抗血清的制备

抗血清的制备抗血清的制备第1页试验原理在抗原刺激下能够使机体产生对应抗体，因为抗体通常存在于血清中，所以也将机体受到抗原刺激后血清称为免疫血清，免疫血清中含有对应于该抗原多个决定簇各种抗体—即多克隆抗体。抗血清制备抗血清的制备第2页试验原理

抗血清制备分为三个步骤：

抗原制备与纯化动物免疫（注射路径、注射次数、间隔时间等）血清分离纯化与效价判定

抗血清制备抗血清的制备第3页试剂与器材

抗原与免疫对象细菌菌种（伤寒沙门菌O901）、健康家兔。

试剂生理盐水、麦氏比浊管、石炭酸、防腐剂（0.02%叠氮钠或0.01%硫柳汞）等

设备与器材剪刀、镊子、注射器、试管等器材和冰箱、离心机等设备抗血清制备抗血清的制备第4页试验方法

伤寒杆菌O抗原制备取经革兰染色做细菌纯度判定伤寒沙门菌，密集划线接种于普通琼脂平板，37℃培养24～48小时；用生理盐水将细菌菌苔洗于清洁、无菌三角烧瓶中，置60℃水浴或隔水煮沸1小时使细菌菌毛破坏（破坏H抗原）；抗血清制备抗血清的制备第5页3.将菌液移入离心管4000r/min离心10min，弃去上清，并用无菌生理盐水洗涤2次；4.取少许处理过菌液再次接种于琼脂平板上进行无菌试验（37℃，24h），确定无活菌后用生理盐水调整菌液浓度至109个/ml，加石炭酸至终浓度为0.5%，即为细菌O抗原。抗血清的制备第6页试验方法

伤寒杆菌H抗原制备取有鞭毛伤寒杆菌密集划线接种于普通琼脂平板上，37℃培养24～48小时；取出培养板，用含有5%石炭酸（苯酚）生理盐水洗下琼脂平板上菌苔，移入无菌三角烧瓶中，置37℃水浴24h（或4℃3～5天固定杀菌）；做无菌试验，用生理盐水稀释成10*9个/ml，即为细菌H抗原。

抗血清制备抗血清的制备第7页免疫日期（天）免疫路径抗原免疫剂量（ml）1(9.8)多点皮内伤寒杆菌O或H抗原1.06(9.13)静脉伤寒杆菌O或H抗原0.511(9.18)静脉伤寒杆菌O或H抗原0.516(9.23)静脉伤寒杆菌O或H抗原1.019(9.26)静脉伤寒杆菌O或H抗原2.0

试验方法

免疫方案抗血清制备抗血清的制备第8页试验方法

抗血清获取试血：末次免疫7d后试血，试血普通耳静脉或心脏采血，分离血清与伤寒沙门菌O或H抗原做试验管凝集试验，凝集效价（滴度）在1：1600～3200之间时即能够放血，若效价较低，可继续加强免疫；放血：采专心脏采血以取得最大血量，置37℃促进血块收缩，并用吸管吸收血清，3000r/min离心10min去除残余红细胞。抗血清制备抗血清的制备第9页试验方法

抗血清判定

效价测定效价测定可依据抗体不一样性质，分别采取环状沉淀试验、琼脂双向扩散、单项免疫扩散、溶血试验、凝集反应、酶免疫测定及放射免疫分析等方法进行测定。本试验以凝集反应为例。抗血清制备抗血清的制备第10页

特异性测定抗体特异性通常以交叉反应率表示,交叉反应率能够用竞争抑制试验测定。

亲和力测定亲和力测定主要有平衡透析法、酶联免疫法和放射分析法。亲和力高低是由抗原分子大小、抗体分子结合位点与抗原决定簇之间立体构型适当度决定。抗血清的制备第11页试验方法

抗体保留抗体保留浓度为20～30mg/ml为宜，加入1/10000硫柳汞或1/1000叠氮钠防腐，并加入等体积中性甘油，分装