主稿空气微生物检测培训教材专家讲座

《公共场所集中空调通风系统卫生规范》

《公共场所集中空调通风系统卫生学评价规范》

卫生微生物学指标与检测方法

中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所王俊起主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第1页

范围

《公共场所集中空调通风系统卫生规范》

包括到卫生微生物指标条款包含：1、嗜肺军团菌（集中空调通风系统冷却水和冷凝水）2、细菌总数≦500cfu/m3

真菌总数≦500cfu/m3

β－溶血性链球菌等致病性微生物（集中空调通风系统送风）3、细菌总数≦100cfu/cm2

真菌总数≦100cfu/cm2致病微生物（集中空调通风系统风管内表面）集中空调通风系统送风嗜肺军团菌检测（——液体采样法）主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第2页目标控制因为空调通风系统造成生物致病因子经空气播散；预防危害人体健康，疾病传输公共卫生问题发生；规范现场与试验室操作，为监督执法、预警预报提供准确数据。主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第3页准备与现场采样1、采样设备、器材、试剂与培养基准备2、现场调研、现场统计3、采样人员无菌操作与个人防护4、采样点选择5、采样无菌操作6、气溶胶样品采集（六级采样器）7、水样品采集8、尘样品采集9、样品采集后现场整理10、样品采集过程中，人员普通安全防护主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第4页•

Inadequateventilation（通风不妥）52%•

Contaminationfrominsidebuilding（建筑物内部污染）16%•

Contaminationfromoutsidebuilding（建筑物外部污染）10%•

Microbialcontamination(微生物污染）

5%•

Contaminationfrombuildingfabric（纺织品污染）

4%•

Unknownsources（起源不明）13%主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第5页影响室内环境（1、2、3、4、5）

微生物污染原因主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第6页空调系统调查结果（引用）新风量大室内空气质量高新设备运行时空气质量优于老设备清洁设备运行时空气质量优于污染设备检测生物性污染物对空调系统污染与对室内空气质量影响含有卫生学意义。空调系统卫生微生物学检测不可能摆脱室内空气污染规律与概念。主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第7页认识1、室内污染起源占份额高于室外。2、上述原因与空调系统均相关；但并不是说空调设备本身造成了室内空气污染；其危险与潜在危害，是因为空调通风系统把人类活动（工作、生活、兴趣与环境等）造成空气质量状态，进行了输送、转移、传输。空调给于了微生物一定生存条件。3、空调系统生物性污染除嗜肺军团菌外还有许多组员。如：当前国外相关室内空气真菌、空调系统所致真菌污染方面研究日渐增多。4、环境对室内空气微生物存在极大影响（统计主要）。5、我们现行规范要求包含了我们当前碰到、可能碰到生物性致病因子。主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第8页指示生物与指标菌主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第9页微生物在空气中传输名词解释：气溶胶（aerosol）：是固态或液态微粒悬浮在气体介质中分散体系。其微粒为微生物时，称之为微生物气溶胶。液态粒子称雾；小于1µm固态粒子称烟；大于1µm粒子称尘。主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第10页名词解释气溶胶粒子大小：气溶胶粒子大小分布从0.001~100µm微生物气溶胶粒子大小，从0.002~30µm。主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第11页致病性生物因子凡是在室内空气环境存在致病性生物因子，都有可能经过空调系统播散，以致可能因为污染环境给人带来危险或潜在危害。室内空气环境存在致病性生物因子主要有以下几类室内空气环境存在致病性生物因子：

主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第12页空气带菌粒子危害部位1、1~5空气带菌粒子可直接侵入肺泡2、6~10空气带菌粒子易从容在小支气管3、10~30空气带菌粒子会沉积在支气管主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第13页微生物与粒子1、空气中与疾病相关带菌粒子直径普通为4~20µm。2、来自人体微生物主要附着在12~15µm尘粒上。3、许多真菌以单个孢子形式存在。主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第14页微生物1、细菌类：结核杆菌、非结核杆菌、肺炎双球菌、嗜肺军团杆菌等160余种。2、真菌类：球孢子菌、假丝酵母（念珠菌）、曲霉、毛霉、青霉等600余种。3、病毒类：流感、水痘、风疹、腺病毒等约几百种。4、其它：支原体、衣原体等。主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第15页相关原因空气中微生物存在和生存时间（存活力viability）与水环境、土壤环境情况紧密相关，微生物本身特征起主导作用。研究微生物生境是主要工作内容。主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第16页特点

依据试验研究，空气中微生物假如不能回到有利于其生活和繁殖环境中，迟早是要死亡。微生物几乎全部是附着在尘埃上，尘埃并不全部有微生物附着；灰尘量与菌数并不展现线性正相关。不一样采样方法所捕捉带菌粒子也不相同。主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第17页趋势强毒力、高传染性微生物气溶胶研究兔热杆菌：志愿者15个左右菌即可；军团菌：气溶胶中检出即对人有感染。

日本乙型脑炎病毒、裂谷热病毒、拉沙热病毒、出血热病毒、与畜牧业新城疫、流感等。真菌、真菌毒素。主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第18页方法学中问题

1、空调系统与室内空气质量相关性

2、不一样采样方法所取得结果有差异

3、样品处理方式、操作不一致影响结果一致性4、注意样品处理过程一致性

主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第19页指示生物选择肠道指示生物为例（N条）：肠道独有，代表性强数量多存活时间比致病菌稍长对消毒剂耐受性比致病菌稍高对人危害无或很小检测方便，程序简单主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第20页指示生物

大肠杆菌作为水污染是否卫生指示生物应用多年，行之有效，各界公认，基本符合指示生物多项要求。对于室内空气而言，指示生物则难以被选出。大肠杆菌作为粪便污染指示生物，与肠道传染病病原体不但同原，还存在很多共性，有代表性。空气则无法找到这么一个指示生物。所以对空气质量认同，我们选择了指示生物与致病生物监测两个路径。

主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第21页指示生物当前选择细菌总数、真菌总数、溶血性链球菌、嗜肺军团杆菌等等

主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第22页检测方法叙述

采样主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第23页样品保留与运输1、带培养基样品2、普通水、土样品3、分离军团菌样品4、培养基运输与保留（时间、温度、避光）（防污染、防增殖、防消亡、防破损、防乱号）主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第24页注意事项1、采样：气体：（以时间确定）仪器法。尘量：适时评定确定方法（擦拭、刮拭）。2、培养基检验有没有污染3、培养时间相关问题（菌数多少、湿度确保、温度控制）4、采样点选择5、关注采样环境主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第25页采样与检测方法1、对室内空气惯用采样方法有：自然沉降法（曝皿法）（本稿不采纳）空气微生物采样器法：推荐撞击式

6级空气微生物采样器2、液体过滤、冲击采样：采集室内空气军团菌时应用

3、管道：擦拭法、刮拭法主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第26页采样——人工擦（棉）拭法：布、棉花或其它材料，通惯用灭菌盐水润湿，经过擦拭采取通风管道表面微生物；然后在一样溶液洗脱微生物，并涂平板培养与计数菌落形成单位以供分析，涂板方法可用湿拭子直接涂布，也能够用洗脱液涂布。在无法进行机械采样风管中应用。刮拭法：尘量多、板结、粘稠时使用

主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第27页采样——机器人人工采样受到多方面影响，一致性不高，难完成规范要求任务；机器人采样同一性高；能满足规范要求工作内容；当前品种较少，通风管道没有标化：符合规范要求按产品说明书要求操作注意质控主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第28页采样与检测方法直接灰尘培养：从空调通风管道表面取得灰尘，直接悬浮于0.01%吐温80（PBS或生理盐水）溶液中，然后稀释并选择适宜稀释度，取1mL按倾注法操作，培养与计数菌落形成单位以供分析。

尘量大需要秤量。主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第29页

检测方法叙述

细菌总数主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第30页细菌总数细菌总数定义：仪器法采集室内空气，计数在营养琼脂培养基上经37℃48小时培养所形成菌落数，换算为每立方米室内空气中菌落总数，以cfu/m3（colonyformingunits/m3）每立方米室内空气菌落形成单位汇报。管道尘稀释倾注法：检测管道尘中细菌总数依Xcfu/cm2汇报。主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第31页细菌总数检测主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第32页细菌总数检测主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第33页细菌总数检测主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第34页细菌总数卫生学意义空气没有提供作为细菌和它种微生物生长所需要足够水分与营养物质，所以空气不是微生物产生与繁殖场所，检测出空气中存在微生物，主要起源于外环境（包含植物在内）与人、动物活动。某一个或几个致病性微生物存在内在原因，即是人、畜污染所致，致病微生物存在，对生活之中人们就可能组成了潜在危险，在条件适宜情况下造成疾病传输。普通说，室内空气质量在适宜微生物贮留与生长繁殖场所，与换气量不足、通风不良、人员较多时，就造成微生物数量增加。即使单纯微生物种类与数量多寡，不能说就一定引发人们疾病，却能够有不舒适感觉。

主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第35页室内空气标准制订情况

苏联：要求夏季清洁空气为细菌总数＜1500cfu/m3、污染空气为细菌总数＞2500cfu/m3；而冬季清洁空气细菌总数＜4500cfu/m3、污染空气为细菌总数＞7000cfu/m3。

主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第36页室内空气标准制订情况日本：日本采取自然沉降法统一用直径9cm平皿:将室内空气分为5级：清洁＜29、普通30－74、可接收界限75－149、轻污染150－299、重污染＞300。

主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第37页室内空气标准制订情况我国：医院：撞击法＜2500cfu/m3

沉降法＜30cfu/皿。公共场所撞击法<4000cfu/m3；沉降法<45cfu/皿。香港尤其行政区（制订“办公室及公众场所室内空气质素管理指导”，指明微生物污染物包含三大类，细菌、真菌、过滤性病毒。）空气中细菌标准是，一类＜500cfu/m3，二类＜1000cfu/m3。

主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第38页空调通风管道表面细菌浓度在空调通风管道表面细菌浓度，在3.2×105～1.5×106cfu/g之间。普通情况下，微生物浓度增加一些因子包含潮湿条件与空气回流。在空调通风管道表面细菌污染普通情况下低于旋转热交换器（107cfu/m2）、冷却管或加湿器（107cfu/m2）。有资料表明，灰尘表面浓度对可生存微生物浓度影响小，沉积于空调通风管道表面后再形成生物气溶胶菌存活时间普通较短，有待于更多试验与检测数据证实。主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第39页室内空气标准制订情况试验资料：人群聚集80min空气中细菌数，沉降法44cfu/皿，撞击法4300cfu/m3。在撞击法细菌总数4000cfu/m3，沉降法33cfu/皿，CO20.08％浓度时，有异臭感和不适感者为24.1％；在撞击法细菌总数6000cfu/m3，沉降法75cfu/皿，CO20.15％浓度时，有异臭感和不适感者出现率为55％。主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第40页采样方法与要求采样时必须在空调系统正常运转条件下，关闭门窗（参考时间30分钟），尽可能降低人、畜活动幅度与频率，统计采样位置、室内人员数量、温湿度与天气情况等。主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第41页采样方法与要求采样应用营养琼脂培养基，37±2℃培养48±4小时，观查并统计结果（37℃培养24h时应进行观查，无须统计结果）。

主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第42页采样方法与样品处理要求空调系统管道：无菌操作准确称取管道尘（统计数量），加入到含有0.01%Tween-800.03mol/LPBS中，作10倍梯级稀释，视灰尘含菌量多少选三个数量级稀释液，各取1mL稀释液直接加入平皿中，用营养琼脂培养基作混碟培养。37±2℃培养48±4小时，观查并统计结果（37℃培养24h时应进行观查，无须统计结果），其所得菌落数乘以稀释倍数，换算cfu/cm2细菌总数。

主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第43页采样方法与要求

空调送风：依监测目标和应用方法确定采样点，选择仪器法采样普通在送风口下方15～20cm距离50～100cm处；室内空气：采样点高度为1.2m。不一样采样方法所取得结果不一致，汇报结果时应注明采样方法。主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第44页培养基制备

成份：蛋白胨10g

氯化钠5g

肉膏5g

琼脂20g

蒸馏水1,000ml制法：将上述成份加热溶化于蒸馏水中，校正pH值为7.4~7.6。加入琼脂，121℃20min灭菌。用途：供空气细菌总数检测用。主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第45页含0.01%Tween-800.03mol/LPBS磷酸氢二钠2.83g磷酸二氢钾1.36g蒸馏水至990mLTween-80最终浓度0.01%方法：将磷酸氢二钠、磷酸二氢钾溶于少许蒸馏水中，溶解混匀加水至990mL，按百分比加入1%Tween-80液10mL，使最终浓度0.01%，121℃蒸汽灭菌20min。

主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第46页注意点1、采尘样条要浸泡在转运液体中。2、稀释与取样时充分洗脱，操作一致3、进口安德森采样器应用：注意平皿中琼脂厚度主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第47页检测方法叙述真菌总数：仪器法采集室内空气，计数在沙氏琼脂培养基上经28±2℃培养5天培养所形成菌落数，换算为每立方米室内空气中菌落总数，以cfu/m3（colonyformingunits/m3）每立方米室内空气菌落形成单位汇报。管道尘稀释倾注法：检测管道尘中真菌总数依Xcfu/cm2汇报。主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第48页空调系统与真菌病病态建筑综合症经典症状包含：眼刺激，鼻刺激和鼻充血，咽刺激和咳嗽、呼吸困难、嘶哑、皮肤刺激、头痛、呕吐、疲劳、精神疲惫和对味感知问题等。确定引发上述症状原因极难。性别、社会心理原因、从事职业等主观原因影响作用虽小，却难断然排除。主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第49页真菌总数标准情况我国当前卫生标准尚无对真菌总数详细要求，不过该指标受到国际社会日益关注。在一些居室建筑、办公场所中真菌总数每立方米可达数百至千，在有霉变气味室内真菌总数则更高。污染真菌绝大多数是在土壤中或其它基物上生长、繁殖，真菌孢子体积小、质量轻、数量大，易随气流运动而被传输，故有“气传真菌”之称。

主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第50页相关性空气中真菌含量有显著季节性，与温度、湿度、地理位置等原因亲密相关。巴黎6月时空气中真菌浓度n×104/m3，冬季则仅为100/m3；国内某坑道监测显示空气湿度增加真菌数也增加，为此我们对南北方以维持高湿度天气长短，分别给予了不一样要求；室内铺有地毯普通比没有铺地毯真菌数高；人活动、清扫卫生、换衣铺床等空气中真菌数增加。

主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第51页相关标准WHO要求：<150cfu/m3（采样方法：离心式采样器）；芬兰：<200cfu/m3（采样方法：Anderson采样器）；美国：<1,000cfu/m3（采样方法：未说明）主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第52页标准值依据与参考数值

我国当前卫生标准尚无对真菌总数详细要求，不过该指标受到国际社会日益关注。在一些居室建筑、办公场所中真菌总数每立方米可达数百至千，在有霉变气味室内真菌总数则更高。

主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第53页采样方法与要求

空调送风：依监测目标和应用方法确定采样点，选择仪器法采样普通在送风口下方15～20cm距离50～100cm处；室内空气采样点高度为1.2m。汇报结果时应注明采样方法。管道尘：机器人采样与刮拭法采样主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第54页采样方法与要求采样时必须在空调系统正常运转条件下，关闭门窗（参考时间30分钟），尽可能降低人、畜活动幅度与频率，统计采样位置、室内装修情况（织物包厢、地毯铺置、花草养殖）与人员数量、温湿度与天气情况等。主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第55页培养要求

应用沙氏琼脂培养基，28±2℃培养5～7d，需逐日观查并及时统计结果（如培养至5日时，霉菌或放线菌菌丝生长掩盖周围菌落或菌丝长至满皿，可停顿观查并统计结果，但在汇报时需注明）

主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第56页采样方法与要求空调系统管道尘：无菌操作准确称取管道尘，加入到含有0.01%Tween-80自来水中，作10倍梯级稀释，视灰尘含菌量多少选三个数量级稀释液，各取0.3mL稀释液直接涂沙氏琼脂培养基平皿，28±2℃培养，其所得菌落数乘以稀释倍数，换算成cfu/cm2真菌总数。

主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第57页培养基制备

1、沙氏（Sabourand’sagar）琼脂培养基：成份：蛋白胨10g

葡萄糖40g

琼脂20g

蒸馏水1,000ml制法：将蛋白胨、葡萄糖溶解于蒸馏水中，校正

pH值为5.5～6.0，加入琼脂，115℃

15min灭菌备用。用途：供空气真菌总数检测用。主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第58页说明此培养基是国际上培养真菌标准培养基，应用广泛。培养基pH值为5.5～6.0，除真菌外普通菌不易在此酸性培养基中生长，在配制时普通不需调整pH，其值即与此靠近。琼脂在酸性条件下屡次加热，降低或丧失琼脂凝固性，需注意。为抑制细菌与放线菌生长，可在1L沙氏琼脂培养基中加入40~50mg氯霉素和500mg放线菌酮，两种抗菌素均耐热，在高压蒸汽灭菌前加入。

主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第59页含0.01%Tween-80自来水稀释液

与自来水中加入Tween-80，使最终浓度为0.01%，121℃20min灭菌备用。

主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第60页检测方法叙述β－溶血性链球菌主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第61页β－溶血性链球菌（HS）

溶血性链球菌（HS）定义：经35～37℃，24～48小时培养，在血平皿平板上形成呈灰白色，表面突起直径0.5~0.7mm细小菌落，菌落透明或半透明，表面光滑有乳光；镜检为革蓝氏阳性无芽孢球菌，圆形或卵圆形，呈链状排列（视培养与操作条件影响链可短可长4~8个细胞至几十个细胞）；菌落周围有显著2～4mm界限分明、完全透明无色溶血环。符合上述特征菌量称为溶血性链球菌。以cfu/m3（colonyformingunits/m3）每立方米室内空气菌落形成单位汇报。

主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第62页β－溶血性链球菌（HS）

主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第63页溶血性链球菌卫生学意义溶血性链球菌与细菌总数相关性：溶血性链球菌与细菌总数并没有相关性，陶晓燕在空调环境中三家证券交易所调查汇报结果显示，在细菌总数并没有显示严重污染时，溶血性链球菌数量表明空气污染程度已很严重。

主稿空气微生物检测培训教材专家讲座第64页溶血性链球菌卫生学意义所以确认空调覆盖面积大小（换气量大小）与人员数量关系亲密，人员增加必定会使致病性污染几率增加。另外链球菌是一个大家族，包含6个群30个种，其组员能够在水、乳品、家禽、肉。蛋中曾经分离出各种链球菌，人与动物口腔、鼻腔、粪便中存在链球菌，且多为人体正常菌丛，但经过飞沫传输溶血性链球菌，在外