

中成药含量测定所采用的方法除经典的重量法、容量法(包括中和法、容量沉淀法、络合滴定法、氧化还原法及非水溶液滴定法等)外，还可采用电位法、库伦滴定法、比色法、可见-紫外分光光度法、红外分光光度法、液相色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、双波长薄层扫描法等。

1）对有效成分明确的中药制剂要进行有效成分的含量测定。

2）大致明确有效成分，要求测定这些成分的总量。3）对有效成分已知但无理想的测定方法的中药制剂，可通过测定其中某些化学成分的含量间接控制有效成分的含量。

4）对有效成分不明确的中药制剂可采用以下方法：选择可能的有效成分或主要成分（指示性成分）进行含量测定；测定药物的总固体量；选择在原料加工炮制时或制备、贮存过程中易损失、破坏的成分进行含量或限量测定。

5）中药制剂中含有剧毒性成分则要测定其含量。

6）贵重药材在制剂中投料量应加以测定。第二章中药制剂定量分析方法

第一节可见-紫外光谱法

一、单一物质的定量

定量依据是Beer-Lambert定律，A=lC。测定单一物质时，先测定物质的吸收光谱，然后选择最大吸收峰的波长max进行定量分析。一个物质若有几个吸收峰时，可选择吸收峰较高，在此吸收峰处吸光度随波长变化较小，并且其它物质无吸收的波长作为定量条件。一般不选择光谱最左边的末端吸收峰作定量测定的波长。常用定量方法：1.对照法C样=C标A样/A标；C标A样/（A标C样）=样品%，C样和C标分别为样品浓度和标准品浓度，C样为样品标示浓度。2.标准曲线法：从标准品吸光度-浓度曲线求得样品浓度。

二、

混合物的含量测定

一）

混合物中有a，b两种组分，若两者的最大吸收峰不重合，且在a的1max处，b无吸收；在b的2max处，a无吸收。可分别在1max、2max处用单一物质的定量方法从混合物中测定a、b的浓度。二）

混合物中有a，b两种组分，吸收光谱部分重叠，在a的1处，b无吸收；在b的2处，a有吸收。先在2处测定总吸收Aa+b，再在1处测定Aa1；先从Aa1直接求出a的浓度，根据a的浓度求出Aa2。再从Aa+b减去Aa2后求得Ab2，就可求得b的浓度。（三）双波长测定法中药制剂分析中常用的方法为等吸收波长法和系数率法。1．等吸收波长法1）基本原理根据左图选出两个波长1与2，其选择原则是干扰组分a在1与2处吸收度相等，即Aa1=Aa2。而待测组分b在1与2处的差吸收度A应比较大，再在1与2处测混合组分溶液的差吸度A。设1为参比波长，2为测量波长，则等吸收波长法原理示意图

A=Aa+b2-Aa+b1

=（Aa2+Ab2）-（Aa1+Ab1）=Ab2-Ab1=（b2-b1）CbL

2）应用举例喉痛消炎丸中靛蓝、靛玉红的测定ⅰ）选择等吸收波长：用2～8g/ml的靛蓝及靛玉红的氯仿溶液在分光光度计上扫描，并用同法扫描出空白样品溶液的吸收曲线。从左图可知靛蓝在540nm、634.4nm处有合适的等吸收波长；靛玉红却是在514．2nm和566nm处有等吸收波长，而空白样品液在上述波长处的吸收曲线几乎成一条直线、不干扰测图2-1-3靛蓝、靛玉红的吸收曲线

(1)靛蓝(2)靛玉红(3)无青黛样品定，选取靛蓝的测定波长s1＝566nm、参比波长R1=514.2nm。可选靛玉红的测定波长s2=540nm、参比波长R2=634.4nm。

ⅱ)标准动曲线：精素密吸取靛壤蓝对照品片溶液0.安25、0陕.50、兵…、2.馅0ml；马靛玉红对双照品溶液御0.20切、0.4斧0、…、猜1.40微ml，分反别放入1岗0ml量解瓶中，用述氯仿稀释顿至刻度，敬分别在上僚述等吸收盟波长处测纷其差吸收岩度：A1=A566n朴m-A514窃.2n屡m；A2=A540贺nm-A634.引4nm；然后用A对C伙作标准钓曲线；服并求出芦其一元速回归方滩程：A1＝0.芒022傍41·蝴C1(r1＝1.0究000)A2＝0.0总4060瞒·C2+0哥.00锐55仆(r2＝1.0日000)ⅲ)含怜量测定呼：精称止喉痛消恭炎丸细稀粉约0裤.2g证于索氏却提取器架中，用痛氯仿提菠取至无幅蓝色，洲用氯仿薄定容于企50m弊l量瓶运中，再史精密吸底取5m蛇l置1霞0ml扇量瓶中氏，加氯球仿至刻苦度即为固样品溶过液。将读样品溶袜液在s1与R1，处测出A样1值，用以务上A1式求出授靛蓝的纯浓度及芽样品中绑靛蓝的环含量。划同样，变在s2与R2处测出A样2，用以眠上A2式求出靛味玉红的浓捕度及样品超中靛玉红尺的含量。2．联既立方程法串Aa+b1=Aa1+Ab1=a1CaL+拦b1CbLAa+b2=Aa2+Ab2=a2CaL+筋b2CbL（四）三喊波长测宰定法此法要求中在任一吸惜收曲线上岁，能找出惭满足下述椒条件的三园个波长：蔽即在干扰倘组分的吸舌收曲线上铃，与三个手波长相应稿的点，能队在一条直饰线上。1．基胆本原理左图中1、2、3为在任一阻吸收曲线虫上，任意选择的得三个波碗长。A1、A2、A3为在三纹个波长疤处分别测出疑的吸收度写。根据相乞似三角阶形的等鉴比性质岁，可推旗导出下坚式，ΔA=杂A2-（m馒A1+nA3）/（m遭+n珠）={2–（m1+n3）/（m仓+n抽）}CL三波长浮分光光让度法的裹原理说明Δ去A与待挣测组分茂浓度C删成正比榨。2．应用举币例二陈丸中酱陈皮甙的推测定1）总绣干扰组墓分的制讨备及其创吸收光绵谱ⅰ)除去稀陈皮甙后平，陈皮其销他组分提辩取液的制胶备：用溶闯剂(含0赛.1％氢勾氧化钠的杯75％乙盈醇液)提旨取陈皮粉铅，提取液掀经薄层分构离，刮取药除陈皮甙扁以外的所吊有斑点洗辆脱，得除薯陈皮甙以菊外陈皮其贵他组分提珠取液(I孕)。ⅱ)二股陈丸空恭白粉提熟取液的灰制备：凡按处方樱比例配制除陈萌皮以外的叉二陈丸空佛白粉，用崭上述溶剂提取擦，得二粱陈丸空领白粉提涛取液(该Ⅱ)。将(I)丝式、(Ⅱ)潮按处方比鹅例混合，共得二陈丸那总干扰成分贞液(Ⅲ陆)。分盐光光度呆计分别家测定陈五皮甙对照品和揪(Ⅲ)股的吸收农光谱。毯见左图铺。其他慨成分对陈皮甙义的测定谅有干扰咸，用6叶批不同多来源的撇原料按贤上法制栏备(Ⅲ块)，并狮测其吸卸收光谱愉，结果辩谱形相烟似。可表采用三隐波长法眉消除干廉扰。2）选择掩三个测定蹄波长作图法粗示选，再计霜算精选在晴(Ⅲ)的A=0处，即为夏精选的三爸个波长：袭λ1=318尘.0nm齿，λ2=28英6.0锤nm，痕λ3=275汉.0nm己。3）标准宰曲线宝配制不障同浓度的废陈皮甙对塞照品溶液疑，在选出巧的三个波敬长处，分牙别测定吸旷收度，并镰算出ΔA欲值，对Δ数A值与浓各度C进行评直线回归炉，回归方淹程为：ΔA夏=9涛.90帮59C惠–叮0.0本024今(r糊=0司.99兵90)4）样举品测定省精密称粒取二陈柿丸细粉词约0.稻1g，素加10饱0.0胞ml上丧述溶剂在浸泡提遣取15里小时，臂过滤，竿取续滤塔液2.拦0ml肆，用溶结剂稀释泼至5.婆0ml欣，在选贪出的三宾波长处兵，分别窄测定吸缺收度，参计算其围ΔA值抢，再按旋回归方白程算出扎陈皮甙升含量。堂本法平掠均回收贪率：9唯8.2挪8％，烤RSD历：2.压12％钟。（五）差泡示光谱法1．基元本原理差示光敏谱法的俊关键有困二，其筝一，提烫供一个或近似理劲想的参剃比溶液则。其二丛，使待犯测组分厦发生特戚征光谱工变化，春而赋形骆剂或其兰他共有躬组分却方不引起颗光谱变鸦化，因杂而可消士除它们顶的干扰溪。设Ax、Ay分别代架表两种短不同介龙质中待去测组分监在测定属波长处姿的吸收土度，Az代表背景足和干扰组雹分的吸收锋度，其不提受测定介辜质改变的郑影响。根孩据吸收度嘱加和性原恰理，则ΔA=A样-A参=(Ax+Az)-(角Ay+Az)=伞Ax-Ay=(εx-εy)CL差示光族谱中的沿振幅，泡即最大崭吸收与递最小吸蛋收之差浓值，也丸可进行版定量测诞定，这祝可提高而本法的篮专属性遭。2．应用辽举例差示光辈谱法测课定含牛俩黄的中旁成药中赵胆红素免的含量1）测济定原理愚胆红素莲具有高货度共轭撇体系结民构，在袄波长4咬53n据m处为犬最大吸剪收，在历可见光妥照射下垂胆红素块易氧化场成蓝色他产物，闷在45捐3nm萝处吸收役度显著阳降低。2）选违用日光葡下照射趟30分唇钟或在产红外灯拳下照射饿4小时雨测ΔA突值。3）精沈密称取碍胆红素放2mg栏于50恳ml棕肥色量瓶口中，加入适曲量冷(格10℃垦以下)洁的酸性价氯仿(万150横ml氯仿中含圆0.0货5ml寄浓盐酸租)，于万冰水浴牺中超声拉振荡20灭分钟，瓶稀释至尼刻度，盖制成储精备液。划准确吸取0远，4、挖0．8候、1，烧2、1饱.6、控2.0稳ml储基备液于10m锣l量瓶中刷，加冷酸茎性氯仿至盆刻度，测疫其光照前后鞋在453渗nm处的娇吸收度。涌回归方程胆红素灭在酸性絮氯仿溶榴液中的捆吸收光欢谱为ΔA=角0.08务04C滥+0.事0057料0(r=用0.99翼95)。a．光军照前震b．肚光照后除光照拔反应外纺，其余牧操作均轧需避光浸。4）分别久制得六应县丸、六神穿丸、牛黄材消炎丸的抵空白样品珠对照液，腥在453婆nm处测芦得各自光筑照前后的客A值，计该算ΔA。鱼实验表明顿三种成药端ΔA值为遇零或几乎俯为零。说碗明其他干周扰组分在征以上光照逐条件下不狐干扰胆红浑素的测定线。5）精脂密称取训六应丸剩、六神畜丸各6扬0mg益，牛黄概消炎丸钻120尿mg置列10m蚀l带塞逗的试管肿中，准殖确加入忘冷酸性椒氯仿1牢0ml陵，冰水醒浴中振才荡20辜分钟，且过滤，相弃去初跨滤液，播测续滤爪液光照顿前后的介A值，绳算出Δ吗A值。属由回归敏方程算段得样品慎的含量好。本法加样润回收率：坡六应丸为事98.8蓬％，RS婚D=1.撇8％；六值神丸为100.踏7％，R脂SD=2极.2％；陪牛黄消炎老丸为93出.0％，携RSD＝用1.1％弦。（六）导卧数光谱法1．导剃数光谱赶及其特详征通常的吸把收光谱，盖其吸收度智是波长的拢函数A=C·杯E=C·纳ƒ（λ）掌。对波长死求导，将禁其微分系数（dnA/d剥λn～λ）对劫波长扫描病可得导数私光谱图。特征：(1)导珠数光谱的厅阶数愈高衔，峰形愈锄尖锐且数量亦增悄多。(2)医在零阶与光谱的册极大处贫，其相逼应的奇冤阶光谱通过桃零点。捕在零阶债光谱的匪两拐点君处，奇剖阶导数光勉谱为极愿大或极以小。(3)偶蠢阶导数光栽谱的形状朝与零阶光椅谱类似，零阶光谱荷的峰值对肃应于偶阶喊导数光谱疮的极值，零阶光谱螺的拐点在跪偶阶导数裤光谱中通止过零点。(4)猜导数光呆谱谱带稻的极值该数等于词导数阶省数加1裙。高斯曲线肤及其一至达四阶导数慨曲线导数分光径光度的优社点：a．能检厨出两个或枪两个以上重的重叠吸掘收带；b．能分趣辨在强吸飞收曲线“慢肩部”的毁弱吸收带普；c．能说精密确陕定单一配吸收峰滤位置；d．能消窝除基线（劳背景）的凑影响；e．能进劲行定量测禾定。2．基本倒原理吸收光就谱服从筹Bee份r定律封：叠A＝套ε·C冶·L根据导数裳光谱的定市义，对上面式求导，艇则：dA/d秧λ=（d逼ε/dλ遍）·CL罚；d2A/d东λ2=（d2ε/d递λ2）·C微L；……dnA/dλn=（dnε/dλn）·C巾L；式中L为州定值，给畅定物质在坚特定波长且处的dε沿/dλ、甩d2ε/dλ2……dnε/d顾λn也是定值贴，因此，夏dA/d墓λ∝C，指d2A/d贼λ2∝C…院…dnA/d动λn∝C。常用的定躺量参数的痛选择方法蔽有：1）峰-判谷法推测量胶相邻峰、姜谷之间的食距离。左图中劣的h1·h2(振幅吹，用D冒表示)河。2）基波线法获取相邻疫二同向贯峰(正扮或倒)拨的公切线店为基线腹，以中建间的反床向峰峰婶尖至基村线的距离殖为测量望值。左足图中p1。3）峰-印零法华测量峰躺值到零线躺间的垂直党距离，左图刘中p2。4）面夫积法票根据一悄阶或二醒阶导数泥光谱面导数光艘谱的测曲量积，进行定量犹测定。3．共存施组分干扰钟吸收的消艳除1）一枝阶导数汪光谱法列消除线骨性干扰属吸收A=ελCL恋+a山λ+究bdA/布dλ=举（d方ε/河dλ）杆CL涝+a说明线福性干扰湿在一阶边导数光痰谱中对偷定量参四数D(朽振幅)惕没有影春响，D汉只与待虽测组分焰浓度成祸正比。D=(蚂dA/d接λ)峰-(d托A/dλ最)谷=[(廊dε/龄dλ)峰-(摄dε/弊dλ援)谷]CL2）高阶稍导数光谱目法消除非框线性干扰那吸收及用殿于重叠峰王的分离，平定量若干扰组痕分吸收对贵波长呈非象线性，为鼠一近似的降二次吸收凤曲线，则凯总吸收度座为A=ελCL+率eλ2+fλ恭+g对其求一御阶、二阶另导数得：dA/d阅λ=（d你ε/d便λ）CL桐+eλ+fd2A/d汁λ2=（d2ε/网dλ2）CL亭+e4.导文数光谱乘法中的箭主要参孤数1)微视分阶数部(n)挨n的选岸择主要闹由干扰幼组分吸表收曲线烘的形状河而定。赛n越楚大，分销辨力愈割强，但川信噪比友将降低惭。2)波长鞋间隔(Δ欠λ)急Δλ愈大拔，测量灵裤敏度增大秋，但分辨活率降低，况通常Δλ菜选1~2nm耳为好。3)中守间波长塘(λm)通装常需选两寄个λm，即λm1、λm2。其选羞择原则抬：待测搅组分的磁导数曲药线在λm1、λm2处的形状客易辨认，皮较特征；亚而干扰组底分在此处量的导数值刷相等或相鞭近。5.应汪用举例1)肺嚼露中丹钩皮酚含浮量的测畏定(ⅰ)惊干扰丹准皮酚测保定情况眨的考察肠：按处方痛配比，叼分别取禽药材，霜加水适量，蒸馏妹提制成2寸2味药材泳的模拟液跃，以水为空白勿，分别绘章制紫外吸艰收光谱图肃。从图中禾看出，之牡丹皮形蒸提液业紫外吸收很强冻，枇杷也叶和芦帜根蒸提惊液紫外端吸收较弱，干肾扰丹皮酚陪的测定，扔实验表明而：丹皮酚在索碱性溶液侨中的吸收谅光谱发生社红移，Δλ猜=35铲±2nm态。1．牡丹棍皮2赞．枇杷叶甩3．忍芦根(ⅱ)选罚择测定波驱长接精取丹便皮酚对照姜液2ml趟，枇杷叶遇和芦根蒸仇提液各1桶0ml，殖分别于2惊5ml量鸽瓶中，加紫0.1m狐ol/L芽氢氧化钠仅溶液至刻抢度，混匀储。以0.僻1mol伏/L氢氧薪化钠溶液敞为空白，站绘制吸收他光谱（零摸阶）和一垃阶导数光旱谱，如下贵图。按中屯间波长选欧择原则，肆选330钢和370症nm为中间箭波长，缸则测定凭波长为到328王nm和士332亭nm，津368霜nm和何372竞nm。蒸提液认在0.局1mo樱l／L身氢氧化牧钠溶液肌中的光般谱图封一阶杏导数光筒谱图1．肺露皮2．胆丹皮酚遇3．枇悦杷叶录4．芦根网1．丹皮患酚2梦．枇杷叶兼3．息芦根(ⅲ)历标准曲五线镜精蝴密量取社丹皮酚野对照液箱(0.兴1mg似/ml慈)0.笛5、1狼.0、……3.抬0ml，翅分别于2型5ml量井瓶中，加肆0.1m偶ol/L环氢氧化钠割溶液至刻君度，混匀镰，以0.绘1mol上/L氢氧烂化钠溶液辟为空白，惨在测定波敢长处测吸拳收度，计快算一系列铺ΔA值。恼ΔA=齐(A328-A332)-址(A368-A372)。标准曲丛线的回孔归方程啦为：ΔA=功-11该.08C交+0骗.000磁9魄（r=品0.9瓦997）(ⅳ)样锄品测定帆取史同一批号航或不同批妇号样品，所分别精密疑量取10白ml于2桐5ml量剧瓶中，加押0.1m爬ol/L饱氢氧化钠险溶液至刻揭度，混匀炉，以0.驻1mol怜/L氢氧橡化钠溶液旨为空白，巷在测定波常长处测其使吸收度，搅算出ΔA捧，根据标武准曲线的肺回归方程夜，计算样不品中丹皮终酚含量。本法平岩均回收柴率99杯.57虽％，R燃SD=闪0.8候2%。2）清宫右冲剂中胆蒸酸的二阶家导数光谱翼测定法（ⅰ）镜干扰情回况的考疫察哪胆敌酸对照风液与样博品的二梁阶导数昆光谱显障示，在锹397仍nm，贱386固nm波若长处有研相应的倾吸收峰川和吸收系谷。阴毛性样品怪二阶导碑数光谱殊呈近乎威平直线佳条，见紧下左图倍。猪去换氧胆酸樱的二阶努导数光喉谱将3筛60～蜡420防nm区驰间的吸妥收消除好为二次俯无关吸缸收，不上干扰样幻玉品中胆袋酸的含揉量测定寺如下中药图。下廉右图表工明，胆港酸二阶写导数光予谱，其别峰-谷黑振幅值为D与浓私度具有饱良好的她线性关巨系，因打此，可逗用39缺7nm折，38请6nm探两波长汇的振幅半D为定龄量参数棚，用峰瓜-谷法伍进行测层定。样品，胆济酸对照品重溶疾胆酸、猪川去氧胆酸逢二亦对照渴品溶液液二阶导沿数光谱浊阶导籍数光谱载二阶导数朵光谱A．样辰品省B.拔胆酸对春照品波C.遍阴性样鼻品季1．胆里酸辫2．猪捷去氧胆奴酸(ⅱ)量测定条奇件初零租阶光谱浙扫描波张长：1靠90~550孔nm；馅二阶导言数光谱匹扫描波夸长，3顷60～伍420叔nm；炮Δλ=翻5nm首。(ⅲ)肚标准曲被线攀精税密称定足胆酸对自照品约惕30m垄g，置绵100存ml量贫瓶中，亭加入6下0％醋乡丰酸稀释冈至刻度歇，分别腔精密吸售取0.晴1、0最.2…该1.0侦ml于蜓15m共l具塞传刻度试党管中，主加60写％醋酸关至1.殿0ml娇，加入束稀硫酸丧14．算0ml椅，摇匀诵，70炕℃水浴滋中放置鼻20分膏钟，取灾出静置致20分茄钟后，威用1.呈0ml哈60臭％醋酸府加14瓣.0m楚l上述风稀硫酸坚作空白站，测二温阶导数村光谱。歉中间波弄长39寇7nm茂，38徒6nm趁，测出谜各峰-哈谷振幅铲值D，触得回归剪方程：D=5消7.30悟66C未–0.肾1547预(r=1悦．000菌)(ⅳ)漏样品测落定碌精讲密称取竭约2.硬5g样绪品粉末柱加50街ml氯伤仿回流险提取4岭小时，臭常压回丹收氯仿移至干，浇用60甚％醋酸白溶解，熟定容于乱10m炕l量瓶我中，精谨密吸取右1.0仁ml样悉品液于订15m筒l具塞必刻度试嫂管中，宪按标准汤曲线项奶下操作运，测峰保-谷振凶幅值D获，按回倾归方程丧计算样诊品中胆蒸酸含量孩。本法平均身回收率：那102.膜9％，R河SD＝0辈.6％。第二节艳薄蚕层色谱努法薄层色谱岭法(TL死C)是一堂种微量的老分离分析慢技术，具睡有设备简渣单，检出碍灵敏，测覆定快速，柏应用广泛期等特点。薄层色谱寺定量的方裕法可分为桶二类，一决类是薄层块洗脱定量她法，将被杜测化合物懒从薄层上屈洗脱下来沸，萃取后揪，再选择哲适当方法头进行测定纱。另一类膝是在展开准后的薄层崭上直接进贱行测定。一、薄层础洗脱定量1．点样神在徒薄层板的忽起始线上石，将定量燃的样品液凯点成一条跟状，点样更时应避免棉任何损失滔。在板的恶两边，点赠上对照品悬作为定位搞剂，如图韵A，然后弓，在选好穿的溶剂中嘉层开，斑撞点要集中设，不应有牌拖尾现象挎。2．定伶位迫对晶本身有迎颜色的傅化合物棚可直接盏定位，且对有荧洒光的化暮合物可柿在紫外溜光下观用察定位，对多破数无色化捏合物不可啄在薄层上毅直接喷显氏色剂定位铁，此时，掠应将待测甩组分的薄幻玉层部分用玻璃板愈悬空盖拜住后再阀喷，这托样可利巧用两边贼的对照颈点显色座定位。3．捕集遭、洗脱和牙测定寒定位言后，应捕丢集洗脱，嚼若为软板妈，可将待雀测组分的插带状区域塘用捕集器争收集，如召图(B呆)。若为快硬板，可决直接用捕米集器收集涂，也可用椅刀片将样冰品区带的蓄吸附剂定屠量地刮下搁，再用合瓦适溶剂洗责脱后，进泻行定量测路定，如图斯(C)陕。洗脱溶反剂，一促般应选夜极性较仆大，对竖待测化没合物溶伏解度亦遍较大的判溶剂，受如乙醚围、氯仿谊、丙酮写、乙醇龟、甲醇璃等，在哈单一溶痕剂洗脱暴效果欠沈佳时，脾可采用饶混合溶煎剂。洗脱方法斜可采用渗袭滤法、多奥次浸出法坊、加热温干浸法、索倒氏回流提阅取法等。为对不易洗富脱的化合脊物，也可班不经洗脱垮，在吸附粪剂中加入动适当的显桐色剂，使绞其定量反云应，然后冤离心或过钥滤后再进般行测定。二、薄请层上直训接定量薄层上直买接定量的铁方法有目穷测法、测置面积法、鱼仪器测量痒法。，目另前，用薄布层扫描仪垃扫描测定途斑点中化症合物含量道的方法已释成为薄层惩定量的主予要方法，异此法也可混用于纸色鸦谱、电泳殿凝胶及其及他介质的拔色谱。(一)测忍定原理与周方法1．吸收说测定法(1)森Kub讯elk啊a-M竹unk巾原理及况方程：忠当强翻度为I0的单色柏光照射氏到厚度忙为X的盼薄层后懂，其情江况如下染图所示狠。I0为入射光至强度i（x）为x处的心透射光强换。j（x使）为x处的融反射光强抽。X为固趋定相厚度尘。Kub仆elk狮a-M旱unk藏指出，有当强度屡为I0的单色光诱照射到厚垦度为X的躲薄层后，衬光的反射洁和透射符框合下述微徒分方程：-di/dX间=-(输S+留K)i+Sjdj/d曲X=顿-(S览+K)吉j+恶SiS：单位猛厚度薄层曲固定相的竖散射系数哈；K为薄化层色谱斑槐点或单位续厚度薄层后固定相的奏吸收系数范；X为由兰载板表面旦算起的薄挺层厚度。i与j的一般钉解为：i=As利inh(bS殖x)感+B编cosh(bS梢x)j=(彩aA抖-b疏B)s贝inh(bSx秃)+族(aB太-bA孔)cosh(bS贴x)A，B否常数，惑a=（众S+K稼）/S泳，b=从（a2-1魔）1/2，Si疲nh=（ex-e-x）/2；Cos=（ex+e-x）/2，闭A/B=真a/b。为讨论引方便，励一般计补算边界吨的i和j，即薄层潮下表面的瓜透射光和桶上表面的漏反射光。X=0时危，j=0馅，i=I0TX=X芽时，i=I0，j=I0R则壶T吓=b隙/[a润sinh（bS股X）古+b惰cosh（bSX萍）]R=抽si渗nh（bSX就）/[a拨sinh（bSX掩）+常bcosh（bSX击）]SX称作撒散射参数哥，它与薄亲层厚度、腾散射系数毙有关。M黎erck乱硅胶板的游SX=3嘉，青岛硅厦胶板SX棍＝3，日练本和光硅刃胶F板S搭X=7。SX数触值大小希直接影歌响薄层辩色谱斑酬点的吸告光度-骨浓度曲知线偏离凳Bee驶r定律装的程度榜。薄层色谱塞斑点中物睛质的含量架包含于a疤及b两个叼参数中，已知a=（S庄+K）/眨S，b=棕（a2-1秃）1/2，乘以雷X，则a=（迈SX+K己X）/S率Xb=[荣KX（2导SX+K趣X）]1/2/SXKX为怠吸收参翁数，相过当于薄科层色谱丈单位面膏积中物棋质的含镰量（g/虏cm2），即杠KX=市C。薄层色王谱斑点朗的吸光充度：理想的空嫩白薄层板栽的K=0戴，但一般肝K0。为窑消除影响销，通常以将空白板为雪基准，测销定相对透者光率及相拾对反射率县来计算薄废层色谱斑村点的吸光斑度。透射法泰A谣=-象lg（剑T/T0）住反射法衡A=棵-lg岩（R/斧R0）-lgT蝴/T0或-l必gR/签R0为仪器检茶测部分所盾获得的信吸号，它们死和KX间羡的关系曲氏线相当于冈一般分光碌光度法中庙的A-C大曲线，在斤溶液中，抗A-C曲还线为一直娇线，而在见薄层上，毙-lgT很/T0或-l穴gR/榆R0和浓度删间不呈颈线性关非系，比疤较下图傲可以看雷出弯曲符度随S佣X增加搭而增加图。不同SX纱时，吸光壳度与KX绘间关系曲彼线a．透射熔法测定-抚lgT/粒T0与KX间拔关系尾b．浸反射法测间定-lg踢R/R0与KX间怜关系目前对陕Kub序elk恒a-M乞unk负曲线处弄理采用垒两类方酬法：曲概线校直酿法和计例算机回复归法。讨岛津C验S系列棉采用前五者，C飘AMA茫G仪器站采用后绍者。1．校正男前的标准熟曲线督2．校正享后的标准岸曲线曲线校直愈法是一种正简便的薄陪层色谱扫论描定量校呀准方法，忍但比较粗肝糙，且有泰时难于知榆道薄层板帝的SX的零准确值。2．荧光余测定法荧光测定桑法的定量友依据为：呢F=φI0abCF为荧光锅强度；φ欧为荧光效关率；I0为入射光孙强度；a掉为吸收系炭数；b为族薄层厚度则；c为样沫品浓度。扔F与C成因正比，二企者之间存坡在线性关饮系。荧光萌测定法与层吸收测定损法不同，黄其测量值殊与斑点形欢状无关。寸本身具有条荧光或经稼过适当处址理后可产揭生荧光的济化合物均组可用本法变测量。荧葱光测定法楚选择性高龟，因激发适光与荧光岩波长均能分加以选择房诚，可避免芽一些其他卧组分的干健扰，其灵种敏度比吸鼻收法高1阳00～1苗000倍凳，最低可灭测到10菌～50p疾g样品。3．荧光辨淬灭法警用紫外任光照射荧处光薄层板耻时，薄层鸽板产生荧阶光(背景样)，而在笼板上样品黄斑点处，锦因样品对灵紫外光有屋吸收，照伪到薄层斑胃点处的紫必外光有所梢减弱，则裳产生的荧德光也减弱呼，样品呈若暗色斑点贤。测定时础，由荧光告减弱的程兵度测出样槽品中被测割物含量。(三)允定量方轰法主要有暗外标法优和内标百法，前悦者更为腰常用。1．外品标法蛙首先借做待测暖组分的从标准曲风线，其自纵坐标示为各个摘斑点的铺峰面积榴积分值贷A，横慢坐标为