DB44T 447-2007桑蚕原种和一代杂交种疫病检验规程

DB44/T447—20072007-10-16发布广东省质量技术监督局发布I前言 Ⅱ 12规范性引用文件 13术语和定义 14检验项目 4.1原种微粒子病蛾率 5检验方法 5.2母蛾收集与抽样 5.6拆盒投蛾、磨蛾 5.7过滤、离心 5.8点样镜检 5.10蚕种合格判别 6检验规则 7签发检验报告 8不合格蚕种的淘汰与处理 8.1不合格蚕种淘汰 8.2淘汰蚕种的处理 A.1原种 A.2-代杂交种 附录B(规范性附录)母蛾微粒子病检验(疫)报告 B.1原种 附录C(资料性附录)母蛾微粒子病检验(疫)常用药物和主要药物的配制 C.1检验常用药物 C.2主要药物的配制 DB44/T447—2007本标准根据“GB19179-2003《桑蚕原种》""GB/T19178-2003《桑蚕原种检验规程》""NY《桑蚕一代杂交种》"和广东省桑蚕种生产、微粒子病母蛾检验实际情况而制定。本标准为推荐性标准。本标准与GB/T19178—2003《桑蚕原种检验规程》和NY/T327—1997《桑蚕-代杂交种检验规程》相比较，技术内容更加细化和具体，适用于广东地区多批次养蚕制种和平附型蚕种的家蚕微粒子病母蛾检验。技术内容的变化主要包括：——增加了修正系数1.05即病蛾率的合格指标严于GB/T19178—2003《桑蚕原种检验规程》。——增加了桑蚕一代杂交种(平附种)补产卵母蛾的检验方法。——明确了即时浸酸--代杂交种的检验方法。——明确了被检出的类似物集团及蛾盒的判别方法。——规定了不规范集团及蛾盒的判别方法。——规定了对不合格蚕种的处理方法。本标准的附录A母蛾微粒子病检验(疫)送检单和附录B母蛾微粒子病检验(疫)报告是规范性附录，附录C母蛾微粒子病检验(疫)常用药物和主要药物的配制是资料性附录。本标准由广东省蚕业产品检测中心提出。本标准由广东省质量技术监督局批准。本标准起草单位：广东省蚕业产品检测中心、广东省丝绸集团公司、华南农业大学动物科学学院蚕丝科学系、广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所、茂名市蚕业产品检测站、广东省丝绸公司廉江市蚕种场。本标准主要起草人：余爱群、李惠华、黄星光、钟苏苑、刘新国、邱国祥、廖富萍、杨琼、翁扶万、陈康武本标准由广东省蚕业产品检测中心负责解释。本标准规定了桑蚕原种和一代杂交种疫病——家蚕微粒子病母蛾检验方法。本标准适用于广东省桑蚕原种和一代杂交种——平附种生产过程的母蛾检验。下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB19179—2003桑蚕原种GB/T19178—2003桑蚕原种检验规程NY326—1997桑蚕一代杂交种NY/T327—1997桑蚕一代杂交种检验规程DB44/T253—2005桑蚕一代杂交种感染微粒子病母蛾所产卵制成的蚕种。在集团磨蛾检验中，包括不合格批和合格批中的不合格单日、合格单日样本检出有微粒子孢子的蚕种统称为微粒子病蚕种，又称有毒蚕种。母蛾集团检验中，带微粒子孢子的集团数占该制种批母蛾总数的百分比。个制种批的母蛾微粒子病检出率，称为批病蛾率。微粒子病蛾率超过合格指标的同一制种批称为不合格批，又称超毒批。同一制种批单日病蛾率超过单日合格指标称为不合格单日，又称超毒朝。2烘送蛾样送收样样烘蛾合格判别检验报告清洗点板点板的样本和用其不合格最种3DB44/T447—2007按蚕品种、制种批(户)及日期对蚕种纸和对应蛾盒做好编号，杀蛾前，每1大张(4张平附种)按梅花形五点分别各抽取5只母蛾，共25只，对号装入蛾盒内。每制种批(户)抽取母蛾盒数，以该批(户)制种数量而定，若制种数量不足30大张(120张平附种)时，应随机抽足30盒，同时记录蛾盒数及相应蚕种编号。若蚕种需补产卵时，每1大张补产卵蛾应全部对号装入蛾盒作为1个集团。将装有母蛾的蛾盒放入烘蛾箱内，温度保持60℃~70℃,每隔半小时上下调格一次，使其受热均匀，连续烘蛾4~6小时，以母蛾头胸干硬，腹部稍软为宜。烘蛾温度不得>70℃,以免导致微粒子孢子变形。杀蛾后原种7天、一代杂交种15天内将经烘蛾处理的母蛾送到检验单位。将送样蛾盒捆扎、装袋(箱)包装，运输过程中避免受潮、污染、损坏或丢失。送样前，应详细填写蚕种母蛾送检单一式二份，随母蛾交检验单位验收。送检单见附录A。样本与送检单填写内容要一致，记录异常情况和客户特殊要求。送检单二份，一份由检验单位存查，将验收后的母蛾样本集中存放，防止发霉腐烂及蚁、虫、鼠害和受潮、污染、损坏或丢失。按编号顺序将蛾盒拆开，用镊子或竹签将全部母蛾及残物放入磨蛾管内，做好标记。如发现有散落或混乱的蛾盒、空盒、装蛾不规范的蛾盒，登记其编号，并判为不合格蚕种。用过的镊子或竹签要用消毒液在磨蛾管内加入0.2%～0.4%的氢氧化钠溶液(或其它碱液)约70ml,,用8000r/min铰刀磨蛾机磨蛾15s5.7过滤、离心将研磨后的蛾液用滤网充分过滤到离心管内，并编号放好。将离心管按顺序放入离心机内，以3000r/min～4000r/min,离心2min～3min。取出离心管倾去上清液，保留3mL~4mL余液待检。用竹签搅匀离心管内余液沉淀物，每蘸1次沉淀物点1点于载玻片上，每样本点2块载玻片，每块载玻片点2点，加盖玻片后送检验员进行镜检。每1号样本由两位检验员负责对检，每点样本用600～800倍的显微镜仔细观察5个视野以上。如两位检验员均未发现微粒子孢子者，即判为无微粒子孢子集团；如两位检验员检验结果不一致时，应重新点样2点加以复查，如发现有微粒子孢子判为有微粒子孢子集团，如4用竹签搅匀离心管内余液沉淀物，每蘸1次沉淀物点1点于载玻片上，每样本点2点，每点样本用600～800倍的显微镜仔细观察5个视野以上。如未发现微粒子孢子判为无微粒子孢子蛾盒；2点中均发现按式(1)计算合格率。 按式(2)计算病蛾率。按式(3)计算合格率。批合格率≥89.38%,相当于批微粒子病蛾率<0.4%判为合格批；批合格率<89.38%,相当于批微粒子批合格率≥78%,相当于病蛾率<1%,判为合格批；批合格率<78%,相当于病蛾率≥1%,判为不合5同一批分日制种时，在批合格率≥78%,相当于病蛾率<1%前提下，而其中单日合格率>50%,相当于病蛾率<2.74%,判为合格单日；合格率≤50%,相当于病蛾率≥2.74%,判为不合格单日。 即浸种单日样本量≥30盒，合格率≥78%,相当于病蛾率<1%,判为合格单日；合格率<78%相当于病蛾率≥1%,判为不合格单日，允许整批检完后重新判别合格与否。 即浸种单日样本量<30盒并检出有微粒子孢子时，其蚕种应待整批母蛾检验结束后才判别合格与凡判为类似物集团或蛾盒，在母蛾检验统计时不计入病蛾率。检验时如发现有微粒子孢子(含类似物)的用具要彻底消毒后方可再用。检出有微粒子孢子的母蛾本要消毒后才能排放，其装样蛾盒要集中消毁防止病源扩散。消毒药物的选用和使用浓度参见附录C集团或蛾盒数取整数，百分数按数值修约规则保留两位小数。以制种批为单位，全部母蛾检验。以制种批(户)为单位，抽样检验。7签发检验报告检验单位在整批母蛾检验结束后，根据检验结果给送样单位出具检验(疫)报告。原种母蛾微粒子病检验(疫)报告见附录B中表B1。代杂交种母蛾微粒子病检验(疫)报告见附录B中表B2。8不合格蚕种的淘汰与处理8.1不合格蚕种淘汰依据检验单位出具的检验(疫)报告淘汰不合格蚕种。不合格批蚕种整批淘汰，合格批中的不合格单日蚕种整日淘汰，淘汰合格批中检出有微粒子孢子集团检验时判为类似物集团或蛾盒相对应的蚕种要淘汰。因散落、混乱、装蛾不规范、空盒等原因造成未检验集团或蛾盒相对应的蚕种要淘汰。68.2淘汰蚕种的处理蚕种生产单位将应淘汰的不合格蚕种集中监督消毁，防止微粒子病病源扩散。表1桑蚕一代杂交种合格率与平均微粒子病蛾率对照表单位：%合格率病蛾率合格率病蛾率合格率病蛾率合格率病蛾率合格率病蛾率0987654321根据0—C曲线中合格率(%)在100～61%范围内、可信限为99%。7DB44/T447—2007母蛾微粒子病检验(疫)送检单A.1原种原种母蛾微粒子病检验(疫)送检单见表A1。表A1桑蚕原种母蛾微粒子病检验(疫)送检单送检单位(盖章):年月日编号品种名称造别与批次制种日期日/月制种量，张计划用种日期月用种方式样本状态烘蛾温度℃备注冷藏浸酸种即时浸酸种烘下半干鲜蛾最高最低平均合计检验单位(盖章):送样员年月日验收员1本表一式二份随同样本送检验(疫)单位验收，其中一份经验收盖章后返回生产单位2即时浸酸种母蛾可逐日送检，冷藏浸酸种待制种批结束后一次送检。A.2一代杂交种-代杂交种母蛾微粒子病检验(疫)送检单见表A2。表A2桑蚕一代杂交种母蛾微粒子病检验(疫)送检单送检单位(盖章):年月日户批编号品种名称造别与批次制种日期日1月制种量，张送检蛾盒数起止蛾盒编号计划用种日期用种方式样本状态烘蛾温度℃备注估计净种即时浸酸种烘干半干鲜蛾最高最低平均合计检验单位(盖章):送样员验收员1本表一式二份随同样本送检验(疫)单位验收，其中一份经验收盖章后返回生产单位。2即时浸酸种母蛾可逐日送检，冷藏浸酸种待制种批结束后一次送检，8母蛾微粒子病检验(疫)报告原种母蛾微粒子病检验(疫)报告见表B1。表B1桑蚕原种母蛾微粒子病检验(疫)报告送样单位：样本编号品种名称造别与批次制种日期日1月制种量张起止蛾盒编号送样集团数盒有微粒子孢子集团数盒微粒子病蛾率，%检疫结果蚕种处理意见(淘汰蚕种编号)合计备注检验单位(盖章):制表复核日期注：病蛾率<0.4%判为合格。B.2一代杂交种代杂交种母蛾微粒子病检验(疫)报告见表B2。表B2桑蚕一代杂交种母蛾微粒子病检验(疫)报告户编号造别与批次制种日期日1月制种量张起止蛾盒编号送样集团数盒有微粒子孢子集团数盒微粒子病蛾率，%检疫结果蚕种处理意见(淘汰蚕种编号)合计备注检验单位(盖章):制表复核日期注：批病蛾率<1%,单日病蛾率<2.74%判为合格。9DB44/T447—2007(资料性附录)C.1检验常用药物检验和消毒常用药物见表C1。表C1蚕种母蛾检验(疫)常用药物用途与目的常用药物浓度溶解脂肪球选用碱性药物1、氢氧化钠2、氢氧化钾3、碳酸钾4、碳酸钠1、0.2～0.4%氢氧化钠溶液2、0.2～0.4%氢氧化钾溶液3、0.5%碳酸钾4、0.5%碳酸钠主要仪器设备和工作台面的消毒选用低腐蚀性、无刺激性气味的药物1、蚕消安2、克孢灵1、210mg/L蚕消安药液2、100mg/L克孢灵药液有微粒子孢子样本的消毒选用渗透力强、高效的药物1、次氯酸钠2、漂白粉3、漂白(粉)精4、消毒净1、0.4%有效氯次氯酸钠溶液2、1%有效氯漂白粉溶液3、1%有效氯漂白(粉)精溶液4、0.4%有效氯消毒净溶液检验用具消毒检验室地面消毒外环境消毒C.2主要药物的配制C.2.1氢氧化钠溶液的配制母蛾检验中用于溶解脂肪球的氢氧化钠溶液目的浓度是0.2～0.4%,依式(C1)计算加水倍数。Co——药物原浓度，%;Cr——目的浓度，%。………C.2.2次氯酸钠有效氯含量的测定和