实时荧光定量PCR具体实验步骤_第1页
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以下实验步骤仅供参考：1品①置分②每的TRIZOL试剂裂解体15到30育到下。全部TRIZOL的60%。无RNA的RNA后15到30℃育分于心的RNA沉每少（75%乙醇用2O洗RNA，4下心使RNA燥⑥解解RNA时，先加无酶水40μl用的RNA溶液保存于8021）/9

的TE量RNA用TE1:100）计和定RNA溶①下读值为1表示40µg品浓度µg/ml)计算公式为：A260×稀×µg/ml。具溶40µl取5ul1:100至495µl的TE浓度==或µg/µl取品为µl，剩余总量为：35µl×µg/µl=µg②溶液的A260/A280的为2）①/9

1g于水中，冷至ml的电18ml的液电泳缓冲入25的电泳②备取加于10µg/ml。加热70℃育分③泳5min，。下2h，少2–3cm。④28S和核的带提RNA的的2的RNA和5S体）18S和的由mRNA型组成。RNA现DNA污28S/9

带的上面，3品①1录μl2μl3μl4μl5酶μl6水5μl7版2μl8积10μl，6000rpm②酶先70干3分μl37水浴60/9

③即干3为cDNA4β-actin）量PCRβ-1011，反应前取3μl按27μl并充分混为10至109②1染料μl2物Fμl3物Rμl4μl/9

5Taq酶1μl6板μl72Oμl8积50μl，6000rpm1110μl2物Fμl3物μl4μl5Taq酶1μl6品μl72Oμl/9

8积50μl，6000rpm③：93℃931552共40个循5的DNA①的1ul22ul3物Ful4物Rul5液ul6Taq聚合酶1ul71ul8为/9

，6000rpm35个循94；1；℃分；72ºC伸②PCR与在2％③将产物进行10倍释将行释定为至1096量①有量11ul2物/9

3物45Taq聚合酶6品5ul78积ul，6000rpm②的反应于RealtimePCR仪行扩：2按931，℃11做个循环后727

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