2023年分子生物学新版题库

七、问答题1．论述原核生物转录终止。(1)转录终止两种关键机制是什么?(2)描述翻译怎样能调整转录终止。(3)为何在细菌转录终止中很少包括到Pho因子?(4)怎样能制止转录终止?2．复制DNA聚合酶(DNA依托DNA聚合酶)也有校正功能，解释为何RNA聚合酶没有这种功能。3．讨论原核生物基因表达聚合作用反应定向关键性。假如核糖体从3’端到5’端读它模板mRNA话，那么将会发生什么状况?4．概括细菌细胞内转录过程。5.概括经典原核生物启动子构造和功能，并解释什么是保守序列。6．转录怎样在基因或基因组末端终止?7．(1)怎样辨别由启动子起始转录RNA片段和5’端被加工过RNA片段;(2)证明多肽是从氨基端到羧基端方向合成。8．比较E．colirRNA和tRNA转录和加工。9．辨别可诱导和可阻遏基因调控。10．衰减作用怎样调控E.coli中色氨酸操纵子表达?11．比较并指出细菌和真核生物RNA翻译机理异同。12．什么是摇摆假说?13．指出E.coli和真核生物翻译起始不同样。14．S．NCohen于1973年构建了三个重组体，pSC102，pSC105，pSC109请阐明这三个重组体是怎样获得?各阐明了什么?15．基因克隆是怎样使具有单个基因DNA片段得到纯化?16．什么是细菌限制—修饰系统(restriction-modificatonsystem,R-Msystem)17．细菌限制—修饰系统有什么意义?18．阐明限制性内切核酸酶命名原则要点。19．Ⅰ类限制酶具有哪些特点?在基因工程中有什么作用?20．Ⅲ类限制酶有哪些特点?21．何谓限制性内切核酸酶切割频率?22．什么是限制性内切核酸酶星号活性?受哪些原因影响?23．双酶消化法(doubledigests)绘制限制性内切核酸酶酶谱原理。24．什么是DNA多态性(DNApolymorphism)?25．限制性片段长度多态性(restrictionfragmentlengthpolymorphism，RFLP)。26．计算下列三种酶各自在某染色体DNA序列上识别位点间平均距离：AluⅠ：5’AGCT3”EcoRⅠ:5’GAATTC3’3TCGA5’3’CTTAGG5’AcyⅠ:5’GPuCGPyC3’3’CPyGCPu5’(注：Py=任何一种嘧啶；Pu=任何一种嘌呤)图15.1酶切电泳图谱1～2：HindⅢ切割；3～4：ＥcoRV切割；5～6：HindⅢ+ＥcoRV；图15.1酶切电泳图谱1～2：HindⅢ切割；3～4：ＥcoRV切割；5～6：HindⅢ+ＥcoRV；1、3、5是质粒DNA：2、4、6是15号克隆。图15.2用EcoRⅠ、HpaⅡ单独切割及用这两种酶混合切割30kbBamHⅠ片段产生DNA带(1)绘制具有插入片段和不含插入片段时pBPl限制性图谱，并标明四环素抗性基因位置—;(2)假如用克隆在另一种和pBP1完全不同样源载体上四环素抗性基因作为探针，进行Southern印迹杂交，估计上述电泳图会出现什么样杂交带?(3)假如用克隆15果蝇DNA片段作为探针进行Southem印迹杂交，放射自显影成果又是怎样?28．为何大多数内切酶被称为“限制”酶。29．据Science杂志报道:一种关键遗传疾病可由导致DNA中碱基替代诱变剂在体外进行人工诱导。设计一种迅速用以鉴定疾病基因型检测措施。30．为了绘制长为3.0kbBamHⅠ限制性片段限制性图谱，分别用EcoRⅠ、HpaⅡEcoRⅠ十HpaⅡ消化这一片段三个样品，然后通过凝胶电泳分离DNA片段，溴化乙锭染色后观测DNA带型(图15.2)。请根据这些成果，绘制一种限制性图谱，要标明E.coRⅠ和HpaⅡ识别位点间相对位置，和它们之间距离(kb)。31．1967年，有5个试验室几乎同步独立发现了DNA连接酶，每个试验室试验有什么特点?32．简述DNA和RNA连接酶催化反应机制。33.影响DNA连接酶催化连接反应原因有哪些?34．什么是Klenow酶?有哪些活性?在基因工程中有什么作用?35.怎样运用T4DNA聚合酶制备3’隐含末端或双链平末端?36.怎样运用T4DNA聚合酶进行双链DNA3’末端标识?37．怎样运用T4DNA聚合酶制备平末端?38．反转录酶有两种类型，一是来源于禽类骨髓母细胞瘤病毒(AMY,aviammyeloblastosisvirus)，另一种来源于鼠类莫洛尼氏白血病毒(M—MLV，Moloneymurineleukemiavirus)，它们之间有什么不同样?39．和E.coliRNA聚合酶相比，细菌噬菌体SP6RNA聚合酶、T7RNA聚合酶和T3RNA聚合酶具有哪些优越性?40．什么是多核苷酸激酶向前反应和互换反应?41．细菌碱性磷酸酯酶和小牛肠碱性磷酸酯酶有什么不同样?在基因工程中有什么用途?42．λ外切核酸酶(lambdaexonuclease)基础活性是什么?在基因工程中有什么应用?43．Mn2+、Mg2+对DNaseⅠ(deoxyribonucleaseⅠ)活性有什么影响?DNaseⅠ在基因工程中有什么作用?44．比较S1-Mapping和Footprinting在原理上、措施上、应用上有何不同样?45．什么是复制子(replicon)?46．什么是质粒相容性?什么是不相容群?机制是什么?47．什么是质粒带动转移?48．阐明变性定位法和限制性内切核酸酶定位法研究质粒复制起点原理。49．Co1El衍生质粒拷贝数调整机理机理是什么?50．R1质粒拷贝数受到怎样调整控制?51．质粒怎样维持在细胞中稳定?52.引起质粒不相容性关键原因是什么?53．由于基因工程是人为变化遗传信息操作，因此必需注意被操作基因安全，进行严格监控，质粒载体安全性是十分关键。请问质粒载体安全条件包括哪多种方面?54．请指出质粒pSC101部分生物学特性(包括构造和遗传)及在基因工程中作用。55.自然界中具有理想条件质粒载体为数不多，虽然是Co1E1和pSC101这两个自然质粒也不尽人意，一般需要进行改造，请问质粒改造包括哪些基础内容?56.质粒改造发展过程怎样?57.在质粒中怎样增减酶切点?58．有人用限制性内切核酸酶EcoRI分别切割松弛型质粒Co1E1和严紧型质粒pSC101(各有一种切点)，然后重组连接形成一种杂种质粒pSC134，请推测这种质粒有什么特性和用途。59．现分离了4种新大肠杆菌Hfr菌株，通过中断接合试验，针对每一菌株确定了高频转移标识基因和它们进入F—受体时间分别为：标识基因和第一次进入时间Hfr1Hfr2Hfr3Hfr4man13minmal29lys16pur6trp6met14arg9trp3his23thr4mal2thr31pur3uvr20his32lac23gal14(gal、lac、mal、man不能发酵半乳糖、乳糖、麦芽糖和甘露糖；arg、his、met、trp生长需要精氨酸、组氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、嘌呤和色氨酸；uvr：紫外线敏感)。任何没有给出标识所有是不能高频转移。上述数据可以阐明大肠杆菌染色体是环状吗?以分钟表达图距构建一种大肠杆菌染色体连锁图。假定整个染色体用了100分钟转移，并且苏氨酸被认为在0分钟或10O分钟处。60．YAC克隆载体常出现哪些问题?61．为何野生型λ噬菌体DNA不适宜作为基因工程载体?62．什么是蓝白斑筛选法?63．蓝白斑筛选法为何也会有假阳性?64．什么是cⅠ筛选法?65．λ噬菌体载体具有哪些长处和局限性?66．什么是M13IG序列区?有何特点和功能?67．将野生型M13改导致基因工程载体，首先是进行酶切位点改造，请问M13中EcoRⅠ最初是怎样引入?68．以置换型λ噬菌体作为载体进行克隆时，为何说可以形成噬菌斑就一定是重组体?69．M13系列载体具有哪些优缺陷?70．粘粒载体具有哪些特点和局限性?71．辅助噬菌体DNA和对应噬菌粒是怎样协同工作?72.克隆DNA在质量上有什么规定?73．为何从细胞中分离DNA时往往会断裂?74．为何苯酚要重蒸饱和后才能用于DNA分离?75．为何氧化变色酚不能直接用于DNA分离?应怎样处理?76.在DNA分离过程中，酚一般和氯仿联合使用，虽然不联合使用也要在苯酚抽提后用氯仿再抽提一次，为何?77.阐明溴化乙锭—氯化钩密度梯度离心(ethidiumbromide-caesiumchloridegradientcentrifugation)纯化DNA原理。78.采用什么措施保证DNA化学合成定期性和专一性?79．何谓简并引物(degenerateprimer)?80．简并引物设计一般原则是什么?81．双脱氧法(dideoxynucleotidemethod)测序基础原理是什么?82．在古生物学中，尚不懂得恐龙与否是温血爬行动物，而不像今天变温爬行动物。假如你得到部分恐龙DNA，你怎样通过PCR和基因克隆来检测恐龙与否是温血爬行动物?83．假如懂得某一基因功能及其对应蛋白质氨基酸序列构成，可以通过何种措施克隆该基因?84．何谓定位克隆(positionalcloning)?85．何谓染色体步移(chromosomewalking)?86．在染色体步移中，用哪些措施获得克隆末端?87．何谓表型克隆(phenotypecloning)?88．什么是基因文库?89．什么是基因组文库(genomiclibrarY)?构建基因组文库，包括哪些基础过程?它同遗传学上基因库有什么不同样?90．什么是cDNA文库(complementDNAlibraly)?同基因组文库有何差异?91．粘性末端连接法是最常见连接措施，具有诸多长处，不过也有部分局限性，请指出这些局限性之处，92．什么是同聚物加尾连接法(homopolymertailsjoining)?用何种措施加尾?具有哪些优缺陷?93．何谓接头连接法(Iinkerligation)?94．什么是同裂酶?为何说用同裂酶进行体外重组效率最高?95．怎样使用甲基化酶对克隆DNA进行保护?有什么意义?96．何谓稀有酶?(举例阐明)97．为了大量获得诸多用于生化鉴定产物，你想将拟南芥中一种序列已知、编码单体酶蛋白基因在单细胞微生物中表达，你怎样保证最终能得到产物?98．若在进行DNA重叠群分析时，你发现在一种编码有价值但不稳定蛋白质可读框后来，紧接着另一种可读框，它可在蛋白质C末端加上一种稳定构造。举出至少两种获得被修饰蛋白产物措施。99．某一质粒载体具有Tetr和Kanr表型，在Kan抗性基因内有一BglⅠ切点。现用BglⅠ切割该载体进行基因克隆，问：(1)转化后涂皿时应加什么样抗生素?(2)培养后长出菌落具有什么样抗性基因型?(3)怎样运用抗性变化筛选到具有插人片段重组体?100．限制性内切核酸酶BamHⅠ和PstⅠ切割某一DNA序列，成果示于图20.1。图20.1BomHⅠ和PstⅠ识别序列处切割，只显示识别位点核苷酸序列(1)指出被切割DNA分子5’端和3’端；(2)假如你将切割后DNA同DNA聚合酶、4种dNTP在一起温育，这些DNA末端会有什么样变化?(3)通过B中反应后，你还可以用T4DNA连接酶将BamHⅠ末端连接起来吗?PstⅠ末端呢？（T4DNA连接酶可以连接平末端和黏性末端）(4)(3)中连接后，可以重新形成BamHI位点吗？PstI位点呢？101．什么是遗传学检测法?102．以pBR322DNA作为载体，从四环素抗性基因区克隆外源DNA时，可采用环丝氨酸富集法筛选重组体，阐明其基础原理和基础操作过程。103．放射性抗体检测法(radioactiveantibodytest)基础原理是什么?104．何谓液相杂交?举例阐明在分子生物学中应用。105.什么是活体标识法(invivolabeling)?106.单链RNA作为探针，具有哪些单链DNA探针所没有长处?107.什么是随机引物(randomprimer)?怎样标识DNA?108．良好固相支持物必需具有哪些优良特性?109．以硝酸纤维素滤膜(nitrocellulosefiltermembrane)作为杂交固相支持物具有哪些优缺陷?110．什么是印迹(blotting)杂交?111．什么是斑点杂交(dothybridization)和狭缝杂交(slothybridizatlon)?112．什么是原位菌落杂交(colonyhybridization)?113．阐明Southern杂交原理和措施。114．Northern印迹和Southern印迹有什么不同样?115．建立了一种基因文库后，怎样鉴定一种携带目的基因克隆?116．阐明原核生物基因表达正控制诱导型（positiveinduciblecontrol）和负控制阻遏型（Negative-represiblecontrol）调控遗传机理。117．一种四核苷酸序列DNA分子，经羟胺处理后，再通过两次复制，会产生什么样DNA分子？（5分）118．有一段多肽链C端氨基酸残基Tyr-Pro-Asn-Val-Thr-Cys-Glu,其对应DNA序列为（SS-1）GATAAGCGTGCATGTAAGCCCCAT（SS-2）CTATTCGCACGTACATTCGGGGTA119.已知E.Coli基因组DNA具有4.2×106bp，Cot/2为4。鸡管状细胞内DNA具有7×108，其复性动力学曲线为：祈求出鸡细胞DNA中，中度反复序列组分每一反复单位核苷酸？及反复频率？120.将一种重组质粒PMR1分别感染三个被λphage溶原E.coli菌株（三菌株差异为λphagepRoR区段分别为或w.t或oR1—或oR2—），培养于含ONPG（邻硝基苯—β—半乳糖苷）培养皿中，在加入不同样IPTG（异丙基—β—D—硫代半乳糖苷，类似于乳糖，作为效应物分子）培养皿中，检测被LacZ酶分解ONPG黄色色度，并换算成Z酶酶活，请根据测定成果鉴定这三条曲线分别代表哪一种测验菌株？为何？121.某毕生物DNAchemicaicomplexity=8.82×108bp，复性动力学研究表明约有40%DNA其Cot(1/2)=5,请较详细地阐明这部分DNA特点。（E.coliDNAkineticcomplexity=chemicalcomplexity=4.2×108bp，Cot(1/2)=4）122．分别阐明λphage如下突变型体现型并简述其分子机理：λ[cⅠ]—,λ[cⅡ]—,λ[hfl]—,λ[cro]—123.阐明constitutivesplicing和alternativesplicing,cis-splicing和trans-splicing之间在概念及机制上辨别。124．E.Coli阿拉伯糖（Arabinose）分解酶操纵子（araoperon）调整基因I发生突变后，虽然在培养基中加入效应物（Arabinose），操纵子仍处在关闭状态。将构建i—/I基因部分二部体E.Coli培养在具有阿拉伯糖培养基中，操纵子处在开放状态。请阐明araoperon调控类型，并推测i—突变基因基因型。（简述推论理由）125．简述λphage选择溶原途径（lysogenicpathway）分子生物学原理。126.请阐明一种运用PCR技术进行目的基因定点突变技术路线及原理。127．拟应用苏云金秆菌中一种毒素蛋白基因培育抗虫作物品种。请提出一种从基因分离开始到品种推广为止试验方案。并指出值得注意关键问题。128．阐明不同样种属植物基因组共线性发现理论和实践意义。129．基因组研究对作物遗传改良将会产生哪些影响？130．你正在克隆一种基因。目前你己得到了数个DNA片段。下一步你将怎样从中鉴定出你所期望得到目的基因。131．谈谈基因工程基础环节，阐明关键工具酶在各个环节中作用。132．根据你对分子克隆载体理解，对克隆载体类别，用途及各自特殊性加以简述。133．以E.Coli为例，简述其基因重组类型，作用机理及其在分子生物学研究中应用。134．怎样解释抗体生成多样性分子机理。135．假如你发现了一种新蛋白质，你将怎样进行下一步研究?请按前后次序列出基础方案。136．应用生物技术创立作物新种质有哪些途径和措施。137．分子标识辅助选择在作物育种中有那些关键作用?怎样实行?138．阐明真核生物前体RNA加工类别及机理。139．阐明原核生物和真核生物转录元件(cisandtrans)特点。140．简述人类基因组研究数年来进展。141.阐明DNA芯片(含OligonucleotidechipandcDNAmicroarray)技术基础概念和也许用途。142.怎样确定细菌某一种遗传表型是由染色体控制还是由质粒控制。143.简述DNA重组多种不同样措施及分子机理。144.比较阐明原核生物和真核生物在基因表达水平上异同。145．至少列举三例(除DNA双螺旋构造外)阐明核酸分子构造研究成果对分子生物学理论发展关键奉献．146．阐明生物体保证自身稳定遗传机制。147．阐明蛋白质和DNA之间序列非线性有关原因。148．在核苷酸测序操作中，运用哪多种途径分别获得一种片段两条单链序列?各自理论根据是什么?试言简意赅地加以论述。149．到目前为止，在高等生物中根据性状体现分离未知产物基因采用哪些途径?请阐明多种途径基础原理并各举一例。150．请以基因组研究新进展为例，讨论分子生物学发展和生物技术产业化关系。151．试述作物遗传资源关键性，何谓作物遗传资源创新?152．运用分子标识进行基因定位遗传群体有多种?各有什么优、缺陷?153．就你所熟悉某一作物，简述作物杂种优势研究和运用现实状况。154．你对“基因工程育种”有何评价?155．何谓断裂基因(splitgene)?何谓重叠基因(overlappinggene)?它们在生物进化和适应上有何意义?156．何谓分子标识?分子标识种类有哪些?可以开展哪些领域研究?157．自花授粉作物和异花授粉作物育种措施有何异同?数量性状怎样进行改良?158．在提取由ColEI所衍生质粒(如pBR322)时，常在培养携带质粒大肠杆菌摇瓶中加入一定浓度氯霉素或壮观霉素以扩增质粒DNA。质粒DNA扩增理论根据是什么?这种质粒DNA扩增措施为何并不具有普遍性?159．E.ColiK12菌株限制一修饰系统分别由R.M基因控制既有K12三个突变菌系，当用A噬菌体分别感染三个突变株后，将放出噬菌体再去感染这三个菌株。得到如下不同样eop值，请鉴定这三个突变株有关（R.M）基因型。放出A原始菌株K12-1K12—2K12—3K12-1111K12—210-211K12—3111160．既有两种DNA片段：1）ATTCCAGGATCCTGGCACCGTAAGGTCCTAGGACCGTGGC2）CGATCTCCTAGATCTCACGCTAGAGGATCTAGAGTG分别用形成等列序列同裂酶<Isoschizomer>MboI和Sau3A消化后，混合，加入连接酶，会形成什么样DNA片段。161．既有枯草杆菌dnaG基因一种终止突变型菌株，当用HA处理后，会得到什么成果？阐明理由。162．下表中，a、b、c代表E.coliLacoperon中i、o、z三个基因。A）根据不同样试验菌株在效应物有无条件下，测定Z酶表达成果，阐明a、b、c各代表哪个基因。B）用i、o、z三个基因代号写出第①、⑤菌株也许基因型。菌株基因型有Lac无Lac①a-b+c+++②a+b+c-++③a+b-c+/F’-a-b+c-++④a+b+c-/F’-a-b-c++-⑤a-b=c+/F’-a=b-c-++163.一位科学研究λ噬菌体一种蛋白质功能时，获得了如下多种试验成果。A、当用HA处理野生型λ噬菌体后，分离得到一种突变体a(mu+a)，它只产生该蛋白质一种片段。B、当用5Bru处量muta后，又分离出两个突变体，mu+b,mu+c，它们也只产生和muta后相似长度该蛋白质一种片段。C、mu+a，mu+b,mu+c分别可以在不同样Su+基因型细胞内合成该蛋白质正常多肽链。基因型Su-Su2+Su4+Su6+Su-→Su+DNA序列突变5°CGA3’3°GCT5’↓5°CTA3’3°GAT5’TTGAAC↓TTAAATCCAGGT↓TCAAGTmu+amu+bmu+c————+—+————+D、当感染有mu+aSu4+细菌分别和感染有mu+bSu2+感染有mu+cSu6+细菌结合后，没有野生型重组λ噬菌体产生，不能在野生型Su-受菌体内繁殖，但当感染有mu+bSu2+和感染有mu+cSu6+细菌结合后很少数野生型λ噬菌体产生。请推测mu+a,mu+b,mu+c分别在su4+、su2+、su6+细菌内产生蛋白质和野生型λ合成该蛋白质差异，并解释A、B、C、D成果。（CAA为谷氨酰胺密码子：UCG为丝氨酸密码子；UGG为色氨酸密码子）164．大豆phasealin(菜豆朊)是在种子内特异表达一种分泌性蛋白，请用线段示意出该基因在DNA水平上所有构造区域，和Pre-mRNA，mature-mRNA，多肽链对应区域，并标明各区域名称。（提醒：该基因各区域包括：Promoter（含3个关键Site或Box）,Terminator,LeaderSeq.,Trailerseq.,Signalseq.,Chambonrule,Shine-Dalgarnoseq.,2个Intron,3个Exon,Addingtrailersignaler,Repeatseq.inCTU.）165．有人错误地认为“E.colitrpsynthetaseoperonic突变型是由于ic基因产物可以分解效应物分子所形成”，对的理解是什么？怎样用遗传学试验否认这一说法？166．用HA处理W.t枯草杆菌，得到分别两个不同样位点上发生了无意突变菌株，mut1,mut2，并证明这两个无意突变序列不同样。当再用HA处理这两个突变株后得到了如下成果。mut1mut2诱发DNA水平发生答复突变--诱发一种无意序列变成另一种无意序列+-167．将E.coliLacoperon中IPO片段和yeastHO基因构成重组DNA分子和带Leu+基因质粒连接，转化到Yeast27B菌株中（基因型为HMLaLeu-MATαHMRaSIR.ho）将转化子涂于分别具有Lactose,Maltose,Lactose+Glucose培养皿中，当长出菌苔后，再分别涂上DC14菌株（a结合型），DC17菌株（α结合型），请鉴定在哪些培养皿中会出现二倍体杂合菌落，并阐明推论根据。27BM27BMal27BLac27BLac+Gluc27BMal27BLac27BL