基因工程框架复习

基因工程框架复习基因工程框架复习第1页考情分析命题重点：基因工程工具与操作程序

基因工程原理和应用考查频度：高考高频考点,5年19考

如年全国1卷和3卷考查方向：多以最新基因工程结果为载体，结合其它工程技术进行综合考查基因工程框架复习第2页基因工程复习目标一、基因工程操作工具和详细步骤（熟悉掌握）二、明确解题思绪基因工程框架复习第3页基因工程操作工具基因工程框架复习第4页以下关于限制性核酸内切酶叙述，错误是(

)A限制性核酸内切酶可从原核生物中提取B同一个限制酶切割不一样DNA分子产生末端能够进行碱基互补配对C限制酶能任意切割DNA分子，从而产生大量DNA片段D每一个限制性核酸内切酶只能识别特定核苷酸序列基因工程框架复习第5页限制性核酸内切酶1.起源：原核细胞2.简称限制酶（没有其它简称）3.是酶就含有酶特征（受温度、PH影响）4.能识别双链DNA分子某种特定核苷酸序列（不能识别RNA序列）5.作用部位：磷酸二酯键6.DNA切割结果：产生黏性末端或平末端7.相同限制酶切出末端一定相同，不同限制酶切出末端也可能相同基因工程框架复习第6页已知限制酶I识别序列和切点是—G↓GATCC—

限制酶Ⅱ识别序列和切点是—↓GATC—。

请问这两种酶切出黏性末端能否相连？基因工程框架复习第7页DNA连接酶作用部位：磷酸二酯键E.coliDNA连接酶只能连黏性末端T4DNA连接酶既能连黏性末端也能连平末端比较：限制酶ECOR1切出是黏性末端Sma1切出是平末端基因工程框架复习第8页运载体作为运载体必备条件1.在受体细胞中能复制并稳定保留（让目标基因能一起复制2.有一个至多个限制酶切割位点(供外源基因插入)3.含有标识基因(判别受体细胞中是否含有目标基因)---最常见载体质粒（大肠杆菌Ti质粒含T-DNA）λ噬菌体衍生物动植物病毒基因工程框架复习第9页基因工程基础操作程序1、目标基因获取2、基因表示载体构建3、将目标基因导入受体细胞4、目标基因检测与判定基因工程框架复习第10页步骤一获取目标基因1、人工合成2、从基因文库中获取3、利用PCR技术扩增(基因比较小，序列已知)基因文库基因组文库个别基因文库－－如：cDNA文库原理:双链DNA分子复制条件：模板、引物热稳定DNA聚合酶四种脱氧核苷酸能量基因工程框架复习第11页组成个别复制原点（复制起点）开启子（RNA聚合酶识别和结合部位）目标基因（位于开启子和终止子之间）终止子（终止转录）标识基因（如抗生素抗性基因或荧光基因。构建时最少有一个）第二步：基因表示载体构建(关键)基因工程框架复习第12页第三步：将目标基因导入受体细胞

将目标基因导入植物细胞农杆菌转化法、基因枪法，花粉管通道法将目标基因导入动物细胞显微注射法将目标基因导入微生物细胞感受态细胞法（Ca2+处理）------转化过程基因工程框架复习第13页步骤四目标基因检测和判定接种试验抗原－抗体杂交法分子杂交法DNA分子杂交法受体是否含有转基因特征个体水平目标基因是否翻译目标基因是否转录目标基因是否导入受体细胞分子水平方法检测对象基因工程框架复习第14页当转基因技术和其它技术综合考查时解题思绪：一.明确目标，要取得什么？是基因产品、转基因植物还是转基因动物找到目标基因和受体细胞二.细化过程基因工程框架复习第15页1.取得基因产品：取得含目标基因微生物细胞(普通)---培养微生物---取得产品2.取得转基因植物：将目标基因导入植物细胞---进行植物组织培养---取得转基因植物3.取得转基因动物：将目标基因导入动物受精卵（或经过核移植取得）---早期胚胎培养---胚胎移植---获取转基因动物基因工程框架复习第16页重度呼吸综合征是有一种新型冠状病毒（MERS-CoV）引发病毒性呼吸道疾病，科学家利用大肠杆菌大量生产病毒蛋白，以探究其作为MERS疫苗可能性，结合所学知识回答以下相关问题：（1）研究早期，科学家首先分离出病毒RNA分子，在___________酶作用下，以_____________为原料，取得DNA分子。（2）在构建表示载体过程所使用限制酶普通来自_______生物体内，构建好表示载体包含________、_________、开启子和终止子。其中开启子是________酶结合位点（3）基因工程取得细胞产品时候经常采取大肠杆