血液学检验医学宣教专家讲座

血液学检验血液学检验医学宣教专家讲座第1页本章主要内容：造血检验基本方法血象和骨髓像检验

骨髓检验步骤与方法

有核细胞增生程度、分级标准及粒红百分比细胞化学染色检验

惯用细胞化学染色及临床应用（POX、NAE、NAP、Fe、PAS）骨髓组织病理学检验血细胞超微结构检验造血检验临床应用其它自学

血液学检验医学宣教专家讲座第2页三、骨髓象检验

普通显微镜检验诊疗：主要是血液疾病

内容：

常规检验特殊检验血液学检验医学宣教专家讲座第3页三、骨髓象检验

㈠临床应用

1．适应症血细胞降低或增多。各种急慢性白血病。各种类型贫血。血液学检验医学宣教专家讲座第4页

不明原因骨痛、骨质破坏、肾功能异常、黄疸、紫癜；不明原因长久发烧，肝、脾、淋巴结肿大；出血；恶性血液病化疗疗效观察；血液学检验医学宣教专家讲座第5页禁忌症：血友病、晚期妊娠血液学检验医学宣教专家讲座第6页主要作用：

辅助诊疗（必定性、支持性、可疑性、排除性诊疗）

疗效观察（完全缓解、部分缓解、未缓解）血液学检验医学宣教专家讲座第7页（二）骨髓穿刺

穿刺部位髂后上棘：第五腰椎向上3cm处。髂前上棘：顶端后约1-2cm处。胸骨：胸骨中线，相当第二肋间水平胸骨体上端。小于3岁小儿选择胫骨内侧血液学检验医学宣教专家讲座第8页标本采集骨髓取材部位和方法部位：胸骨、棘突、髂骨等处方法：多用穿刺法吸收血液学检验医学宣教专家讲座第9页骨髓取材情况判断

⑴取材满意：

①抽吸骨髓时病人有特殊痛感；②骨髓液和涂片都有骨髓小粒和脂肪滴；③显微镜观察涂片

骨髓特有细胞如：

巨核细胞、浆细胞、组织嗜碱细胞、成骨细胞、破骨细胞、网状细胞、网状纤维等。血液学检验医学宣教专家讲座第10页④细胞比值骨髓中性粒细胞杆状核与分叶核＞外周血中性粒细胞杆状核与分叶核骨髓有核细胞＞外周血有核细胞血液学检验医学宣教专家讲座第11页

二、骨髓细胞学检验

内容与方法

一、骨髓涂片检验低倍镜检验油镜检验检验结果临床意义血涂片观察填写检验汇报单血液学检验医学宣教专家讲座第12页1、低倍镜检验：（1）观察骨髓涂片:

取材：骨髓小粒、脂肪小滴制片：厚薄，头、体、尾分布染色：细胞着色情况血液学检验医学宣教专家讲座第13页取材、制片、染色血液学检验医学宣教专家讲座第14页2.判断骨髓增生程度骨髓细胞增生分级(五级)增生极度活跃增生显著活跃增生活跃增生减低增生显著减低血液学检验医学宣教专家讲座第15页骨髓增生程度分级(高倍镜）极度减低1~5/HP增生减低5~20/HP增生活跃20~50/HP显著活跃50~100/HP极度活跃>100/HP血液学检验医学宣教专家讲座第16页（二）、油镜检验：

（1）有核细胞分类计数：

计数200-500个有核细胞，计算各系统各阶段细胞百分率。（巨核细胞单独计数）（2）计数粒红百分比（G∶E）（3）观察细胞形态有没有异常（4）观察有没有其它特殊细胞及寄生虫。血液学检验医学宣教专家讲座第17页二、血象检验：

1.低倍镜检验：（1）涂片、染色情况；（2）有没有大异常细胞；（3）寄生虫；

血液学检验医学宣教专家讲座第18页2.油镜检验：

（1）分类计数100个WBC

（注意形态及有没有异常细胞）；（2）注意成熟红细胞形态（如有幼稚红细胞应在计数100个WBC中记录幼稚红细胞数目及其阶段）；（3）粗略预计血小板数目或形态;

（4）有没有寄生虫。血液学检验医学宣教专家讲座第19页血片检验主要性

1.不一样疾病时，骨髓象相同而血象有区分

2.不一样疾病时，骨髓象有区分而血象相同（传淋和慢淋）

3.同一患者骨髓象改变不显著，血象有异常（传单）

4.同一患者骨髓象异常，血象无改变（MM）

5.骨髓象难识别，血象易识别血液学检验医学宣教专家讲座第20页细胞化学结果汇报细胞化学结果（专门讲述）血液学检验医学宣教专家讲座第21页填写骨髓汇报或打印骨髓汇报保留好骨髓与血液片血液学检验医学宣教专家讲座第22页诊疗意见综合骨髓象、血象和细胞化学所见意见：必定性诊疗-----

各种白血病、巨幼细胞性贫血、MM、骨髓转移癌、戈谢病、尼曼-匹克病等支持性诊疗-----

缺铁性贫血、再障、溶贫等可提议作对应检验

血液学检验医学宣教专家讲座第23页可疑性诊疗--

难治性贫血等排除性诊疗--ITP、类白血病形态学描写--

骨髓象有改变，但提不出诊疗性意见，提议动态观察对比意见---

几次骨穿结果对比诊疗意见血液学检验医学宣教专家讲座第24页骨髓象检验注意事项

正确认识细胞是骨髓象检验前提，检验者必须重复实践，积累经验，需经较长时间锻炼才能熟练掌握。不要依据一两个特点就做出必定或否定判断。宁可看得仔细而少看，不可贪多而马虎血液学检验医学宣教专家讲座第25页

正常骨髓象汇报：

1)增生活跃

2)粒红比值正常（G∶E2～4：1）

3)粒系增生良好：

a.占有核细胞40～60%；

b.各阶段细胞百分比适当；

c.细胞形态无显著异常。血液学检验医学宣教专家讲座第26页粒细胞各阶段百分比：

原粒<2%，早幼粒<5%，中性中幼粒约8%，嗜酸中幼粒约<1%；中性晚幼粒约10%，嗜酸晚幼粒<2%

杆状核约20%，嗜酸杆状核<3%，中性分叶核约12%，嗜酸分叶核<5%，嗜碱性中幼粒、晚幼粒细胞罕见，

杆状核、分叶核<1%血液学检验医学宣教专家讲座第27页

4)

红系增生良好：

a.占有核细胞20-25%左右

b.各阶段百分比适当；

原红细胞<1%，

早幼红细胞<5%，以中、晚幼红细胞为主，各占10%；

c．形态无显著异常或红细胞形态大致正常。血液学检验医学宣教专家讲座第28页

5)淋巴细胞系统占20-25%；

（主要是成熟细胞）

6）单核细胞系统<4%

（主要是成熟细胞）

7）浆细胞系统<2%

（主要是成熟细胞）血液学检验医学宣教专家讲座第29页

7)巨核细胞

a.数量/全片：7-35个；

(1.5cm×3.0cm)

b.各阶段情况正常；原巨核细胞不见或偶见，

幼巨核细胞0-5%，

颗粒巨核细胞10-27%，

产血小板巨核细胞44-60%，

裸核

8-30%，

血小板易见、成堆状存在，形态正常。

血液学检验医学宣教专家讲座第30页

8)其它细胞:

组织细胞、内皮细胞、肥大细胞、网状细胞及组织嗜碱细胞等欧间，未见异常。

9)无特殊细胞及寄生虫。血液学检验医学宣教专家讲座第31页四、骨髓象分析

有核细胞增生程度

极度活跃：反应骨髓造血功效亢进（白血病）显著活跃：反应骨髓造血功效旺盛（贫血）

增生活跃：反应骨髓造血功效基本正常

（正常骨髓象）增生低下：反应骨髓造血功效减低（AA）增生重度低下：反应骨髓造血功效衰竭（重型AA）。血液学检验医学宣教专家讲座第32页血细胞数量改变

1、粒/红比值⑴粒/红比值增加：

>5：1，CML，感染⑵粒/红比值正常：

2-4：1，两系成百分比增加或降低⑶粒/红比值降低：

<2：1，粒系降低,红系增加，增生贫血血液学检验医学宣教专家讲座第33页

粒细胞数量改变

1）粒系细胞增多原粒增多：M1、M2a、M4、CML（急变）早幼粒增多：M3，粒细胞缺乏，感染中幼粒增多：M2b，，CML，类白晚幼粒，杆状核为主：CML、感染等。血液学检验医学宣教专家讲座第34页

嗜酸粒细胞增多：

变态反应，寄生虫，嗜酸粒细胞白血病，CML；

嗜碱粒细胞增多：嗜碱粒细胞白血病，CML等

粒细胞降低粒细胞缺乏症、AA、急性造血停滞等血液学检验医学宣教专家讲座第35页

红系细胞数量改变

红系细胞增多

原红及早幼红增多：红血病，M6

中红及晚幼红增多：增生性贫血（溶贫，缺铁贫等）巨幼红/巨幼样变增多：巨幼贫、红白血病、MDS等铁粒幼红细胞增多:

铁粒幼红细胞贫血、MDS血液学检验医学宣教专家讲座第36页巨核细胞数量改变

巨核细胞增多增殖性疾病、M7、ITP、脾亢

巨核细胞降低

AA、AML血液学检验医学宣教专家讲座第37页淋巴系细胞数量改变

原幼淋增多：

ALL、慢粒急变、淋巴瘤白血病等；

成熟淋巴细胞增多：

CLL、淋巴瘤白血病、再障、淋巴细胞性类白血病、传淋、传单等

血液学检验医学宣教专家讲座第38页单核细胞改变

原、幼单核细胞为主：急单，慢单急变、粒-单白血病等

成熟单核细胞为主：慢单、慢性粒--单细胞白血病、CML

血液学检验医学宣教专家讲座第39页其它细胞改变

浆细胞增多：恶性增多：浆白，MM等良性增多：AA，感染等

组织细胞增多：恶性增多：恶组，MM

良性增多：感染性疾病血液学检验医学宣教专家讲座第40页（三）、血细胞形态改变

1.胞体异常大小异常：巨变，幼红，小原粒形态异常：不规则，多形性，伪足状突起成熟红细胞椭圆形，口形，球形，泪滴形，靶形。血液学检验医学宣教专家讲座第41页成熟红细胞形态异常血液学检验医学宣教专家讲座第42页2.胞核异常

数目：双核和多核形态异常：不规则形，凹陷，切迹，折叠，扭曲。核染色质核仁异常异常核分裂血液学检验医学宣教专家讲座第43页3.胞质量异常：增多或降低内容物异常：Auer，中毒性颗粒，空泡改变着色异常：多嗜性红细胞颗粒异常：增多或降低内外质异常：发育不平衡血液学检验医学宣教专家讲座第44页本节小结骨髓细胞形态学特征；骨髓细胞学检验步骤与方法；骨髓细胞增生程度、粒红比值；正常骨髓特征；血液学检验医学宣教专家讲座第45页第二节、血细胞细胞化学染色定义：血细胞化学染色是以形态学为基础，依据化学反应原理,将骨髓片染色,观察单个细胞内在生化特征，了解它们代谢活动，生理功效和病理改变.判别各种类型血液细胞血液学检验医学宣教专家讲座第46页（一）过氧化物酶染色

(Peroxidase,POX)）

[原理]

H2O2细胞内

POX[O]↑

联苯胺[O]联苯胺蓝+

亚硝基氰化钠暗蓝色颗粒(定位于胞浆内)

[结果]

粒系：强阳性单核系：弱阳性淋巴系：阴性

[临床意义]

判别急粒和急淋血液学检验医学宣教专家讲座第47页（二）苏丹黑B染色

(Sudanblack,SB)

[原理]

苏丹黑B（脂溶性染料）细胞质内含脂结构

棕黑色或深黑色

[结果]

粒细胞系统：阳性（黑色粗大）单核细胞系统：阳性（黑色细小）其它细胞：阴性血液学检验医学宣教专家讲座第48页[临床意义]

大致同POX;可用陈旧骨髓片血液学检验医学宣教专家讲座第49页（三）中性粒细胞碱性磷酸酶染色

（neutrophilalkalinephosphataseNAP）

（偶氮偶联法）

[原理]

磷酸萘酚钠NAP萘酚+重氮盐偶联

PH9.6

（亮红色从容于胞浆中）

[结果]NAP主要存在于成熟中性粒细胞，其它血细胞均呈阴性反应。血液学检验医学宣教专家讲座第50页中性粒细胞碱性磷酸酶染色

（neutrophilalkalinephosphataseNAP）

（钙钴法）

[原理]β-甘油磷酸钠NAP甘油+磷酸钠

NaHPO4+Ca（NO3)2+（NH4）

SCO↓

棕黑色（从容于胞浆中

[结果]NAP主要存在于成熟中性粒细胞，其它血细胞均呈阴性反应。血液学检验医学宣教专家讲座第51页1、胞浆中出现灰色到棕黑色沉淀者为阳性。2、反应强度分为五级：

-++++++++++

淡红淡灰灰黑浅棕黑深棕黑色3、百分率：计数100个成熟中性粒细胞，计算阳性率。4、积分法：计数100个成熟粒细胞，按反应强度作出分级，将其百分率乘以级数，然后相加。血液学检验医学宣教专家讲座第52页血液学检验医学宣教专家讲座第53页血液学检验医学宣教专家讲座第54页类白血病反应慢粒白血病反应血液学检验医学宣教专家讲座第55页[参考值]

正常：百分率10-40%，

积分40-80分[临床意义]1.区分CML

、类白血病反应↓积分为0;↑积分>200分

2.急粒积分↓;急淋积分↑;急单N或↓

3.AA时↑PNH↓4.化脓性感染↑病毒性感染时↓血液学检验医学宣教专家讲座第56页慢性粒细胞性白血病

Chronicmyeloidleukemia血液学检验医学宣教专家讲座第57页慢粒阴性血液学检验医学宣教专家讲座第58页（四）、酸性磷酸酶

（acidphoshataseACP)原理：硫化铅和偶带偶联法结果：胞质内出现棕黑色颗粒者为阳性（硫化铅）

胞质内出现亮红色颗粒者为阳性（偶氮偶联法）

血液学检验医学宣教专家讲座第59页临床意义

判别多毛细胞白血病，不被L-酒石酸所抑制血液学检验医学宣教专家讲座第60页判别T细胞白血病与B细胞白血病阳性阴性判别Gaucher病与Nienann-Pick病阳性阴性血液学检验医学宣教专家讲座第61页（五）、氯醋酸AS-D萘酯酶染色

naphytholAS-Dchloroacetateesterase,AS-DNCE原理：

氯醋酸AS-D萘酚AS-DNCEAS-D萘酚

H2O不溶性红色沉淀+坚牢酱紫血液学检验医学宣教专家讲座第62页结果血液学检验医学宣教专家讲座第63页临床评价

急性白血病判别：1.急性粒白血病M31+～2+2+～3+2.急性单核细胞白血病原、幼单核细胞---阴性3.急性淋巴细胞白血病原、幼淋细胞----阴性

血液学检验医学宣教专家讲座第64页（六）α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)

(α-naphythyolacetateesterase）α-醋酸萘酚α

–NAEα-萘酚+重氮盐（坚牢蓝B）

棕黑或灰黑色（胞桨中）血液学检验医学宣教专家讲座第65页临床评价判别白血病类型；同时必须做NaF抑制试验急性粒细胞白血病

---

原粒细胞弱阳性，不被NaF抑制；急性单核细胞白血病---

原单核细胞阳性，被NaF抑制；血液学检验医学宣教专家讲座第66页结果判断阳性：胞桨中出现棕黑、灰黑色颗粒沉淀血液学检验医学宣教专家讲座第67页急性单核细胞白血病

acutemonocyticleukemia

血液学检验医学宣教专家讲座第68页非特异性酯酶+NaF血液学检验医学宣教专家讲座第69页（七）糖原染色（过碘酸-雪夫反应）

(periodicacid–Schiff,PAS)【原理】

过碘酸细胞内糖原氧化双醛基+无色品红（雪夫碱）紫红色沉淀血液学检验医学宣教专家讲座第70页结果判断

阳性：胞质中红色颗粒或弥漫状物质血液学检验医学宣教专家讲座第71页淋巴细胞判断0无色1+一圈PAS颗粒2+两圈PAS颗粒3+三圈PAS颗粒4+红色大团块血液学检验医学宣教专家讲座第72页临床评价阳性或强阳性：红细胞系统疾病：红血病、红白血病、MDS淋巴细胞系统疾病：急淋（原淋、幼淋巴细胞）、慢淋、恶性淋巴瘤单核细胞系统疾病：急单（原单、幼单核细胞）血液学检验医学宣教专家讲座第73页（八）、铁染色原理：

4Fe3++3K4「Fe(CN)6」含铁物质亚铁氰化钾

Fe4「Fe(CN)6」3+12K+

亚铁氰化铁血液学检验医学宣教专家讲座第74页结果判断细胞外铁：存在于骨髓小粒巨噬细胞中蓝色颗粒细胞内铁：存在于有核红和成熟红细胞内铁；

血液学检验医学宣教专家讲座第75页细胞外铁血液学检验医学宣教专家讲座第76页第三节、骨髓活检观察结构和空间定位血液学检验医学宣教专家讲座第77页骨髓活检适应症骨髓穿刺失败全血细胞降低白血病疗效观察血液学检验医学宣教专家讲座第78页临床评价

血液病诊疗金标准：骨髓活检与穿刺涂片联合检测血液学检验医学宣教专家讲座第79页血细胞超微结构检验定义：在电子显微镜下结合各种超微结构技术，如酶细胞化学、放射自显影和X光衍射等，所观察到血细胞微细结构。血液学检验医学宣教专家讲座第80页第六节血细胞染色体技术在血