X年中国药典微生物检验主要增修订内容

2010年版中国药典

微生物检验主要增修订内容1增修订背景药品微生物限度检查、无菌检查各论标准化的研究药品微生物限度检查用培养基灵敏度检查方法的研究中国药典与国外药典细菌计数方法的比较离心集菌法标准化的研究贴膏剂微生物限度检查法的研究大肠菌群检查用培养基的比较白色念珠菌检查法的研究防腐剂效力测定方法的研究药品微生物检验替代方法验证的方法研究2浙江所承担的主要工作科研工作药品微生物检验替代方法验证的方法研究药品微生物限度检查、无菌检查各论标准化的研究药品微生物限度检查用培养基灵敏度检查方法的研究中国药典与国外药典细菌计数方法的比较大肠菌群检查用培养基的比较附录增修订工作药品微生物检验替代方法验证指导原则3主要成果药品微生物限度检查和无菌检查的各论标准化修订了无菌检查法增修订了微生物限度检查法修订了一个指导原则－灭菌法新增了四个指导原则抑菌剂效力检查法指导原则药品微生物实验室规范指导原则微生物限度检查法应用指导原则药品微生物检验替代方法验证指导原则4各论标准化微生物限度检查各论富马酸酮替芬滴鼻液、聚维酮碘溶液5各论标准化无菌检查各论亚叶酸钙注射液注射用泮托拉唑钠复方庚酸炔诺酮注射液甲硝唑注射液注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠

6无菌检查法前言部分培养基灵敏度检查稀释液、冲洗液等方法验证薄膜过滤法培养及观察结果判断表1、表2和表37前言部分规定了防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出规定了日常检验还需要对环境进行监控对无菌检查的人员资质提出了要求8培养基删除了硫乙醇酸盐流体培养基用于培养好氧菌、厌氧菌的规定删除了改良马丁培养基用于培养真菌的规定9灵敏度检查修订了黑曲霉的孢子悬液制备方法，规定应使用含0.05％（v/v）聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液稀释规定了稀释后的工作用菌液的保存条件和保存期限10稀释液、冲洗液等规定可根据供试品的特性，选用其他经验证的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液11方法验证标准菌种的选择上，删除了铜绿假单胞菌，增订了大肠埃希菌明确规定了薄膜过滤法验证时，应取每种培养基规定接种的供试品总量用于过滤12薄膜过滤法增订了抗生素供试品应选择低吸附的滤器及滤膜的规定对每片滤膜的总冲洗量进行了规定，不得过1000ml修订了无菌气（喷）雾剂供试品的检验方法，规定冰室的温度应至少为-20℃对装有药物的注射器供试品的检验方法进行了详细的规定13培养及观察对于培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生长的情况，删除了可划线接种于斜面培养基上的规定，同时删除了可根据斜面是否有菌生长而判断的规定14结果判断增订了阳性对照管和阴性对照管的实验结果对于整体实验结果判断的作用15表1、表2和表3表1修订了注释项，对供试品容器装量不够接种两种培养基的情况，明确规定最少检验数量应加倍表2修订了表格名称，明确了该表格用于确定液体制剂的最少检验量修订了注释项，对供试品容器装量不够接种两种培养基的情况，明确规定最少检验数量应加倍表3修订了表格名称，明确了该表格用于确定固体制剂的最少检验量修订了注释项，对供试品容器装量不够接种两种培养基的情况，明确规定最少检验数量应加倍16微生物限度检查法前言及检验量供试液制备计数实验的培养基适用性计数实验的方法验证计数实验的操作方法控制菌检查的培养基适用性控制菌检查的方法验证控制菌检查的内容标准体系17前言及检验量前言中修订了控制菌检查的温度，规定与细菌计数实验温度相同，均为30～35℃前言中增订了对于特殊品种可以最小包装单位报告的规定检验量中对要求进行沙门菌检查的供试品，其检验量应增加20g或20ml的规定18供试液制备增订了贴剂供试品的制备方法修订了离心沉淀法，删除了高速离心的规定，并对该方法的使用范围进行了限定19计数实验的培养基适用性该部分内容均为新增规定了该内容的应用范围采用标准菌种计数，回收率以及形态比较的判定方法标准菌种为：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉；规定了稀释后的工作菌液的保存条件和保存期限引入了对照培养基的概念判定的依据：回收率大于70％，且形态一致20计数实队验的方乱法验证增订了常稻见干扰物河的中和剂柜或灭活方洽法的参考丧表格对采用多码种方法仍垂无法得到绕满意验证其结果的情晒况，提供枝了两种办诵法允许使用册更高稀释珍级的供试圆液进行方代法验证实芦验，并以菠该稀释级青供试液作汽为最低稀缸释级供试性液进行供应试品检验允许选择型回收情况验最接近要寄求的方法效和试验条匠件进行供柄试品的检扁验21计数实岔验的操储作方法平皿法删除了应府取2～3啄个连续适兵宜稀释级扔供试液进荒行检验的男规定细菌培养旋时间延长婆为3天，没霉菌、酵侄母菌培养铅时间延长循为5天；址规定必要般时均可延拆长至7天菌数报吉告规则旁进行了保修订：悼计数不斩再设置沉下限；铜以最高全的平均摆菌落数予乘以稀旬释倍数吵的值报召告供试己品中所若含的菌蜘数薄膜过滤幸法滤膜直劲径调整敢为约5捎0mm桥，并规搏定若采直用其它畅直径的释滤膜，躺冲洗量筝应进行枕相应的而调整总冲洗量秋规定不得阵超过10毁00ml22控制菌厅检查的时培养基班适用性该部分途内容均典为新增规定了该寻部分内容贵的应用范饼围以及检交查的项目采用标准铺菌种比较意的判定方赔法根据培养境基的用途础不同，分丽为增菌培仁养基的促裤生长能力影、固体培设养基的促别生长能力涛、培养基荣的抑制能渠力、固体窃培养基的汪指示能力赶、液体培志养基的指屡示能力等查5种检查环方法在检查中白引入了涂三布接种的裙概念23控制菌检宫查的方法酷验证删除了既阴性菌挤对照组兵的概念24控制菌检敲查的内容所有的生备化试验均乞修订为鉴庭定试验大肠菌群斩的培养基套进行了修宰订，现改撇用乳糖胆饱盐发酵培罗养基梭菌的增戏菌培养基摄修订为梭殊菌增菌培单养基，删妙除了庖肉桑培养基增订了嗓白色念蛋珠菌检之查法，洪并增订旅了与之粗相关的所培养基25标准体系菌落计炎数单位区从“个盐”修订泥为“c惹fu”阴道、尿奇道给药制毛剂增订了毫白色念珠锹菌控制要轰求直肠给凤药制剂茧删除了妖大肠埃工希菌的烘控制要莲求26灭菌法前言湿热灭菌铜法过滤除泪菌法生物指示孤剂的制备27前言修订了灭欢菌法的定围义，强调饿灭菌法的估作用是使呜被灭菌物氧品中残存观微生物的眯概率下降凡至某一预厘期水平，暗从而突出惨了灭菌不鸡是绝对的汁这一理念朗。修订了无棵菌保证水误平的表述士方式，强铺调其含义猫在于物品把中活微生蜂物的概率胸降低至某恶个可接受凉的水平。董明确了对痰于最终灭产菌物品而赴言，其微辈生物存活林概率，即小无菌保证扒水平不得王高于百万浴分之一。在选择确击定灭菌工疫艺时，增册订了应考湿虑灭菌后毅物品的稳够定性的规啊定。28湿热灭菌暮法增订了选膛择湿热灭已菌条件时澡应综合考字虑的因素道，如灭菌柴物品的热赞稳定性、笛热穿透力即以及微生咳物污染程洁度等修订了库F0值的概念反，突出了叹等效12通1℃标准马灭菌时间符的含义规定当选制用F0值概念进远行灭菌程岗序控制时浩，除了对食灭菌程序纪进行验证手外，还必揭须在生产僻过程中对架微生物进岩行监控，歇证明其数候量低于设样定的限度对热不滴稳定物孙品，强愤调应在徐生产全些过程对忍产品中馋污染的侦微生物观进行连晶续监控姑，并防鬼止耐热气菌的污仔染。规说定这一底类产品略的F0值一般不扰低于8m睛in，删福除了“如套产品的热瞎稳定性很床差时，可娱允许湿热俩灭菌的F0低于8”匀的规定。29过滤除菌畅法对过滤愁器孔径姿的定义驴进行了客说明，敞强调孔世径与微哭生物的饲截留性肠能有关勉，而不晓是平均众孔径的仇分布系食数根据滤器帮孔径的定什义，规定坐用于最终狸除菌的过铺滤器，必汗须选择除讲菌级过滤影器，并应芽提供截留脚实验证明对过滤担器的稳扒定性以奶及与被榆过滤液遵体的相暴容性进将行了规毛定，明币确过滤裤器使用盈者具有纹了解并屈评估这判些性能条的责任增订了滤吴膜完整性棉测试的标锅准，指出四该测试标浸准应来自惹于相关细谨菌截留实治验的数据规定了过泳滤操作的林生产环境嘱－无菌环贺境，将原动标准中的为“建议”靠修订为“映应”30生物指樱示剂的捡制备规定生物涉指示剂在止制备完成愚后，应测伏定D值和陈孢子总数主。31药品微言生物实开验室规辈范指导扑原则前言人员培养基菌种实验室忧的布局刻和运行设备文件实验记练录结果的来判断32前言规定了该丧指导原则躁用于指导宁质量控制指出制订障实验室规浸范的必要链性人员人员的隶专业背悼景人员培辜训应覆户盖仪器撒设备操需作、微拒生物检钟验技术逆和实验被室生物剪安全等应通过内湾部质量控蛛制、能力侦验证或使字用标准菌才株等方法艇评估检验浮人员的能佣力33培养基培养基的沙制备应按处方含配制培养潮基，也可剧使用市售茎的脱水培逼养基配制培养废基的水应泳该是纯化廊水培养基扩灭菌一崭般采用洗湿热灭籍菌技术怨，特殊挎培养基弯可采用刷薄膜过兼滤除菌培养基椒应采用材验证合修格的灭店菌程序讽灭菌。抢应对高子压灭菌告器的蒸林汽循环兔系统进让行验证仍，确保且在一定懒装载方蠢式下的该正常热谱分布应确定每杠批培养基鼻灭菌后的牺pH值（匠25℃下扎测定）应对分装远后的培养星基进行质于量检查，栽并记录批椒数量、有丑效期及无访菌情况等扶信息34培养基殃的贮藏自配培菠养基应俯标记名仰称、批杏号、配该制日期捡等信息渔，商品拥化的成脊品培养求基应标钳记名称寇、批号刚、生产状日期和足失效期口等信息保。灭菌后锅的培养渴基应尽朽快从灭歉菌器内眯取出，廊琼脂培倡养基应反防止冷仿冻，容摔器应密志闭，防亿止水分誉流失；毁琼脂平牧板宜临余用新配抢，如置稀冰箱保坡存，一穴般不超哈过一周雾，如需及延长，虚则应对烈保存期左进行验菊证。固体培养挖基灭菌后搅只允许再去融化一次予，一般采呈用水浴加停热或流通闲蒸汽的方载式，如使秧用微波炉将，应避免茂过度加热榆和水分流泊失。融化厕后的培养雅基应置4吊5～50差℃的水浴弦中保温，辰时间不得恋超过8小洞时。35培养基的棍质量控制绸试验实验室应钢制订培养磨基质量控粗制程序所有配制惧好的培养党基均应进毙行质量控灭制试验培养基质勉量控制的租项目有：朗pH值、绞适用性检桑查和定期狐的稳定性距检查当培养隐基的配聪制和灭卧菌程序店等均已户验证，玩则同一颈批次的宋脱水培遍养基的等适用性巧检查试这验可只亮进行一简次用于环境波监控的培善养基须特可别防护，拾用于关键架区域监控缓的培养基镰宜双层包接装和终端由灭菌，以题防出现假卡阳性36菌种菌种的怖来源：淹已认可铲的国内茄或国外提菌种保辽藏机构怜的标准脆菌株，榜或与标它准菌株轰所有相跳关特性滚等效的谋商业派别生菌株由标准牲菌株复搜活得到诉的为标康准储备刺菌株；结应对标裂准储备晓菌株进进行纯度妄和特性拨确认；结建议采来用冻干递、液氮邪或超低旷温保存捐的方法使用标壁准储备幼菌株制梁备工作功菌株冷冻菌镰株解冻丧后，不赤得重新由冷冻和硬再次使交用工作菌株曲的传代次谨数不得超昂过5代代的定义集：活的培怨养物接种觉到微生物挺生长的新仗鲜培养基揭中培养，逐任何亚培惨养的形式释均被认为嚼是转种或三传代一次实验室应蹦建立文件锐化的程序除管理菌种帽（从标准蛇菌株到工蝴作菌株）37实验室搞的布局表和运行实验室布润局的原则飞：最大程攻度防止微赤生物的污蓝染，防止斤检验过程色对环境和胳人员造成岭危害实验室应脆具备：满旦足无菌检顿查、微生览物限度检冠查和无菌尘采样等活兴动的独立孕设置的洁潮净室（区缠）或隔离秃系统；配硬套的细菌疯（真菌）培实验室、迫培养室、吊准备区、诉样品接受朱和贮藏区眯、标准菌轧株贮藏区刚、污染物结处理区和鸡文档处理调区等辅助她实验室；喇上述区域哲应明确标贷识应建立洁道净区的使矿用、维护拣、验证等通活动的标棕准操作规书程实验室的游操作应避蒜免交叉污虽染应建立实嗽验室生物骆安全的应牺急控制预稍案应建立格微生物亮实验废如弃物的搬处理规类程38设备微生物父实验室枪所用的涛仪器设您备应定才期校准锅，并记赴录培养箱、麦冰箱等重惩要设备应羽确保状态巨正常，并约有措施保皇证其工作最的连续性培养箱、故冰箱、灭洋菌器等应澡对关键参准数进行连堵续观测和挺记录，应诊评估发生绵的偏差对灭实验结果功的影响水浴锅劈燕、培养零箱、冰遥箱和生液物安全滋柜等应扔定期清础洁和消江毒无菌器摄具应有热明显的仰标识39文件一般包跪括以下也内容人员培训情与资格确彼认设备验低收、检虎定（校雁准、期象间核查治）和维篇修设备关键控参数和使倍用记录（勉如24小盯时或7天华记录图）培养基提制备、唇贮藏和刘质量控琴制检验过宇程中的鹿关键步身骤数据记录其与结果计道算数据偏牌离的调柔查40实验记植录原始记录哄至少包括锁以下内容实验日继期检品名称实验人员控姓名实验方研法实验结禾果偏差（仿存在时瓣）实验参数眨（设备、萍菌种、培誓养条件、晕培养基信碰息等）签名41结果的券判断主要是对猎不符合标检准的结果挥进行判断导致不符盟合的原因实验过粥程中的木污染样品污第染了超中过限度扮标准的渠微生物对前一翁种原因亲，应充景分考虑鹅实验室牲环境、壁抽样条量件、样耍品检验周过程等拉环节如确定为例第一种原费因，则应世判结果无膏效，重新芹进行实验对重试应桂加以监控42微生物限播度检查法攻应用指导所原则制订该坦指导原加则的目枕的在于牙指导对冲微生物逮限度检搅查法的榴应用，莫是对该婚检查法吧某些未久尽事宜脆的说明主要对以软下内容进趴行了说明应采用产缝品中可能重污染的微活生物进行秃表面活性舱剂、灭活部剂、中和耻剂等的毒振性试验应选择操岁作简便、迎快速的检士验方法，讲避免对微包生物的损慌伤；去除位抑菌作用爪首选薄膜摸过滤法对离心恼法限制洞使用的段原因作迹出了解拳释43对培养李基适用映性实验后中提到继的对照拘培养基票作出了郊说明，蒙并指出液由中检购所提供箭。对方法招验证中厘允许使葬用更高垦稀释级躁供试液哀进行验尖证作出紫