大肠菌群计数检验

大肠菌群计数检验第1页，共14页，2023年，2月20日，星期一旧国家标准第2页，共14页，2023年，2月20日，星期一第一法大肠菌群MPN计数法第3页，共14页，2023年，2月20日，星期一第二法大肠菌群平板计数法第4页，共14页，2023年，2月20日，星期一第一天

第1、3、5、7小组：使用第一法（附带做第二法中，两个平板接种），以自来水为样品。第2、4、6小组：使用第二法（附带做第一法中，3个试管初发酵试验），以污水为样品。第5页，共14页，2023年，2月20日，星期一第一法：检样稀释与初发酵试验MPN：表示食品中大肠菌群数是以每100ML或克检样内大肠菌群最大可能数。一般采用9管法.一般样品25ML（克）+225ML生理盐水=1：10，从10-1取样1ML，接种到3管LST（月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤）中。从10-1取样1ML+9ML生理盐水=1：100，从10-2取样1ML，接种到3管LST中。从10-2取样1ML+9ML生理盐水=1：1000，从10-3取样1ML，接种到3管LST中。第6页，共14页，2023年，2月20日，星期一第二法：检样稀释与平板计数检样稀释：同上。平板计数：1、每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1mL稀释样品，另外一个平皿加1mL生理盐水作空白对照。2、及时将15—20mLVRBA（结晶紫中性红胆盐琼脂）倾注每个平皿中。3、待琼脂凝固后，再加3—4mLVRBA覆盖表层。翻转平板培养。第7页，共14页，2023年，2月20日，星期一第二天第一法复发酵试验

用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36℃±1℃培养48h±2h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。第8页，共14页，2023年，2月20日，星期一第二法平板菌落数的选择与证实试验平板菌落数的选择选取菌落数在15CFU～150CFU之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。证实试验从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管内，36℃±1℃培养24h～48h，观察产气情况。凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。第9页，共14页，2023年，2月20日，星期一（2）原理溴甲酚紫，中性时呈蓝紫色，酸性时呈黄色，如果颜色不变（呈蓝紫色），说明无产酸的大肠菌群；如果颜色变黄色，说明可能出现能分解乳糖产酸的大肠菌群。胆盐可以抑制其它细菌生长繁殖。分解乳糖产酸产气的大肠菌群，看小倒管中的气体。第10页，共14页，2023年，2月20日，星期一1产气2不产气杜氏发酵管产气情况第11页，共14页，2023年，2月20日，星期一第12页，共14页，2023年，2月20日，星期一第四天：大肠菌群计数报告第一法： 确证大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表（见附录），报告每g（mL）样品中大肠菌群的MPN值。第13页，共14页，2023年，2月20日，星期一第二法： 经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g（mL）样品中大肠菌群数。例：10-4样品稀释液1mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性