各类成分分析 生物碱

各类成分分析生物碱第1页，共33页，2023年，2月20日，星期一生物碱*皂苷*黄酮*蒽醌挥发油第五章各类成分分析第2页，共33页，2023年，2月20日，星期一一、概述二、理化性质*三、供试品溶液制备（提取、净化）*四、鉴别：理化鉴别、TLC*五、含量测定：总成分、单体成分第五章各类成分分析第3页，共33页，2023年，2月20日，星期一春花秋月何时了，往事知多少！小楼昨夜又东风，故国不堪回首月明中。雕栏玉砌应犹在，只是朱颜改。问君能有几多愁？恰似一江春水向东流！虞美人

——

李煜马钱子腰直不起，头足相就，状如牵机而死——强直性惊厥第4页，共33页，2023年，2月20日，星期一1988年奥运会，卡尔·刘易斯，麻黄碱

1992年奥运会，巫丹，士的宁1992年奥运会，玛丽·乔·费尔南德斯

，伪麻黄碱

1994年世界杯，马拉多纳，麻黄碱

2000年奥运会，拉杜坎，麻黄碱

生物碱与兴奋剂第5页，共33页，2023年，2月20日，星期一生物碱与毒品伪麻黄碱麻黄碱冰毒第6页，共33页，2023年，2月20日，星期一一、概述黄连：小檗碱、巴马汀、药根碱、表小檗碱苦参：苦参碱、氧化苦化碱益母草、延胡索、黄柏、贝母麻黄：麻黄碱、伪麻黄碱马钱子：马钱子碱、士的宁第一节生物碱第7页，共33页，2023年，2月20日，星期一麻黄碱小檗碱1、结构：C、H、O、N，碱性二、理化性质第8页，共33页，2023年，2月20日，星期一2、溶解性亲脂性：大多数，氯仿中溶解度最大亲水性：少，季铵型二、理化性质一般都易溶于酸水第9页，共33页，2023年，2月20日，星期一3、沉淀反应：

1）碘化铋钾（BiI3·KI）

2）雷氏盐NH4[Cr(NH3)2(SCN)4]

3）苦味酸干扰：蛋白质、多肽、鞣质沉淀特点：酸性水溶液（苦味酸在中性）中

沉淀常易溶于有机溶剂

沉淀有颜色二、理化性质第10页，共33页，2023年，2月20日，星期一4、光谱特征小檗碱：225、270、331nm366nm下有荧光麻黄碱：210nm二、理化性质第11页，共33页，2023年，2月20日，星期一1、有机溶剂提取法：

碱化+CHCl3士的宁的含量测定：

P127

碱化+CHCl3提取→酸水提→碱化→CHCl3萃取三、供试品溶液的制备第12页，共33页，2023年，2月20日，星期一2、氧化铝柱色谱法：

益母草（药典P203）水苏碱的薄层鉴别：

取本品3g→乙醇回流提取→上活性炭-氧化铝柱→乙醇洗脱→收集三、供试品溶液的制备第13页，共33页，2023年，2月20日，星期一3、离子交换树脂法：

益母草流浸膏（药典P280）水苏碱的含量测定：

取本品5g→盐酸调pH1~2→加置强酸型阳离子树脂柱→水洗脱（弃去）→氨水洗脱→收集三、供试品溶液的制备第14页，共33页，2023年，2月20日，星期一（一）理化鉴别马钱子散：马钱子、地龙取马钱子散→加浓氨试液→三氯甲烷浸泡→滤过→滤液蒸干→加稀盐酸→加碘化铋钾试液→黄棕色沉淀四、定性鉴别第15页，共33页，2023年，2月20日，星期一（二）薄层鉴别1、展开系统：乙二胺、氨水P122正丁醇-盐酸-水（4:1:0.5）生物碱盐四、定性鉴别2、对薄层板改性：1~2%NaOH溶液例：黄连中生物碱

苯-EtOAc-MeOH-异丙醇-水（6:3:1.5:1.5:0.3）置氨水饱和的展开槽第16页，共33页，2023年，2月20日，星期一2）显色剂：例：苦参：氧化苦参碱（药典P141）3、检视：

1）365nm下看荧光例：黄连：小檗碱①改良碘化铋钾②稀碘化铋钾+亚硝酸钠乙醇液四、定性鉴别第17页，共33页，2023年，2月20日，星期一（一）总生物碱1、酸碱滴定法：返滴法2、分光光度法直接测定法：小檗碱比色法：苦味酸、雷氏盐P125排除干扰：化学分离、柱色谱五、含量测定第18页，共33页，2023年，2月20日，星期一例：雷氏盐比色法B+NH4[Cr(NH3)2(SCN)4]=BH[Cr(NH3)2(SCN)4]

↓1、在酸性介质中定量反应2、反应物有颜色，其吸光度取决于硫氰酸铬铵部分3、反应物不溶于水，易溶于丙酮第19页，共33页，2023年，2月20日，星期一例：雷氏盐比色法P71益母草口服液中生物碱的含量测定测定方法：1、沉淀过滤，溶于丙酮，直接测定A2、滤除沉淀后，测定残存的过量雷氏盐，间接计算又如：产妇康颗粒第20页，共33页，2023年，2月20日，星期一1、HPLC：①离子抑制色谱：二乙胺、三乙胺

例：浙贝母药典P205②离子对色谱：SDS、辛烷基磺酸钠常加入缓冲盐

例：HPLC测小檗碱（二）单体成分五、含量测定第21页，共33页，2023年，2月20日，星期一乙腈-水（50：50）每100ml含0.34gKH2PO4和0.17gSDS牛黄千金散中盐酸小檗碱乙腈-水-二乙胺（70：30：0.03）浙贝母中贝母甲素和贝母乙素小儿清热止咳口服液中盐酸麻黄碱乙腈-0.1%磷酸溶液（含0.1%三乙胺）（3:97）第22页，共33页，2023年，2月20日，星期一流动相缓冲盐的pH值对药物的保留行为有影响，甚至会显著改变某些碱性药物的保留行为如图所示。流动相pH值对保留时间的影响色谱柱：NucleodurC1815cm4mm流动相：乙腈-10mM碳酸氢铵＝50：50,A：pH=3.0B：pH=10.0检测波长：240nmpH=3.0pH=10.0第23页，共33页，2023年，2月20日，星期一流动相pH值对保留时间的影响色谱柱：NucleodurC1815cm4mm流动相：梯度洗脱程序

A乙腈-20mM磷酸氢二铵,pH=2.5B乙腈-20mM磷酸氢二铵,pH=10.0检测波长：254nmpH=2.5pH=10.0第24页，共33页，2023年，2月20日，星期一流动相组成对药物保留行为的影响组成：生物碱1、2、3、4检测波长：280nm色谱柱：Kromasil15cm4.6mm流动相：APiCB6流动相-PICB7流动相＝1：1BPiCB6流动相-PICB7流动相＝4：6PICB6流动相：己烷磺酸钠1.88g＋甲醇260ml置1000ml量瓶中，用水稀释至刻度PICB7流动相：庚烷磺酸钠0.28g＋甲醇260ml置1000ml量瓶中，用水稀释至刻度第25页，共33页，2023年，2月20日，星期一流动相组成对药物保留行为的影响色谱柱：Kromasil15cm4.6mm检测波长：280nmPICB6：己烷磺酸钠1.88g＋甲醇260ml置1000ml量瓶中，用1%的醋酸稀释至刻度。PICB7：庚烷磺酸钠0.28g＋甲醇260ml置1000ml量瓶中，用1%的醋酸稀释至刻度。CPiCB6流动相-PICB7流动相＝1：1DPiCB6流动相-PICB7流动相＝9：1第26页，共33页，2023年，2月20日，星期一③封尾技术：消除或屏蔽残留—Si-OH技术1：小分子键合技术2：较大空间位阻的异丙基或异丁基（R基团）第27页，共33页，2023年，2月20日，星期一2、TLCS：五、含量测定益母草：药典P204黄连：药典P213

荧光扫描,激发波长=366nm显色，λ=510nm测吸光度士的宁：药典P319

荧光淬灭扫描,λs=254nm第28页，共33页，2023年，2月20日，星期一黄连第29页，共33页，2023年，2月20日，星期一3、高效毛细管电泳法（HPCE）原理：电场下溶液中不同荷电物质迁移速度不同五、含量测定第30页，共33页，2023年，2月20日，星期一原因：管内壁硅羟基解离释放H+使溶液带正电五、含量测定第31页，共33页，2023年，2月20日，星期一迁移速度：阳离子>