放线菌发酵制药

放线菌发酵制药放线菌发酵制药第1页Edityourcompanyslogan子学习情境3.3

链霉素发酵放线菌发酵制药第2页任务一发酵准备放线菌发酵制药第3页一、发酵罐清洗放线菌发酵制药第4页发酵罐清洗从接种孔加入70L左右清水，开启搅拌，转速为100r/min左右，用蒸汽加热清水至121℃左右，搅拌30min左右，以此清洗发酵罐。清洗完成，利用空气压力排出洗水，并用空气吹干发酵罐。放线菌发酵制药第5页二、发酵设备检验检验项目：管路连接阀门密闭性仪表校正放线菌发酵制药第6页三、发酵设备灭菌放线菌发酵制药第7页发酵罐灭菌（空消）灭菌压力：0.147—0.18MPa，45—60min。注意事项：空消后，先用无菌空气保压，灭菌培养基、相关物料输入罐内后，打开冷却系统进行冷却。放线菌发酵制药第8页从属设备灭菌分空气过滤器：发酵罐灭菌之前灭菌，灭菌后空气吹干备用。补料系统：补料管路：与补料罐同时灭菌，保温时间1小时。消沫剂系统：蒸汽压力0.15MPa，保温30分钟。消沫剂管路：与补料罐同时灭菌，保温时间1小时。移种管路：蒸汽压力0.30—0.45MPa，保温时间1小时。放线菌发酵制药第9页Edityourcompanyslogan任务二种子制备放线菌发酵制药第10页一、培养基配制1、孢子培养基葡萄糖蛋白胨豌豆浸汁放线菌发酵制药第11页2、种子培养基黄豆饼粉葡萄糖

(NH4)2SO4CaCO3放线菌发酵制药第12页3、发酵培养基黄豆饼粉葡萄糖玉米浆CaCO3

磷酸盐(NH4)2SO4

放线菌发酵制药第13页二、培养基灭菌放线菌发酵制药第14页经典分批发酵工艺流程图放线菌发酵制药第15页分批灭菌注意事项各路蒸汽进口要通畅，预防短路逆流；罐内液体翻动要猛烈，以使罐内物料到达均一灭菌温度。排气量不宜过大，以节约蒸汽。灭菌将要结束时，应马上引入无菌空气以保持罐压，然后开夹套或蛇管冷却，以防止罐压快速下降产生负压而吸入外界空气，或引发发酵罐破坏。在引入无菌空气前，罐内压力必须低于过滤器压力，不然培养基将倒流入过滤器。放线菌发酵制药第16页连续灭菌流程放线菌发酵制药第17页放线菌发酵制药第18页放线菌发酵制药第19页三、孢子制备1、接种无菌条件，接种斜面。放线菌发酵制药第20页接种操作程序见下列图。注意：整个试验操作过程都要非常小心，不要碰翻酒精灯，以免烧伤。（1）用左手大姆指、食指和无名指夹住菌种试管和待接种和斜面试管，右手拧松棉塞、不取下。（2）右手拿接种环，在火焰上烧灼灭菌，尤其是箍处。放线菌发酵制药第21页（3）火焰边取下两个棉塞，不能放下；烧灼管口一周。（4）将接种环伸入试管内，冷却后，轻轻挑取少许菌体，马上将接种环抽出。放线菌发酵制药第22页（6）抽出接种环后，烧管口，塞棉塞，接种环灭菌。（5）火焰旁将沾有菌种接种环快速伸到斜面培养基底部，由里向外画蛇形细线，线要画得细些。放线菌发酵制药第23页2、培养将接种后试管放入恒温箱内，27℃培养6d～7d。

放线菌发酵制药第24页四、种子培养放线菌发酵制药第25页种子扩充培养流程图1、2-保藏种子3-斜面4-摇瓶5-茄子瓶6-固体培养7、8-种子罐9-发酵罐放线菌发酵制药第26页

试验室种子培养方法：液体培养法（三角瓶摇床振荡或转式培养）；放线菌发酵制药第27页液体深层培养：当前几乎全部好气发酵均采取此法生产车间种子培养方法放线菌发酵制药第28页种子培养条件

温度通气搅拌消泡放线菌发酵制药第29页Edityourcompanyslogan任务三发酵生产放线菌发酵制药第30页一、发酵参数控制1、温度控制

灰色链霉菌对温度敏感，适当培养温度为26.5℃～28℃。放线菌发酵制药第31页2、pH控制

适合菌丝生长pH为6.5～7.0。适合链霉素合成pH为6.8～7.3。

pH低于6.0或高于7.5，对链霉素合成不利。放线菌发酵制药第32页3、氧控制链霉菌临界氧浓度：10-3mol/ml溶氧要大于该浓度，能确保较高发酵单位。放线菌发酵制药第33页二、接种放线菌发酵制药第34页从种子罐接种

放线菌发酵制药第35页三、补料控制补料内容（1）葡萄糖（2）硫酸铵（3）氨水放线菌发酵制药第36页四、取样取样目标经过定时取样取得培养过程状态参数，以观察发酵进行。取样方法打开取样管，弃去残留发酵液，搜集新鲜发酵液。取样结束，取样管口通入蒸汽5min，灭菌。放线菌发酵制药第37页任务四发酵结束放线菌发酵制药第38页一、发酵液处理1、菌体分离方法（1）离心分离管式高速离心机、碟片式离心机（2）过滤真空过滤机、板框过滤机放线菌发酵制药