免疫上岗培训

免疫上岗培训免疫上岗培训第1页2一、免疫（Immune）定义免疫最初概念：免去瘟疫免疫传统概念：抗感染免疫当代免疫概念：是机体识别“本身”与“非己”抗原，对“非己”抗原产生排斥作用，对本身抗原形整天然耐受一个生理功效。

免疫基础概念免疫上岗培训第2页3

正常情况下，这种生理功效对机体有益，可产生抗感染、抗肿瘤和维持机体生理平衡及稳定保护作用。当免疫功效失调时，在一定条件下，也会对机体产生不利影响，如：超敏反应、本身免疫病和肿瘤等。免疫上岗培训第3页4二、免疫功能

免疫功效是免疫系统在识别和去除“非己”抗原过程中所产生各种生物学作用总称。主要包含：

1.免疫防御（Immunologicdefence)：

是机体针对外来病原体抗感染功效。正常时可防御病原体感染；防御功效过强可产生超敏反应，过弱则表现为免疫缺点。免疫上岗培训第4页52.免疫自稳(immunologichomeostasis)：

免疫系统维持机体内环境相对稳定生理机能。正常：可及时去除体内损伤、衰老、变性细胞和抗原－抗体复合物，而对本身成份保持免疫耐受；

异常：可发生生理功效紊乱、本身免疫病等。免疫上岗培训第5页63.免疫监视(immunologicsurveillance)：

是机体免疫系统识别、去除体内突变、畸变细胞以及被病毒感染细胞生理性保护作用。

丧失：机体突变细胞失控，可能造成肿瘤发生或出现病毒连续感染。免疫上岗培训第6页7免疫上岗培训第7页8三、免疫类型及其特征一、固有免疫：概念：出生时即有天然免疫，经遗传取得，非特异性，也称非特异性/先天性免疫。组成：屏障结构、吞噬细胞、一些体液因子。二、适应性免疫：概念：出生后接触特定抗原取得针对该物质免疫，也称取得性/特异性免疫。包含

体液免疫、细胞免疫。免疫上岗培训第8页9

抗原基础知识

一、抗原概念（antigen，Ag）

是能刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答、并能与对应应答产物（抗体和/或效应淋巴细胞）在体内或体外发生特异性结合物质。

免疫上岗培训第9页10二、抗原特征

1免疫原性：

抗原能刺激特异性免疫细胞，使之活化、增生、分化，最终产生抗体和效应淋巴细胞特征。2免疫反应性:

抗原可在体内、外与对应抗体/效应淋巴细胞发生特异性结合，产生免疫反应特征。

免疫上岗培训第10页11三、完全抗原、半抗原、载体1、完全抗原（completeantigen):现有免疫原性又有抗原性物质，如多数蛋白质分子。2、半抗原（Hapten):又称不完全抗原，单独存在时只含有免疫反应性而无免疫原性物质，如二硝基酚、青霉素。

免疫上岗培训第11页12

3、载体

与半抗原结合后使其含有免疫原性物质，即半抗原+载体=完全抗原。四、耐受原与变应原

1耐受原(tolerogen):引发机体产生免疫耐受抗原。

2变应原(allergen):引发机体产生变态反应抗原。

免疫上岗培训第12页13五、抗原特异性与交叉反应

免疫原性特异性：某种抗原只能刺激机体产生某种特定应答产物。如：伤寒杆菌免疫动物产生抗伤寒杆菌抗体

抗原性特异性：抗原只能与其对应抗体或致敏淋巴细胞结合。如：伤寒杆菌只能与抗伤寒杆菌抗体结合

免疫上岗培训第13页141

、表位与抗原决定簇

抗原决定簇（antigenicdeterminant,AD）:

又称表位（epitope），指抗原分子中决定抗原特异性特殊化学基团，是抗原分子与抗体及TCR/BCR受体特异结合部位，也是被免疫细胞识别标志及免疫反应含有特异性物质基础。

表位性质、数目和空间构象决定了抗原特异性。

免疫上岗培训第14页152、抗原抗体反应特异性

抗原特异性是相对，因为天然抗原分子表面可存在着各种表位，不一样抗原分子表面存在相同或相同表位，可引发交叉反应。3、抗原结合价：

能和对应抗体结合功效性表位数目半抗原→单价天然抗原→多价多价抗原可同时与各种/多个抗体结合免疫上岗培训第15页164、

共同抗原和交叉反应

（1）共同抗原：两种或两种以上抗原含有相同或相同表位。

表位1

表位2表位3表位1A抗原B抗原免疫上岗培训第16页17

（2）交叉反应：抗体与含有相同或相同表位抗原之间出现反应。

血清(Ab1、Ab2)+AgA特异性反应

Ab1+AgB交叉反应

意义与疾病发生相关：如急性肾小球肾炎用于疾病诊疗：如外斐反应表位1表位3表位1A抗原

B抗原表位2免疫上岗培训第17页181、病原微生物及其代谢产物（1）病原微生物如细菌、病毒、螺旋体，对机体有较强免疫原性。（2）细菌代谢产物

外毒素：类毒素:外毒素经0.3%-0.4%甲醛处理后,使其失去毒性而保留免疫原性物质。六、医学上主要抗原免疫上岗培训第18页192、动物免疫血清

用类毒素免疫动物后，动物血清中可含有大量抗毒素，即动物免疫血清。这种抗血清对人体而言既提供特异性抗体，又是异种蛋白。3、异嗜性抗原

又称Forssman抗原，指一类与种属无关，存在于人、动物、植物和微生物之间共同抗原。如：溶血性链球菌/人肾小球基底膜之间共同抗原。免疫上岗培训第19页204、同种异型抗原

同一个属不一样个体之间不一样抗原。如人类ABO、Rh血型抗原、HLA等。

5、本身抗原

隐蔽本身抗原与本身免疫系统隔绝组织受到外伤等原因而暴露，如：脑组织、精子外伤暴露。被修饰本身抗原本身组织在理化、生物等作用下结构发生改变，如：变性IgG。

免疫上岗培训第20页216、肿瘤抗原

肿瘤特异性抗原（TumorSpecificAntigen，TSA）肿瘤相关抗原（TumorAssociatedAntigen，TAA）7、超抗原(superantigen,SAg)

只需极低浓度即可激活5%-20%T细胞克隆，产生极强免疫应答抗原。免疫上岗培训第21页22

8、其它

有丝分裂原：植物血凝素、刀豆蛋白AT细胞细菌脂多糖、葡萄球菌A蛋白B细胞免疫上岗培训第22页23

七

佐剂

概念：一类与抗原一起或预先注入机体，能增强机体反抗原免疫应答或改变免疫应答类型非特异性免疫增强剂。如：羊毛脂，石蜡油，内毒素。常见为福氏佐剂。免疫上岗培训第23页24免疫球蛋白

一﹑概述Ab：是由抗原刺激B淋巴细胞转化为浆细胞后所产生，并能与对应抗原特异性结合、含有免疫功效球蛋白，也称为抗体（antibody,Ab）。Ig：把含有抗体活性或化学结构与抗体相同球蛋白统称为免疫球蛋白。免疫上岗培训第24页25Ig与Ab关系Ig与Ab区分：Ig是化学结构概念，Ab是生物学功效概念。全部Ab都是Ig，但Ig并非都有抗体活性。IgAb免疫上岗培训第25页26

二、Ig基础结构1、基础结构：由两条相同重链和两条相同轻链经过二硫键连接而成四肽链结构。免疫上岗培训第26页27抗体立体模型

免疫上岗培训第27页28Ig基础结构免疫上岗培训第28页292、免疫球蛋白功效区VH和VL：与抗原特异性结合部位；CL和CH1：一些同种异型Ig遗传标识；IgGCH2、IgMCH3：

补体C1q结合点激活补体经典路径；CH3/CH4

结合不一样细胞表面FcR不一样生物学效应。免疫上岗培训第29页301、IgG血清含量最多；半衰期最长；出生后3个月开始合成，3-5岁靠近成人水平；是唯一能经过胎盘Ig，发挥自然被动免疫功效；含有活化补体经典路径能力（IgG3>IgG1>IgG2）；含有调理作用、ADCC作用。是主要抗感染抗体，含有抗菌、中和病毒和中和毒素作用；三﹑五类Ig特征和功效免疫上岗培训第30页312、IgM为五聚体，分子量最大，称为巨球蛋白；个体发育中最先出现Ig，胚胎晚期即能产生，脐带血IgM增高提醒胎内感染（如风疹病毒、巨细胞病毒感染等）；抗原刺激机体时，是体内最先产生Ig；血清IgM升高说明有近期感染；有强大激活补体能力，在机体免疫防御早期中含有主要作用。免疫上岗培训第31页323、IgA有单体血清型和分泌型IgA；分泌型IgA是机体粘膜局部抗感染免疫主要原因（呼吸道和消化道）；初乳中sIgA可对婴幼儿发挥自然被动免疫作用。

4、IgE属亲细胞抗体，可与肥大细胞、嗜碱性粒细胞表面FcεR结合，介导I型超敏反应；是血清中含量最低Ig；主要由呼吸道、胃肠道粘膜固有层浆细胞产生。免疫上岗培训第32页335、IgD血清中含量低，其生物学作用尚不清楚；SmIgD可作为B细胞分化成熟标识，成熟B细胞同时表示SmIgM和SmIgD。免疫上岗培训第33页34

4﹑免疫球蛋白生物学活性(1)特异性结合抗原(2)激活补体(3)经过与细胞FcR结合发挥生物效应：(4)选择性传递

IgG经过胎盘；sIgA穿过粘膜功效(5)含有免疫原性免疫上岗培训第34页35免疫球蛋白功效免疫上岗培训第35页36抗原或抗体检测抗原-抗体反应包含沉淀反应、凝集反应、溶解反应、补体结合反应和中和反应等。抗原-抗体反应可用已知特异性抗体检测未知抗原；也可用已知抗原检测未知抗体。免疫荧光技术、免疫酶技术、同位素标识技术、发光免疫分析等免疫标识技术提升了抗原抗体反应敏感性。免疫上岗培训第36页37一﹑抗原-抗体反应特点抗原-抗体结合是特异性结合抗原抗体结合是分子表面非共价键结合抗原抗体反应可分为两个阶段

特异性结合阶段

可见反应阶段抗原和抗体结合是否展现可见反应现象，于二者分子百分比亲密相关免疫上岗培训第37页38抗原抗体百分比对反应现象影响免疫上岗培训第38页39免疫上岗培训第39页40二﹑抗原-抗体反应受各种原因影响1电解质：抗原-抗体反应通常应用0.85%氯化钠作为稀释液，以供给适应浓度电解质。2温度：普通常使用反应在37度水浴或孵育箱中进行。3.酸碱度：抗原-抗体反应适应酸碱度为PH6--8。4.抗原抗体百分比抗原-抗体反应受各种原因影响免疫上岗培训第40页41第二节抗原抗体检测方法凝集反应沉淀反应补体溶血反应和补体结合反应中和反应用标识抗体或抗原进行抗原抗体反应免疫上岗培训第41页42一.凝集反应

(Agglutination)细菌、红细胞等颗粒性抗原与对应抗体结合后形成凝集现象，称为凝聚反应。

(1)、直接凝集：将细菌或红细胞与对应抗体直接反应，出现细菌凝集或红细胞凝集现象。又分为玻片法和试管法。

(2)、间接凝集：将可溶性抗原包被在红细胞或乳胶颗粒表面，与对应抗体反应出现颗粒凝集现象。免疫上岗培训第42页43血球凝集免疫上岗培训第43页44免疫上岗培训第44页45二.沉淀反应（Precipitation)

血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等可溶性抗原与对应抗体结合后出现沉淀物，这一类反应称为沉淀反应。沉淀反应可在液体中进行，如絮状沉淀。大多沉淀反应是用半固体琼脂凝胶为介质，进行琼脂扩散故也称免疫扩散。

1.单向琼脂扩散试验

2.火箭电泳

3.双向琼脂扩散试验

4.对流免疫电泳免疫上岗培训第45页46免疫上岗培训第46页47免疫上岗培训第47页48免疫上岗培训第48页49免疫上岗培训第49页50三.免疫标识技术用荧光素、同位素或酶等示踪物质标识抗体（或抗原）进行抗原-抗体反应。标识物质与抗体（或抗原）化学连接未改变抗体（或抗原）免疫学特征，同时标识物性质依然存在，因而极大提升了反应灵敏度，能够对微量物质进行定量、定性或定位检测。免疫标识技术主要有四种基础类型：免疫荧光技术、免疫胶体金标识技术、免疫酶技术和同位素标识技术。免疫上岗培训第50页511.免疫荧光显微技术

用荧光素（常见有异硫氰酸荧光素），与抗体连接成荧光抗体，再与待测标本抗原反应，置荧光显微镜下观察，抗原抗体复合物散发出荧光，借此对标本中抗原作判定和定位。包含直接荧光法、间接荧光法和补体法。免疫上岗培训第51页52间接免疫荧光法示意图免疫上岗培训第52页53免疫上岗培训第53页54用荧光抗体示踪或检验对应抗原方法称荧光抗体法；用已知荧光抗原标识物示踪或检验对应抗体方法称荧光抗原法。因为荧光色素不但能与抗体球蛋白结合，用于检测或定位各种抗原，也能够与其它蛋白质结合，用于检测或定位抗体，不过在实际工作中荧光抗原技术极少应用，所以大家习惯称为荧光抗体技术，或称为免疫荧光技术。2.免疫荧光测定技术

免疫上岗培训第54页55（1）时间分辨荧光免疫技术

原理：TRFIA是用三价稀土离子及其螯合剂作为示踪物，如铕（Eu3+)来标识抗体、抗原，待反应体系发生后，用时间分辨荧光仪测定最终产物中荧光强度，依据荧光强度和相对荧光强度比值，判断反应体系中分析物浓度，到达定量分析目标。免疫上岗培训第55页56优点：技术集酶标识、同位素标识技术优点于一身，含有灵敏度高、特异性强、稳定性好、标识物制备简便、储存时间长、无放射性污染、检测重复性好、操作流程短、标准曲线范围宽和应用范围广泛等优点，免疫上岗培训第56页57注意：所用试剂和器材务必防尘；

Eu3+标识物溶解和稀释必须尽量准确，务必在加样1小时内配制。免疫上岗培训第57页58（2）电化学发光免疫分析技术原理：电化学发光免疫分析技术是继放射免疫分析法、酶免疫分析法、荧光免疫分析法、化学发光免疫分析法后最先进免疫分析方法。电化学发光（ECL）是一个在电极表面由电化学引发特异性化学发光反应，实际上包含了电化学和化学发光两个过程。直接以[Ru(bpy)3]2+标识抗体，反应时标识物直接发光。且[Ru(bpy)3]2+在电极表面反应过程能够周而复始进行，产生许多光子，使光信号得以增强。

免疫上岗培训第58页59优点：非放射性标识物防止了放射性核素污染；磁性微粒（2.8µm）为固相载体表面积大，吸附率高，近似均相免疫反应；链霉亲和素与生物素是最特异及牢靠结合；应用范围广；检测敏感度高；检测所需样本量少。免疫上岗培训第59页602.酶免疫测定

(EnzymeImmunoassay,EIA)

是用酶（常见有辣根过氧化物酶HRP和碱性磷酸酶AP)标识抗体进行抗原抗体反应。EIA将抗原抗体反应特异性与酶催化作用高效性相结合，经过酶作用于底物后显色来判定结果。常见方法有酶联免疫吸附试验和酶免疫组化法，前者测定可溶性抗原或抗体，后者测定组织或细胞表面抗原。免疫上岗培训第60页61(1).酶联免疫吸附试验(ELISA)

将已知抗原或抗体吸附在固相载体（聚苯乙烯微量反应板）表面，使抗原抗体反应在固相表面进行。用洗涤法将液相中游离成份洗除。主要有双抗体夹心法、间接法BAS-ELISA等。

(2)

ELISA方法有:a.双抗体/抗原夹心法测抗原/抗体:

包被在固相载体上抗体/抗原与加入待测抗原/抗体及酶标抗体/抗原三者在一定条件下进行温育反应，若待测样本中含有特异性抗原/抗体，则在孔内形成抗体/抗原-抗原/抗体-酶复合物,经过严格洗涤后,复合物与底物作用后将显色。免疫上岗培训第61页62b.间接法测抗体：

将抗原包被在固相载体上，样本中含有特异性抗体则结合成抗原－抗体复合物，再与加入酶标识抗抗体结合,形成抗原－抗体－酶标抗抗体复合物。酶催化底物显色。

C.竟争法测抗体：

包被抗原于固相载体上，检测时加入样本和酶标识抗体，如样本中含有特异性抗体将与酶标识抗体竟争与包被固相抗原结合形成抗原－抗体复合物，固相上无酶催化底物，而不显色。免疫上岗培训第62页63

包被抗体于固相载体上，检测时加入样本、中和抗原和酶标识抗体，如待测样本中含有特异性抗体将与固相抗体竟争中和抗原结合形成抗体－抗原－抗体复合物，固相上无酶催化底物，而不显色。d.

固相捕捉法测IgM抗体：将抗抗体（抗人µ链）包被于固相载体上，如样本中含有特异性抗体则结合成抗抗体－抗体复合物，加入抗原及酶标识抗体则深入形成抗抗体－抗体－抗原－酶标识抗体复合物。酶催化底物并显色。免疫上岗培训第63页64免疫上岗培训第64页65免疫上岗培训第65页66ELISA原理及分类免疫上岗培训第66页673.胶体金法胶体金法，又称金标法，是一个常见标识技术，是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体一个新型免疫标识技术。当前在医学检验中应用主要是免疫层析法和快速免疫金渗滤法，含有简单、快速、准确和无污染等优点。各类快速检测试纸均采取免疫层析法，大量以塑料为载体快速检测块均采取快速免疫金渗滤法免疫上岗培训第67页68

层析法免疫胶体金检测试剂结构示意图

免疫上岗培训第68页69C1—金标识鼠抗人HCG;T—金标识鼠抗人HCG+HCG+抗HCG;(测定区)C2---多出金标识鼠抗人HCG+羊抗小鼠HCG.(质控区)此图为双抗体夹心法，显色为阳性；竞争法相反。免疫上岗培训第69页70

肝炎标志物检测一.乙型肝炎病毒

乙型肝炎病毒（HBV）是含有复杂结构DNA病毒，关键内含有一双股DNA和DNA聚合酶，外面有一层含有表面抗原（HBsAg）外衣HBV抗原复杂，其外壳中有表面抗原，关键成份中有关键抗原和e抗原，感染后可引发机体免疫反应，产生对应抗体。HBV感染种属范围很窄，只局限于人和黑猩猩。

1.乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和表面抗体(抗-HBs)HBsAg存在于病毒颗粒外壳以及小球形颗粒和管状颗粒。于感染后2-12周，丙氨酸转氨酶(ALT)升高前，即可由血内测到，HBsAg有“a”、“b”、“y”、“r”、“w”等各种抗原决定簇，其中“a”是共同抗原决定簇，在我国主要是adr亚型。免疫上岗培训第70页71

乙肝病毒解剖模型（1）免疫上岗培训第71页72

乙肝病毒解剖模型（2）免疫上岗培训第72页73

抗-HBs对同型感染含有保护作用。近期感染者所产HBs属IgM，而长久存在血中为抗-HBsIgG。

前S1及前S2蛋白含有与HBsAg不一样抗原。完整HBV颗粒含有S蛋白及前S2蛋白，而缺点病毒颗粒则无前S1蛋白。血清中出现前S1、前S抗原是HBV活动性复制标志。

HBsAg阳性患者原发性肝癌发病概率为正常人200倍以上；

2.HBcAg主要存在于受染肝细胞核内，复制后被释至胞浆中，由胞浆中形成HBsAg包裹，装配成完整病毒颗粒后释放入血。血液中普通不能查到游离HBcAg。血中Dane颗粒经去垢剂处理后能够查到其关键个别HBcAg和DNA聚合酶。

免疫上岗培训第73页74

早期出现者主要是抗-HBcIgM，是近期感染主要标志；抗-HBcIgG出现较迟，但可长久存在。抗-HBc对HBV感染无保护作用。血清中抗-HBcIgM阳性表明体内有HBV复制，且有肝细胞损害；若抗-HbcIgG阳性且滴度高，伴以抗-HBs阳性，则为乙型肝炎恢复期；若抗-HBcIgG呈低滴度，抗-HBcIgM阴性，而抗-HBs阳性，则是既往感染标志。

3.HBeAg仅存在于HBsAg阳性者血液中，通常伴有肝内HBVDNA复制，血中存在较多Dane颗粒和HBVDNA聚合酶活性增高，所以，HBeAg阳性是病毒活动性复制主要指标，传染性高。急性肝炎患者若HBeAg连续阳性10周以上，则易于转为连续感。

免疫上岗培训第74页75HBV是经过接触、血液及血制品、母婴垂直传输等方式传输。在我国约有60％乙肝病毒携带者是经过母婴垂直传输。二.甲型肝炎病毒（HAV）

HAV属微小核糖核酸病毒(RNA)主要引发急性感染，经粪－口路径传输，有季节性，可引发暴发流行。三.丙型肝炎抗体(HCV)

测定丙型肝炎抗体是判定急、慢性丙型肝炎主要指标。丙型肝炎病毒（HCV）是一个含有脂质外壳RNA病毒HCV感染者血中HCV浓度极低，抗体反应弱而晚，血清抗-HCV在感染后平均18周阳转，至肝功效恢复正常时消退，而慢性患者抗-HCV可连续多年并含有传染性。

免疫上岗培训第75页76

在2个月左右潜伏期后，只有大约四分之一病人会出现食欲差、疲惫、黄疸等症状；而大个别患者却没有任何感觉。而且，感染后大约要经过二十年左右才会出现肝硬化。所以，有很多人根本不知道自己经感染。而丙肝可造成肝脏慢性炎症坏死和纤维化，个别患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌（HCC），对患者健康和生命危害极大

HCV主要经过输血和血制品来进行传输。

四.丁型肝炎病毒(HDV)

是一个缺点嗜肝单链RNA病毒，需要HBV辅助才能进行复制，所以HDV和HBV同时或重合感染。免疫上岗培训第76页77五.戊型肝炎病毒（HEV）

HEV对氯仿敏感，在4℃或—20℃下易被破坏，在硷性环境中较稳定。HEV存在于替伏末期及发病早期患者粪便中。有显著季节性，多散发于雨季后，粪口传输是主要传输路径。甲型和戊型肝炎病毒主要引发急性感染，经粪－口路径传输，有季节性，可引发暴发流行。乙、丙、丁型肝炎常表现为慢性经过，主要经血液传输，无季节性，多为散发，并可发展为肝硬化和肝细胞癌。免疫上岗培训第77页78类风湿性因子（RF）：是一个以变性IgG为靶抗原本身抗体，主要存在于类风湿性关节炎患者血清和关节液中，它是一个抗变性IgG抗体，可与IgGFc段结合。检测方法普通有胶乳凝集试验、双抗原夹心ELISA法、速率散射比浊法。胶乳凝集试验：将变性IgG包被于聚苯乙烯胶乳颗粒上，这种致敏胶乳在与待测血清中RF相遇时，即发生肉眼可见凝集。正常人1：20稀释血清为阴性，操作要求56℃30分钟灭活，（灭活C1q以阻止假阳性凝集）。

类风湿诊疗

免疫上岗培训第78页79临床意义：未经治疗类风湿性关节炎患者其阳性率为80%，且滴定度常在1：160以上。RF不是仅在RA患者中出现，在SLE、进行性全身性硬化症等本身免疫性疾病患者和个别老年人中RF阳性率可达28.9%--50%，因而RF对RA患者并不含有严格特异性，

抗链球菌溶血素“O”，简称抗“O”或ASO

溶血性链球菌产生一个代谢产物能溶解红细胞，所以这种产物被取名为“O”溶血素，人体感染了A组溶血性链球菌后，“O”溶血素在体内作为一个抗原物质存在。为了测定这种能中和链球菌溶血素“O”抗体含量，就称为抗链球菌溶血素“O”试验。

免疫上岗培训第79页80临床意义:溶血性链球菌感染、猩红热、丹毒、链球性咽炎、扁桃体炎。对风湿热、急性肾小球肾炎有间接诊疗价值、若屡次检测结果递增，并伴红细胞沉降率加紧可有利于诊疗。

免疫上岗培训第80页81免疫学检验室内质量控制

（ELISA）

质量管理基础要求

免疫检验要确保检验结果准确、可靠、及时、有效，并尽可能使各试验室间检验结果可比性，这是免疫检验质量确保基础目标。ELISA试验室内质控重点是对低值弱阳性标本检