标准病理组织制片和染色技术

标准病理组织制片和染色技术第1页，共121页，2023年，2月20日，星期一一、前言

病理组织制片和染色技术是病理学的重要组成部分，病理的教学、科研、临床活检、尸解检验、诊断等都离不开制片染色技术工作。因此，组织的制片和染色技术是研究病理学的重要的方法和手段之一。

第2页，共121页，2023年，2月20日，星期一

近年来病理技术不断发展，如特殊染色、组织化学、免疫组织化学（免疫荧光组织化学、免疫酶组织化学）细胞培养、原位分子杂交、放射自显影、原位PCR技术等在广泛的应用和提高，大大促进了病理学科的发展，把病理学推进了一个新的领域，但这些新技术也都建立在病理组织制片或染色基础上，所以要认识制片和染色技术的重要性，不但要学习新技术，更要掌握这一传统的病理技术，共同推向病理学科的发展。

第3页，共121页，2023年，2月20日，星期一

组织制片技术的应用，从1665年由Hook发现细胞开始已300多年历史，最早应用冰冻切片随后又发展了石蜡切片，后来又利用明胶、火棉胶、碳蜡（聚乙二醇）、塑料、包埋组织而制作切片。

第4页，共121页，2023年，2月20日，星期一

从而观察不同的组织、细胞的形态结构，以及细胞内某些化学成份含量变化。

第5页，共121页，2023年，2月20日，星期一各种组织制片成切片标本，须要经过一个比较繁多的过程，现将制作切片的主要程序和制片的种类，介绍：第6页，共121页，2023年，2月20日，星期一组织取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、粘片、烤片、脱蜡、各级酒精、水洗、常规染色、脱水、透明、树胶封固。石蜡制片程序第7页，共121页，2023年，2月20日，星期一冰冻制片程序组织取材、冰冻切片、干燥粘片、固定、染色、脱水、透明、树胶封片。第8页，共121页，2023年，2月20日，星期一非切片（了解内容）1

整体封藏法－低等动物自身薄片如：鱼鳞片、蛙胚。2

涂片法－如：血液、精液、痰、胸腹水等3、磨片法－主要用有钙盐坚硬材料，牙齿、介壳、坚骨－手工磨4分离法a、压片法－动终板的制备b、撕碎法c压碎法第9页，共121页，2023年，2月20日，星期一二、取材（实验病理、临床病理、尸解诊断）第10页，共121页，2023年，2月20日，星期一1、实验病理取材动物的杀死：动物杀死方法很多，根据动物大小、种别、观察目的而定。

第11页，共121页，2023年，2月20日，星期一A：断头法：青蛙、小鼠等较小的动物B：空气栓塞法：兔猫（20－40ml）狗100mlC：麻醉法：乙醚、氯仿、4%巴比妥作V注射1ml/1kg，20%氨基甲酸乙酯（尿烷）作腹腔注射5ml/1kgD：击头法：大鼠

第12页，共121页，2023年，2月20日，星期一E：放血法：眼球放血（小鼠）股动脉放血，大动物：牛、猪原则：要尽避免使动物长时间陷入痛苦和濒于死亡状态，以免疫组织成份，结构发生变化，引起病理假象。

第13页，共121页，2023年，2月20日，星期一(1)取材时所用的刀要锐利，动作仔细，不可来回切割，勿使组织受挤压。

(2)注意组织，器官的切面：肾脏——纵切脑——（表面和脑沟成直角）垂直切肝脾——横纵均可第14页，共121页，2023年，2月20日，星期一

（3）保持组织清洁：血液，污物，粘液，食物用生理盐水洗净。（4）保持标本新鲜：动物死后立即固定。

(5)切取组织大小：0.5×0.5×0.2cm1×1×0.3cm1.5×1.5×0.5cm第15页，共121页，2023年，2月20日，星期一2.临床活检取材：注意事项：（1）

申请单位姓名与标本一致，防止混乱差错。（2）

检查标本是否符合要求—干涸坏变，固定液多少。（3）

取材时描写：大小，形态，色泽，硬度等。（4）

芝麻或针帽大小组织——染伊红？：镜纸包好（5）

常见肿瘤取材方法：略。第16页，共121页，2023年，2月20日，星期一3.尸体解剖组织（脏器）取材：略。第17页，共121页，2023年，2月20日，星期一三．固定（fixalion）固定：新鲜组织浸泡在适宜的化学试剂内借助于化学试剂的作用，使组织或细胞内蛋白质凝聚，沉淀，成为溶性并保持组织细胞原有的形态结构：称为固定。所使用的化学试剂配成的溶液，称为固定液。第18页，共121页，2023年，2月20日，星期一1.固定的目的(1)迅速防止组织细胞死后自溶和腐败（组织失氧→释放溶酶体酶→溶解组织）(2)固定或沉淀细胞内或组织液中蛋白，脂肪，糖原，无机盐和色素，使其不被溶解和消失。(3)使组织硬化，有一定弹性→抵抗以后的脱水，透明，使组织发生扭曲，变形。第19页，共121页，2023年，2月20日，星期一(4)某些传染性标本，能防止疫病的扩散。（如结核等）

(5)保存细胞内固有的物质：如包含体，线粒体，溶酶体等。

(6)可增强染色作用

(7)有利于各种细胞折光率。(8)固定后能产生良好的反差。第20页，共121页，2023年，2月20日，星期一2、固定的注意事项：(1)必须及时固定：夏天4h冬天24h就自溶。(2)固定液的用量：标本体积10－15倍。(3)固定时间：根据组织不同的种类、性质大小、固定液的种类而定。(4)固定用的容器要足够大，一般标本缸，广口瓶第21页，共121页，2023年，2月20日，星期一4、固定液的分类、配制和特性（1）分类A：凝固性－酒类、丙酮、氯化汞等非凝固性－甲醛、戌二醛等B：醛类－甲醛、戌二醛氧化剂类－重铬酸钾、高猛酸钾蛋白质变性－酒精、苦味酸C：单纯固定液-10%甲醛95%乙醇混合固定液-Boon’sConroy’s第22页，共121页，2023年，2月20日，星期一(2)常用固定液的配制及性质：A：10%甲醛-应用广泛(注：36-40%作为活检、尸解、一般形态学观察常用)优点：刺激性气味、对组织渗透力强、固定均匀、能保存脂类（神经、髓鞘、高尔基体、线粒体、糖类保存）价格便宜、配制简单、使用方便。缺点：固定久产生色素图附

第23页，共121页，2023年，2月20日，星期一10%中性甲醛(ph7.3-7.6)浓甲醛100ml自来水900ml加碳酸钙至饱和ph7.3-7.6(组织化学、免疫组化、保存抗原)10%中性缓冲甲醛(ph7.0)浓甲醛100ml蒸馏水900mlNaH2po4H2o4gNa2Hpo46.5第24页，共121页，2023年，2月20日，星期一B：酒精优点：固定又脱水：保存糖原，尿酸盐。（脱落细胞、培养细胞也常用）缺点：渗透力强-组织表层固缩第25页，共121页，2023年，2月20日，星期一C：丙酮：用于酸的固定(磷酸酶、胰酶、氧化酸)收缩剧烈，挥发、易燃、与水、醇、氯仿、醚混合第26页，共121页，2023年，2月20日，星期一混合固定液FAA：浓甲醛100ml95%酒精850ml冰醛醋58ml(收缩小、核染色质固定好)Bouln`s液：苦味酸饱和液75ml浓甲醛75ml冰醋酸5ml(对组织收缩小，固定均匀、保存细微结构、软化皮肤、肌健、结缔组织较好)第27页，共121页，2023年，2月20日，星期一3、固定的原理甲醛为例，甲醛与组织蛋白反应是多样而复杂的。PCONH+HCH+P-CONHOP-CON---C----P--CONHH亚甲基桥肽键甲醛蛋白质分子之进行交换，形成亚甲基桥，把蛋白质分子串联起来，使蛋白变性，破坏了蛋白质的立体结构，达到固定目的。第28页，共121页，2023年，2月20日，星期一四、洗涤

组织在固定后，一定要把渗透到里面的固定液(沉淀物或结晶)洗去，然后再进行下一步程序，洗涤必须彻底，否则留在组织中的固定液有可能妨碍染色。

第29页，共121页，2023年，2月20日，星期一洗涤的原则：1、固定液为乙醇或酒精混合液一般不要冲洗。2、固定液为水配制者，用水流水冲洗3、凡含有铬酸、重铬酸钾的固定液-洗涤4、含有苦味酸用乙醇配制的固定液-洗涤第30页，共121页，2023年，2月20日，星期一5、含有氯化汞固定液-冲洗-碘液去汞(zenker’s)-5%硫化硫酸钠去碘6、洗涤时间大动物组织8h以上、小动物组织2-8h洗涤方法：流水冲洗

第31页，共121页，2023年，2月20日，星期一五、脱水脱水就是利用某些化学试剂与水混合内的水份彻底脱除。要求：1、脱水剂能与水任何比例混合2、脱水剂也能与透明剂混合3、脱水要彻底否则无法进行透明4、低浓度-高浓度循序进行(酒精是依次递增、水是级差递减)常用的各级酒精梯度，达到脱水目的【60%70%80%90%100%I100%Ⅱ】

第32页，共121页，2023年，2月20日，星期一乙醇结构式CH3

·CH3·OH水的结构式H2O···H---O···H---O···H---O···H---O···H---HRHR乙醇的羟基（－OH）和水形成氢键，水分子与乙醇分子逐步缔合在一起。乙醇与水相混容的原理：第33页，共121页，2023年，2月20日，星期一常用的脱水剂1、

酒精：特点：能力强，使组织硬化，和二甲苯互溶。缺点：使组织收缩，变脆。2、

丙酮：比酒精脱水强，收缩厉害。临床病理用于快速脱水3、

二氧陆环：有毒性，既脱水又透明使组织收缩小不硬化4、

正丁醇：有毒性，既脱水又透明皮肤、骨叔丁醇发松子醇5、

脱水时间：根据组织大小、类别、种属、分别安排第34页，共121页，2023年，2月20日，星期一六、透明(clearing)组织经脱水后，不能直接浸入石蜡中，还要一个媒剂透明过程。透明剂既可与脱水剂相混合又能和石蜡相混合，起到桥梁作用，当组织中全部被透明剂点有时，光线可以透过呈现透明状态-称组织透明。

第35页，共121页，2023年，2月20日，星期一常用的透明剂1、

二甲苯：易挥发、易燃、透明力强、收缩、变脆(能与无水乙醇相混合，又能与石蜡相混合，作两组透明。)2、

氯仿：比二甲苯透明力强，不收缩、变脆。时间长24h，收缩小3、

苯：甲苯和二甲苯相同。易挥发、易燃、有毒性香柏油第36页，共121页，2023年，2月20日，星期一苯甲酸甲酯-收缩小、时间12∽24h，常用为火棉胶切片俄甘油苯酚第37页，共121页，2023年，2月20日，星期一透明时间：眼观组织呈透明状态小组织10min中组织20-40min大组织1-2h(如果组织不透明1、脱水未尽2、组织太厚3、时间不够)第38页，共121页，2023年，2月20日，星期一七、浸蜡（Infilftrition）

组织经过媒剂的透明作用后，移入熔化的石蜡内浸渍称为浸蜡。

第39页，共121页，2023年，2月20日，星期一１、石蜡：切片蜡___软蜡50℃以下，酶，保存抗原活性(纯度高密度好)硬蜡50℃以上-62∽64℃工业石蜡___质地较差，价格便宜纯度低，熔点不准确2、根据组织的不同选用：60∽62℃-----皮肤、骨组织、硬纤维瘤58℃以下----作免疫组化酶

第40页，共121页，2023年，2月20日，星期一3、恒温箱温度一般高于石蜡熔点4∽5℃4、浸蜡可分三级软蜡54---56℃硬蜡58---60℃硬蜡60—62℃第41页，共121页，2023年，2月20日，星期一5、脱水、透明、浸蜡时间表小动物组织（鼠）脱水、透明和浸蜡时间表程序项目时间分配75%乙醇时间长短均可85%乙醇2－5h95%乙醇2－5h95%乙醇2－5h无水乙醇20min无水乙醇30min无水乙醇30min二甲苯15min二甲苯30min二甲苯30min石蜡56－58℃30min石蜡56－58℃30min石蜡60－62℃1－2h第42页，共121页，2023年，2月20日，星期一5、脱水、透明、浸蜡时间表外检组织脱水、透明和浸蜡时间表程序项目时间分配85%乙醇时间长短均可95%乙醇1－2h95%乙醇1－2h95%乙醇1－2h无水乙醇1－2h无水乙醇1－2h无水乙醇1－2h二甲苯1h二甲苯1－2h二甲苯1－2h石蜡56－58℃1－2h石蜡56－58℃1－2h石蜡60－62℃2－4h第43页，共121页，2023年，2月20日，星期一5、脱水、透明、浸蜡时间表尸体解剖组织脱水、透明和浸蜡时间表程序项目时间分配75%乙醇时间长短均可85%乙醇5－10h95%乙醇5－10h95%乙醇5－10h无水乙醇2－5h无水乙醇2－5h无水乙醇2－5h二甲苯30min左右二甲苯1－2h二甲苯1－2h石蜡56－58℃1－2h石蜡56－58℃1－2h石蜡60－62℃2－4h第44页，共121页，2023年，2月20日，星期一5、脱水、透明、浸蜡时间表大动物组织脱水、透明和浸蜡时间表程序项目时间分配75%乙醇时间长短均可85%乙醇2－5h95%乙醇2－5h95%乙醇2－5h无水乙醇30min无水乙醇30min无水乙醇1－2h二甲苯30min二甲苯30min二甲苯1h左右石蜡56－58℃30min石蜡56－58℃1－2h石蜡60－62℃2－3h第45页，共121页，2023年，2月20日，星期一八、包埋（Emledding）

组织经过固定、脱水、透明、后再用石蜡铸成蜡块称包埋。1.埋石蜡的要求：(1)尽可能和浸蜡熔点一致(2)南方：58∽62℃北方：52∽58℃2.方法：

第46页，共121页，2023年，2月20日，星期一3.

(1)最大平面向下压平(2)管状束壁皮肤竖埋(3)包埋石蜡温度高于石蜡熔点5∽7℃(4)石蜡凝固后打开蜡框修整蜡块(5)贴好标签第47页，共121页，2023年，2月20日，星期一九、石蜡切片法

1.切片前的准备工作：(1)

切片机A：轮转切片机B：平推式切片机(2)

刀片(刀)一次性刀片或切片刀(磨刀)(3)

清洁的载玻片(4)甘蛋白油、白胶、毛笔、钙子

第48页，共121页，2023年，2月20日，星期一2.切片制作过程(实习)注意事项：a)

切片厚度：5um(镜下4∽6um)b)

刀片要锋利否则会出现卷片、起皱、不连结、破碎不完整。c)

刀与组织的角度4∽6℃d)

各个部件，螺丝应旋紧否则震动切片厚薄不均。第49页，共121页，2023年，2月20日，星期一一、染色的目的病理学的各种切片，都必须应用一种以上的染料通过不同的方法将切片的各种不同的组织结构给予显示出来，以利于镜下辨别其各种不同的形态，做出正确的诊断。十、染色第50页，共121页，2023年，2月20日，星期一二、染色的作用

1、化学作用：染液中的阴阳离子与组织中的阴阳离子相互作用所完成的染色。染液中有酸性和碱性染料之分，酸性染料有染色作用的部分是阴离子，而碱性染料有染色作用的部分则是阳离子。组织的各种细胞中细胞核为酸性，它可与苏木素液中的阳离子发生反应。细胞桨中的阳离子则与伊红液中的阴离子发生反应，完成染色。第51页，共121页，2023年，2月20日，星期一2、物理作用：染料通过浸透，分散浸入到组织的间隙中，因受分子的引力作用，染液中的色素粒子被吸附而完成染色过程。3、染色方法应用于常规病理切片的染色方法称为普通染色法或HE染色法，而用特别的染色法则称为特殊染色法。第52页，共121页，2023年，2月20日，星期一1、二甲苯

5~10min

2、二甲苯

5~10min

3、无水酒精

30se~1min

4、无水酒精

30se~1min

5、95%酒精

30se~1min

6、95%酒精

30se~1min

7、90%酒精

30se~1min

8、80%酒精

30se~1min

9、Harris苏木素

10se~15min

10、自来水洗

30sec~1min

11、1%盐酸酒精

30sec

12、流水冲洗10~15min或温水洗

5~10min

13、1%伊红染色

2~5min

14、80%乙醇洗去多余的染色

1min

15、90%酒精

30~1min

16、95%酒精

30~1min

17、95%酒精

30~1min

18、100%酒精

30~1min

19、100%酒精

30~1min

20、石碳酸二甲苯

1min

21、二甲苯

1min

22、二甲苯

1min

23、二甲苯

1min

24、中性树胶封固

HE染色法程序第53页，共121页，2023年，2月20日，星期一结果：细胞核：蓝色，软骨基质钙盐等深蓝色；细胞浆深浅不同的粉红色，嗜酸性颗粒鲜红色；胶原纤维呈粉红色，肌纤维呈鲜红色，弹力纤维呈亮红色，红血球为桔红色，蛋白基质为粉红色。第54页，共121页，2023年，2月20日，星期一染色时的注意事项（1）切片烘烤以切片附贴牢固为原则，否则容易掉片。（2）切片脱蜡一定要彻底，不然会导致染色深浅不一。（3）切片染苏木素前可令其无水化，这样可延长苏木素的寿命。因为每次染色前，切片水洗，然后进入染液虽然每次带入的水分很少，但随着次数的增加，所带入的水分足可以稀释染液影响染色的质量。第55页，共121页，2023年，2月20日，星期一（4）切片在苏木素的染色时间应充分宁过勿不足。对于初学者来说更应过染，否则分化会过度导致染色过浅。（5）切片分化时，要根椐不同的组织来确定分化时间，并不断积累经验。（6）伊红染色时间也要充分，经低浓度洒精时应仔细观察，必要时快速通过，以免过于褪色。第56页，共121页，2023年，2月20日，星期一（7）切片致无水酒精后，不要在控干无水酒精时让切片干涸，可以不经控干直接地进入碳酸二甲苯（也可以进入二甲苯酒精混合1：1）碳酸有较强的吸水性透明也好很适合南方地区。（8）切片从二甲苯中取出封固时，切不能让其干涸，因南方地区空气潮湿干涸的切片与空气接触，可吸收其水份。这样的切片很容易裉色。切片不干涸，表面被着二甲苯，由于它不溶于水起到与水隔绝的作用。第57页，共121页，2023年，2月20日，星期一（9）滴中性树胶封盖切片，胶不能太浓，太浓胶难以均匀铺开，且易产生气泡，又不能太稀过稀的胶由于二甲苯含量较多，当切片干燥时，二甲苯挥发掉，胶封的切片收缩，即可导致一半切片没有被胶封固的结果。最合适的胶应是滴下成珠。第58页，共121页，2023年，2月20日，星期一（10）封固切片时，盛胶的瓶子及瓶盖四周不要留有余胶，否则瓶盖难以打开。因此每次用完后都必须将其擦干净。当打不开瓶盖时应放入烤箱中烘烤，即可打开。（11）标签附贴要认真，不要贴得歪歪斜斜，影响切片的外观.第59页，共121页，2023年，2月20日，星期一染液的配制(一）苏木素的配制1、苏木素的种类：A、明矾苏木素（Harris,Mayer,Ehrlich）B、铁苏木素（Wiegert,Heidnhain）C、钨苏木素（PTAH）D、铅苏木素（Soecia）第60页，共121页，2023年，2月20日，星期一（1）Harris苏木素的配制（Harris.l900）苏木素0.5g无水乙醇5ml钾明矾（硫酸铝钾）10g蒸馏水100ml氧化汞0.25g冰醋酸4ml第61页，共121页，2023年，2月20日，星期一预先把苏木素溶于无水酒精中配制时，取一三角瓶倒入蒸镏水，再加入钾明矾，于电炉上加热至90℃左右时，拔去电源加入酒精苏木素，再插上电源继续加热，持续3~5分钟，拔去电源，加入氧化汞，此时可产生大量的气泡，应防止其溢出瓶外。再继续通电加热，煮沸后持续3~5分钟，此时溶液表面看呈深紫黑色，即可撤离电源，用备好的冰凉水，将烧瓶迅速的插入水中，让染液迅速冷却，中止氧化放入暗处。于第二天过滤后再加入冰醋酸，即可使用，染色时间5－15分钟。第62页，共121页，2023年，2月20日，星期一（2）Mayer氏苏木素（Mayer,1903）苏木素0.1g蒸镏水100ml钾明矾5g柠檬酸0.1g水合醛5g碘酸钠20mg第63页，共121页，2023年，2月20日，星期一将蒸包馏水稍为加温，加入苏木素不停地搅拌直至溶解，再加入钾明矾，令其溶解后再加入碘酸钠过滤后即可使用，染色时间10－20分钟，如果先用天表蓝为媒染剂，染色时可在2－3分钟。第64页，共121页，2023年，2月20日，星期一配制苏木素的注意事项1、苏木素可以配成5%或10%，让其氧化产生苏木红，然后根椐每次配制溶液的量，再决定加入多少。2、在配制苏木素时，三角烧瓶的选择也很重要，例如，配制500ml的溶液，应选用1500－2000ml的三角烧瓶，配制1000ml则可选3000ml的烧瓶，这样溶液在加入氧化汞时，才不会喷出瓶外。第65页，共121页，2023年，2月20日，星期一3、冰醋酸一定要在溶液过滤后加入如果过滤前加入，则在过滤时溶液很难通过滤纸，这主要是冰醋酸草可造成对滤纸的损害。第66页，共121页，2023年，2月20日，星期一(二）伊红的配制1、1%伊红洒精的配制伊红（水溶）5g70%-75%酒精500ml取少许蒸馏水来溶解伊红或称曙红，当完全溶解后，再加入酒精，然后再加入少许冰醋酸，此时溶液即可变为鲜红色。注意：冰醋酸一定要加进去如果没有加入冰醋酸，细胞浆将难以染得鲜艳。第67页，共121页，2023年，2月20日，星期一2.切片染完苏木素后的分化，应该如何控制和注意什么问题？（1）分化液中盐酸不能高于1%，否则会因分化过强而将已着色的颜色大部分脱水，造成染色过浅。（2）对各种组织应视情况而定，如淋巴结的切片，应分化较长时间等。（3）分化完后，应在显微镜下观察，如发现核中的物质不清楚，则应继续分化至清晰为止。（4）要认真操作，细心观察，不断总结。第68页，共121页，2023年，2月20日，星期一胃类癌（瘤细胞小而一致）第69页，共121页，2023年，2月20日，星期一瘤细胞的多形性第70页，共121页，2023年，2月20日，星期一病理性核分裂像第71页，共121页，2023年，2月20日，星期一平滑肌、平滑肌瘤和平滑肌肉瘤第72页，共121页，2023年，2月20日，星期一大肠腺体、腺瘤和腺癌第73页，共121页，2023年，2月20日，星期一正常鳞状上皮、乳头状瘤和鳞状细胞癌第74页，共121页，2023年，2月20日，星期一淋巴管转移癌第75页，共121页，2023年，2月20日，星期一肺淋巴管转移癌第76页，共121页，2023年，2月20日，星期一冰冻切片第77页，共121页，2023年，2月20日，星期一一、种类：1、低温恒冷箱切片法2、二氧化碳冰冻切片法3、甲醇循环制冷冰冻切片法4、半导体冰冻切片法5、氯乙烷冰冻切片法第78页，共121页，2023年，2月20日，星期一二、冰冻切片的目的1、在手术进行中。突然发现病人的病变与原诊断不相符合或者怀疑时需要病理给予确定。2、了解淋巴结内是否有转移的肿瘤细胞或者转移的程度，以利于确定以后的治疗措施。第79页，共121页，2023年，2月20日，星期一3、对于已确定恶性肿瘤的病人则需要了解其手术范围是否足够，上下切缘是否有残存的肿瘤细胞。4、在剖腹探查所发现的肿块。5、显示组织中的脂肪类物质。6、某些酶的显示如ATP酶琥珀酸脱氢酶等。7、神经病理学中的某些染色法。8、对某些物质所进行的免疫荧光的研究。第80页，共121页，2023年，2月20日，星期一三、冰冻切片的操作（1）本室现有Shandon-AS620E型冷冻切片机的主要性能。左边的切片台可达到-60左右，冷冻箱内在0～-30间可任意调节，箱面上有电子控制板，装有急速冷冻，即放上标本启动该键机器马上进行冷冻工作并持续10分钟；有冷冻台温度显示冷冻箱内温度显示；有即时除霜内温度显示；第81页，共121页，2023年，2月20日，星期一有即时除霜键，启动该键机器可持续工作15分钟，将工作间顶部后面的制冷栅上的霜除掉；有照明键，启动该键可照明工作间；有消毒键当进行一星期的工作后，启动该键可对工作间进行消毒；有工作间面的密锁键启动键可将工作间锁住，除此之外该机的左边有四个按键两个为快速自动进退、两个为微小进退、另有一个手动旋钮，调节修块时的进退。第82页，共121页，2023年，2月20日，星期一（2）切片取末经固定的组织不能太大太厚，厚者冰冻费时，大者难以切完整。最好24×24×4mm。（3）取出组织支承器，放平摆好组织周边滴上包埋剂，速放入冷冻台上冰冻，小组织应先取一组织支承器滴上包埋剂让其冻成一个小台再放上细小组织，滴上包埋剂。（4）将冷冻好的组织块夹紧于切片机上修平切面。第83页，共121页，2023年，2月20日，星期一（5）调好厚度，根椐不同的组织而定，一般在5-10um.（6）调好防卷板，制作冰冻切片的调节，关建在于防卷板的调节，这就要求要细心，准确，将其调校，调校至适当的位置，此时切片。冰冻切片在第一时间顺利地在刀与防卷板之间通过，平整地躺在持刀器的铁板上。这时便可掀起防卷板，取一载片，将其附贴上即可。第84页，共121页，2023年，2月20日，星期一（7）用于附贴切片的载片，不能存放入冷冻的地方，于室温存放即可。因为当附贴切片时，从室温中取出的温差，当温度较高的载片附贴上温度低的切片时，由于两种物质温度的差别，当它们碰撞在一起时，分子间的彼此转移而产生了一种吸附力。使切片与载片牢固地附贴在一起。如果用冷藏的载片附贴切片，就没有这种现象发生。第85页，共121页，2023年，2月20日，星期一（8）应视不同的组织选择不同冰冻度。冷冻箱中冷冻度的高低，主要根椐不同的组织而定，不能一概而论，例如：切未经固定的脑组织，肝脏组织和淋巴结组织等，冷冻箱的温度可调在-10℃～-15℃左右。切甲状腺，脾、肾、肌肉等组织,则应调在-15℃～-20℃左右。切带有脂肪的组织如乳腺组织，应调在-25℃左右，如为大量的脂肪组织时，应调至-30℃。第86页，共121页，2023年，2月20日，星期一四、冰冻切片时的注意事项1、防卷板和切片及持刀架上的地方应保持干净经常用毛笔挑除切片残余及用柔软的纸张擦。因为包埋剂常常贴在上述的地方。如果不把它们去除掉，就会影响切片。使切片不能完整切出。2、应用于冰冻切片的组织不能过大过厚，过大难以切出好片过厚冰冻费时，最好的取材应在24×24×2cm。第87页，共121页，2023年，2月20日，星期一3、冰冻组织前组织放于组织支承器上应视组织的走势来给予放置，然后四周加上包埋剂，保持周边的整齐，如出现凹凸不平的地方，可用刀