维生素B含量测定专家讲座

维生素B12注射液

判别、检验和含量测定

P91试验十四维生素B含量测定专家讲座第1页1、维生素B12主要起源是动物性食物，存在于动物肝脏、牛肉、猪肉、蛋、牛奶和奶酪中;2、在吸收时需与钙结合才能有利于人体机能活动;3、维生素B12能促进红血球形成和再生，预防贫血；4、促进儿童发育；能使脂肪、碳水化合物、蛋白质适宜地为体内所利用。5、主要用于治疗恶性贫血，与叶酸适用治疗因抗叶酸药、脂肪泻等引发巨幼红细胞性贫血。也用于多发性神经炎、肝炎、肝硬化、白细胞降低症等辅助治疗，当前疗效有争议。口服维生素B12仅用于已证实维生素B12吸收正常营养性维生素B12缺乏。维生素B含量测定专家讲座第2页维生素B12是含钴有机药品；为深红色结晶，又称为红色维生素B12或氰钴胺；是唯一含有主要矿物质维生素。分子量：1355.38分子式：C63H88CoN14O14P维生素B含量测定专家讲座第3页一、试验目标：1、掌握Uvmini-1240型使用方法。2、掌握维生素B12注射液紫外分光光度法判别及含量测定。3、掌握吸收系数法定量测定计算公式。4、熟悉绘制吸收曲线普通方法。维生素B含量测定专家讲座第4页

二、主要仪器与试药维生素B12注射液、维生素B12对照品Mini-1240型紫外-可见分光光度仪、石英比色皿、50ml容量瓶，5ml吸量管精密仪器，小心！维生素B含量测定专家讲座第5页三、试验准备1.用标示量0.5mg/ml维生素B12配制贮备液（样品）：吸量管精密量取2.5ml于50ml容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液（约25μg/ml）。2.25μg/ml对照品溶液（试验室提供）维生素B含量测定专家讲座第6页

四、试验内容试验原理：维生素B12分子结构中有共轭体系，含有紫外吸收，故可采取紫外分光光度法判别和测定含量。试验步骤：1、取B12贮备液（约25μg/ml），以蒸馏水做空白液做光谱图（粗扫描），在278nm，361nm，550nm处有吸收峰。2、精测：在以上278nm，361nm，550nm波长分别±1范围内测定吸光度（每转换一次波长以水做空白）统计各最大吸收值。维生素B含量测定专家讲座第7页

仪器使用方法开机：打开电源，仪器初始化，约3min完成，然后预热大约0.5h。方法菜单：

1，光度值2，光谱3，定量4，选购程序包5，系统设计-------------------------------------------------------输入项目号

参数IC包文件发送PC控制维生素B含量测定专家讲座第8页五、试验结果判别：维生素B12吸收光谱上有三个吸收峰：278nm、361nm、550nm。检验：A361/A278应为1.70-1.88，A361/A550应为3.15-3.45。含量测定：吸收系数法：利用上述361nm处测定得到吸收度，按其吸收系数E1％1cm=207计算含量及标示量百分含量。维生素B含量测定专家讲座第9页计算公式维生素B12吸收光谱上有三个吸收峰：278nm、361nm、550nm。维生素B12在361nm吸收峰干扰原因少，吸收又最强，中国药典版要求：以361nm处吸收峰比吸光系数E1%1

cm值（207）为计算含量依据本品为注射剂，采取紫外吸收系数法测定含量，其计算公式为：按吸收系数法定量计算：C样品（μg/ml）=A361×48.31

见P92取对照品测A361做对照A样品B12含量=————×100%A对照

C=ECL维生素B含量测定专家讲座第10页