药物分析甾体激素类药物的分析专家讲座

药品分析第十五章:甾体激素类药品分析药物分析甾体激素类药物的分析第1页甾体激素类药品分析甾体激素类药品环戊烷并多氢菲母核激素类药品发觉史SteriodHormonesCompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第2页甾体激素类药品分析1.甾体激素是在研究哺乳动物内分泌系统时发觉内源性物质发觉史2.1932年至1939年间，从腺体中取得雌酮(1932)、雌二醇(1932)、睾酮(1935年)及皮质酮(1939)等纯品结晶。

3.随即，创造用薯蓣皂甙(Diosgenin)为原料进行半合成生产甾体药品，使生产规模扩大，成本降低4.发觉肾上腺皮质激素治疗风湿性关节炎及其在免疫调整上主要价值，使甾体药品成为医院中不可缺乏药品

5.甾体口服避孕药研究成功，使人类生育控制到达了新水平

CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第3页甾体激素肾上腺皮质激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素分类CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第4页Contents结构与分类1鉴别2检查3含量测定4CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第5页第一节基本结构与性质母体结构（环戊烷并多氢菲）CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第6页第一节基本结构与性质母体衍生结构CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第7页第一节基本结构与性质一、肾上腺皮质激素311172021氢化可松(hydrocortisone)醋酸地塞米松(dexamethasoneacetate)16α-甲基21-酯化17α-羟基9α-氟3-酮1,2-双键11β-羟基20-酮CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第8页CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第9页本类药品结构特征A环Δ4-3-酮基,为共轭体系,在波长240nm附近有紫外吸收,部分药品在C1-C2之间有双键,也有紫外吸收CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第10页本类药品结构特征C17位上为α-醇酮基,含有还原性.多数药品有C17-α-羟基,部分药品α-醇羟基与酸成酯.CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第11页本类药品结构特征部分药品C6或C9位由卤素取代,呈对应卤化物反应CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第12页本类药品结构特征部分药品C11位上有羟基或酮基取代CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第13页二、雄性激素及蛋白同化激素第一节基本结构与性质甲睾酮(methyltestosterone)丙酸睾酮(testosteronepropionate)苯丙酸诺龙(nandrolonephenylpropionate)17β-羟基CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第14页甲睾酮(methyltestosterone)A环Δ4-3-酮基C17位上为羟基,部分药品羟基被酯化雄性激素上母核为19个碳原子,蛋白同化激素在C10位上普通无角甲基,母核只有18个碳原子CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第15页第一节基本结构与性质三、孕激素黄体酮(progesterone)醋酸甲地孕酮(megestrolacetate)米非司酮(mifepristone)CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第16页第一节基本结构与性质四、孕激素炔诺酮(norethisterone)左炔诺孕酮CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第17页第一节基本结构与性质三、孕激素黄体酮(progesterone)A环Δ4-3-酮基C17位上有甲酮基或乙炔基.多数在C17位上羟基部分药品羟基被酯化CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第18页第一节基本结构与性质四、雌性激素CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第19页第一节基本结构与性质四、雌性激素有些药品在C17位上有乙炔基,组成19-去甲孕甾烷母核A环为苯环,C3位上有酚羟基,有药品C3位上酚羟基成酯C17位上有羟基有些药品C17位羟基成酯.CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第20页第一节基本结构与性质总结以下CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第21页第二节Identification

物理常数测定化学判别法制备衍生物测定熔点UVIRTLCHPLC理化性质与判别试验CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第22页第二节Identification一、物理常数测定1.熔点炔雌醇m.p.201℃黄体酮双肟m.p.238℃CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第23页苯丙酸诺龙缩氨基脲m.p.178~185℃分解丙酸睾丸素m.p.150~156℃第二节IdentificationCompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第24页第二节Identification二、化学判别法2.比旋度3.吸收系数与强酸呈色反应官能团反应1.与强酸呈色反应甾体激素类药品硫酸、磷酸、高氯酸、盐酸呈色CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第25页第二节Identification2.官能团反应①C17-α-醇酮基——还原性A.呈色反应C17-α-醇酮基四氮唑盐OH-呈色B.沉淀反应C17-α-醇酮基氨制硝酸银银镜反应C17-α-醇酮基碱性酒石酸铜Cu2O↓CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第26页第二节Identification②C3–酮基和C20–酮基甾酮类2,4-二硝基苯肼呈色异烟肼、硫酸苯肼异烟腙（黄色）睾酮异烟双腙（黄色）黄体酮CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第27页③甲酮基或活泼亚甲基第二节Identification亚硝基铁氰化钠间二硝基酚/芳香醛呈色蓝紫色黄体酮④卤素⑤酚羟基雌激素类重氮苯磺酸红色偶氮染料CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第28页⑥乙炔基第二节Identification↓炔雌醇白⑦酯基CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第29页黄体酮三、UV四、IR第二节Identification酚羟基醇羟基炔键羰基苯环骨架振动CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第30页第二节Identification五、TLC制剂分析对照品法炔诺酮六、HPLCCompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第31页第三节PurityTest一、TLC地塞米松磷酸钠中杂质检验CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第32页第三节PurityTest氢化可松中其它甾体检验对照品60μg/ml供试品3.0mg/mlCHCl3-MeOH(9:1)溶剂硅胶GF254二氯甲烷-乙醚-甲醇-水385:60:15:2展开后晾干105℃干燥10min碱性四氮唑蓝显色CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第33页对照溶液——0.02mg/ml供试液——1mg/ml二、HPLC第三节PurityTest黄体酮中相关物质检验供试品溶液杂质峰数不得超出1个，其面积不得大于对照液主峰面积3/4CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第34页第三节PurityTest三、硒检验起源

合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢四、溶剂残留甲醇和丙酮(GC)0.3%0.5%CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第35页第三节PurityTest五、游离磷酸盐检验钼酸铵磷钼酸740nm，UVCompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第36页第四节Assay

HPLC

UV比色法非水溶液滴定法四氮唑比色法异烟肼比色法柯柏反应比色法CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第37页第四节Assay一、HPLC对照液供试液己烯雌酚黄体酮CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第38页第四节Assay二、UV醋酸地塞米松CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第39页第四节Assay三、比色法

比色法是指供试品在紫外-可见光区没有强吸收，或在紫外光区虽有吸收，但为了防止干扰或提升灵敏度，可加入适当显色剂显色测定方法。因为显色时影响原因较多，应取供试品和对照品平行操作，采取对照品比较法测定，比色时采取试剂空白。CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第40页第四节Assay比色法

肾上腺皮质激素类OH-[还原]2,3,5-TriphenyltatrazoliumchlorideTTC(RedtatrazolineRT)甲潜(Formazan)深红色λmax480~490nmCompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第41页第四节AssayBluetetrazolineBTBT-单甲潜BT-双甲潜蓝色

λmax525nmCompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第42页氢化可松软膏含量测定第四节Assay精密量取对照品溶液及供试品溶液各1ml，分别置干燥具塞试管中，各精密加无水乙醇9ml与氯化三苯四氮唑试液1ml，摇匀，各再精密加氢氧化四甲基铵试液1ml，摇匀，在25℃暗处放置40min～45min，在485nm波优点罚别测定吸收度，计算，即得影响原因基团溶剂与水分碱空气中氧与光线温度与时间CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第43页第四节Assay（1）基团对反应速度影响C11=O＞C11－OHC21－OH＞C21-酯C16不论何种取代基ν↓（2）溶剂、水分影响含水量＞5%→ν↓含水10%→A↓10%含水30%→几无反应—无水乙醇(无醛)CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第44页第四节Assay（3）O2与光线影响（4）碱种类及加入次序反应应在强碱性（pH13.75）条件下进行以氢氧化四甲基铵结果最正确（5）温度与时间t℃↑→ν↑→甲瓒分解↑→%↓CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第45页(二)异烟肼法(Isonicotinicacidhydrazide)第四节AssayINH△4-3-酮IsonicotinicacidHydrazideCompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第46页第四节Assay影响原因（1）反应速度C3=O＞C17=O、C20=OC11=O不反应专属性强（2）溶剂选择异烟肼盐酸盐→甲醇、乙醇无水（3）水分、O2与光线影响含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓不挥发溶剂、不吸收水分时→O2与光线无影响CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第47页第四节Assay(4)酸、异烟肼量盐酸:异烟肼=2:1酸度↑→异烟肼盐↓酸度↓→A↓样品:异烟肼=1:8→ν↑

(5)温度t℃↑→ν↑CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第48页第四节Assay(三)Kober反应比色法CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第49页第二步反应515465450500550nmAKober反应吸收光谱第一步反应第四节Assay采取本法测定炔雌醇片及复方炔诺酮片、复方炔诺孕酮滴丸、复方左炔诺孕酮片中炔雌醇含量CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第50页第四节Assay四、非水滴定——米非司酮五、生物样品中甾体激素分析Dopingcontrol滥用药品检测刺激剂麻醉剂β-阻断剂利尿剂遮蔽剂合成类固醇及β2激动剂肽类激素外源性内源性CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第51页兴奋剂检测特点色谱方法是理想检测伎俩。1976年使用气相色谱-质谱联用伎俩检测甾体，1980年开始用毛细管气相色谱法检测，至1984年大致基本定型。药品及其代谢物种类多，改变大，禁用百余种药品以原体或一个或多个代谢产物形式存在与人体体液中，所以，需要检测和确证化合物多达几百种。除此以外，用药后不一样时间，这些化合物浓度不停发生改变，直到排出体外。药品在人体体液中浓度很低，药品在人体体液中浓度经常是ng级或更低水平，所以对检测灵敏度要求很高。要求准确定性和定量，不能有丝毫疏漏和差错。检测者要对每一个药药品代谢动力学及光谱分析有全方面娴熟了解及足够分析参考资料CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第52页检测基质1.尿液尿样检测是兴奋剂检测理想样本。其优点在于：取样方便；对人无损害；尿液中药品浓度高于血液中药品浓度；尿液中其它干扰少。2.血样补充尿样分析方法不足，当前尚处于研究探索阶段，当前仅用于血液回输，红细胞生成素，生长激素，绒毛膜促性腺激素，睾酮等测量。CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第53页3.头发在法医，毒性分析中已经有较长历史，但在兴奋剂研究中是才兴起研究方向。有采样轻易，无损伤，不易作弊特点，备受关注。皮质类固醇在体内消除很快，假如赛前停药，尿液分析就检测不到，而发样分析仍可检出。4.体液CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第54页检测步骤一、筛选方法（1）挥发性含氮化合物组：主要检测刺激剂。这类药品多以游离形式排出。（2）难挥发含氮化合物组：主要检测麻醉阵痛剂和β-阻断剂。这两类药品多以结合形式排出，所以需先水解，使之游离，再进行衍生化后检测。（3）利尿剂组：药品经提取后用高效液相色谱法分析检测，此组同时检测2种兴奋剂、咖啡因和匹莫林。（4）甾体同化激素组：这类药品有以游离形式，有以结合形式排出，我们所用方法为同时检测。CompanyLogo药物分析甾体激素类药物的分析第55页二、确证方法经筛选判为阳性尿样，需深入加以确证，依据要求，确证结果须给出药品或其代谢物质谱图，所以在确证方法中均使用气相色谱法-质谱联用仪，确证时分组同筛选方法中所述。（1）挥发性含氮化合物组方法同筛选，最终之提取物浓缩后进样于GC/MSD。（2）难挥发含氮化合物组方法同筛选，最终之衍