一份很有参考价值的浙江自然基金标书重点资助

亿同行评议组装别阁药物化学与院生化药学洞项目编号束Z2065幸10浙江省自然科学基金申请书昼申报类别:完重点、重大爹项目村项目名称:歌天然来源新停型抗肿瘤药很物先导的快榜速识别研究妹申取好请屋版者:桐潘远江绕电愿挺话:爱0571-张87951青264匠依托单位:掀浙江大学/侍理学院凳通信地址:摄浙江大学化准学系点邮政编码:齐31002豪7压E-mai抗l:冷panyu腹anjia瞒ng@zj辱监童申报日期:疤2006-叮5-25浙江省自然科学基金委员会二OO六年制基本信息局申请者信息倾姓名蒙潘远江片性别答男居出生日期领1966年辫09月19多日受最终学位付博士镰获学位年份进1994苏职称戚教授齐主要研究领饥域毙天然药物化轰学与有机波熊谱学内E-mai末l哨panyu衬anjia网ng@zj望雁盖电话仰0571-萄87951眨264白个人网页卵c亿ss.zj于最/~蚁bnpc若依托单位亲浙江大学/雾理学院歪证件类型槐身份证添证件号码芬62023仗26609垦19533搏申请者是否腾近三年调入垂在浙单位工蝇作铜否松调入时间骂托申请者曾主善持的浙江省彻自然科学基标金资助项目罚编号:惩29801底7,R00傻042勒申请者正在劳主持的国家性和省部资助饶经费在20嚷万元及以上抗的研究项目少名称、来源将和研究期限奏:次抗氧化植物庸多酚的新型枕逆流色谱分警离方法研究牺国家自猴然科学基金凝232倘005.1絮－2007求.12重质谱在天锻然来源抗肿烧瘤活性成分步靶向筛选中穷应用妈国家自然科而学基金2馋320布05.1－嫂2006.装12挡项目基本信则息盼项目名称蛇天然来源新顷型抗肿瘤药支物先导的快雪速识别研究拨申报类别甜重点、重大白项目狭研究属性羽前瞻性应用成基础研究概同行评议组不别齿医药科学/浮药物化学与伴生化药学颠依托基地名告称栗篇预计研究年哄限煎2007年索01月－2格009年1滨2月斗总经费预算朋20.0店万元疤申请经费科20.0平万元扬项目研究目晕标、内容和法意义简介(娱限400字勉)曲选择浙江产修几种抗肿瘤爹药用植物-涉-兰科植物脱石豆兰属和绵石斛属植物聚广东石豆兰侄（Bulb推ophyl放lumk陕wangt滥ungen浸seSc来hlech霉t）与细茎荣石斛（De垦ndrob飞ium.m填onili磨forme膊）为研究对炒象，对其中调的抗肿瘤生勺物活性成分牙进行研究,算重点关注这爆些植物中含酿量低微，结凑构新颖的有糟效成分的研遣究。本项目驶拟以基因工湖程获得的具演有激酶活性阻的病毒癌基察因表达蛋白钥v-Src歌作为蛋白质惨靶标分子,蔑在分子水预平上对来自服药用植物中闹的若干含量助低微的新的炮抗肿瘤活性宾分子进行靶柳向筛选,虏通过高分辨萄质谱以及液旁相色谱/质春谱联用分析设手段进行这睁些成分的分膏析确定，发浴展并建立微带量水平上的持天然来源新圣型抗肿瘤药赶物先导的快蚂速识别新途继径，并在此唇基础上，结维合其他波谱兄手段结合体竞外药理验证瞎，获得一系骆列具有新颖孕结构与良好原抗肿瘤活性拳、具有应用匆前景的新型戴药物先导,技为创制具有勇自主知识产截权的抗癌新株药的研究提塌供科学依据训.包关键词（不移超过4个）搂v-Src嘉;抗肿瘤药挣物先导；快青速识别；质犹谱分析浊同行评议分昌组说明哲天然药物化疯学

胶柱重点资助方嚷向麻创新药物的幻基础与药物救资源学研究项目组主要成员键编号圾姓名岔出生日期辟性别腔职称培学位蔽单位名称攻盛项目分工原每年工作时间间（月）（蹲（(月)狮1申潘远江返1966年会09月19细日滋男划教授险博士圾浙江大学/提理学院达0571-别87951林264炎负责人粒8呆2傍吴晓丹车1971.咱07.16役女适高级工程师锅硕士闭浙江大学鸟0571-容86971优215浮实验研究候9拴3雁王丹华买1966.洞05.31甩男暂博士后宽博士壮浙江大学环0571-崭87953森000碑实验研究僵8赢4泼何山殖1982.婚01.12女男揭博士生该学士慧浙江大学抢0571-郊87953谊000僻实验研究女9包5常胡楠角1982.漠10.10很女舟博士生妄学士疯浙江大学夏0571-辨87953讯000协实验研究乒9欧6淹万结平威1982.泰01.17让男会硕士生伪学士忌浙江大学居0571-夜87953追000秆实验研究羞9取7杨娘搂狐武歼业萌踩冻总人数狭高级寿中级吃初级教博士后拴博士生罩硕士生驶参加单位数合6悄2蒙0屈0预1径2远1完1上说明：1豪.闲个人介绍部击分申请者必螺须填写，其中他人员可以乖不填写；创2.高级、采中级、初级往、博士后、阶博士生、硕杏士生及参加与单位数由申昂请者负责填妨报，总人数蚁自动生成；衣3.第一人宪必须是申请半者，信息从堂前面自动读获入，但每年嗓工作时间必走须手工录入私。个人介绍：沉潘远江：急学厚历：

迹1984.肾9—198骑8.6匪兰州大学化促学系理聋学学士

嫌1988.框9—199宵1.6炮兰州大学化搅学系理嘉学硕士

晶西北产藏药岩翠雀花中二皂萜生物碱研抗究义导师池：陈耀租朝院士

蛙1991.核9—199悟4.6泼兰州大学化帆学系理林学博士

楚生物活性分般子的质谱研柜究受芒索导师匪：陈耀租钳院士

脾工作经历：

膏1994.跪9—199蛮6.5显浙体江大学化学阿系祝公鹿矮回盒博士后

锣1996.亦7—199霸7.10醒瑞用士伯尔尼大宽学化学与生塘物化学系寺沃带博士后

芦1995年栗11月仆弹浙江才大学化学系荣有机与药物脏化学研究所府性副锹教授

衰1999年绣11月觉身浙江寻大学化学系议有机与药物隔化学研究所脊愿教愚授

讯兼任浙江大资学药学院望教授

货2000.倡11－－脆殖浙江门大学化学系阁于适时泉教授,哄博导

毕主要学术兼井职：真中国穴化学会有机赛分析与生物殃分析专业委弊员会副主任

谦中国化学会美《有机化学微》,《Jo包urnal皇ofZ锄hejia确ngUn瞧ivers倾ityS宵cienc软e》编委,

罗中国药学会雁高级会员

赚杭州师范学秆院兼职教授

特主持的主要息研究项目有想：

骡1）质谱在需天然来源抗陡肿瘤活性成旱分快速筛选漂中的分析研策究

鹿11.5交万元20顷00-20文02，负责决人已完成

脚2）冠心I胜I号组成原霞理基础研究闲窄

瓦38万元凡2001斩-2003霸，化学负责哈，已完成

捉3）质谱在患天然抗肿瘤泰活性成分靶斑向筛选与分滴析中的应用妨

膨23万元描2003循-2005讽，负责人，羽在研

纱4）生物活秧性植物多酚僚的逆流色谱悼分离新方法桂研究

遣23万元济2003励-2005务，负责人，缴在研

彼5）中药活促性成分快速眉筛选的现代爸组合化学研眠究-省自然流科学基金委事人才基金

临30万元，混2001-绝2003，税负责人，已豪完成

趴6）浙江传睛统中药抗癌剥生物活性成而分快速筛选式与结构测定显-省自然科乌学基金项目

渡4万元，1伙999-2脸001，负陡责人，已毫完成。

记已发表学术礼论文120站多篇，被S徒CI收录1压00余篇，董作为通讯作捆者的代表性任SCI论文敲有：

墨1.L挑u,Xi所ngguo爽Gong锯,Yuw泽enLu易,Jia策njun谣Guo,诵Chenh渠uiWa竭ng,A衫ndYu停anjia振ngPa侦n

移Molec浪ular讯Cloni净ngAn比dFun熊ction鲁alCh置aract呜eriza役tion丸OfA亡Cell-舌Perme玩able灾Super努oxide深Dism肯utase收Targ挠eted反ToLu缎ngAd揉enoca框rcino荐maCe碰lls:

写J.Bi孩ol.C练hem.,避May侨2006;刑281:浮1362葡0–1垫3627

可2.Cao罪Xj,嫁TalY闲p,Li传Xy,简PanY孟JSc说reeni悟ngFo颤rPre锋gnane描Glyc槽oside包sWit多hImm酷unolo掌gical富Acti块vitie网sFro件mThe脖Stem辫sOf妨Steph武anoti包sMuc唯ronat附aBy跑High-蜘Perfo口rmanc循eLiq渡uidC佛hroma饲togra骂phy/T扇andem早Mass手Spec扇trome阳try

个Rapid鬼Comm盐unica敢tions妄InM弄assS你pectr鹿ometr植y200即6,20耳(3):昨403-称411

唯3.Wan面gKw,咏Sun捆Cr,W姑uXd,迅PanY陡JNo射velB怠ioact延iveD素ammar耗aneC想affeo休ylEs帖ters墙From雪Celas斥trus颜Rosth袭ornia越nus

督Plant论aMed到ica2置006,7兽2(4)评:370低-372

僚4.H昌uang史SL,P捆anYJ贫,Zhu票WL,隶WuAX逮ANo忽velT钓hree-辰Compo丈nent购One-P德otRe罩actio营nInv弊olvin高gAlk赚ynes,泉Urea差OrT宰hiour邪ea,A爸ndAl聋dehyd蒙es驴Orgna在icLe坟tters寄2005演,7(1读7):37如97-37榜99

根5.L型uYB,搏Sun钞CR,W妇angY逼,Pan害YJ.P舅repar捐ative割Isol昨ation袖And绘Purif旦icati寸onOf治Two闪Pheny傍lbute泪noids重From刘The饺Rhizo暑mesO熔fZin以giber桃Cass罚umuna号rBy竞Uprig艘htCo巡unter银-Curr恳entC算hroma爪togra辞phy

讨Journ元alOf胡Chro苹matog耀raphy堂A20庆05,10腐89(1抽-2):婶258-2挣62

景6.W抄uSH,槐Sun敏CR,P吓anYJ征Prep龄arati裙veCo胶unter者-Curr镇entC狮hroma浴togra丝phyP浪urifi配catio惊nOf搂Valru量bicin陕(AD-口32)F跟romC孝rude饮Synth街etic僻Drug棕Using购Upri开ghtC虫oilP对lanet塑Cent起rifug来eWit唤hFou旋rMul杜tilay笼erCo凝ilsC胖onnec册tedI遮nSer裳ies兰Journ命alof裤Chro衫matog矛raphy岸A20鸽05,10抵76(1勿-2):赤207-2若11

掏7.Z券huYL醉，Hua甩ngSl驻,Wan扫JP,鼠YanL遵And联PanY除JTw屈oNov刺elDi贤aster右eosel束ectiv女eTh玩ree-C龙ompon释entR么eacti屠onsO萄fAlk库enes杂Or3,委4-Dih财ydro-丘(2H)-陵Pyran茎With践Urea副/Thio举urea否-Al赚dehyd纺eMix愉tures逮:[4+祖2]-Cy雄cload喘ditio亲nVs鼓Bigin舱elli-好Type岛React寄ion乐Org.盆Lett.雄,200梅6,AS闻ASAr王ticle翅.

药8.我WuS嚷H,Su步nCR,累Pei资SF,P志anYJ箩Pre沿parat释iveI券solat寄ionA戚ndPu令rific革ation莫OfA木mides银From溉The甩Fruit治sOf鸦Piper夕Long勒umL.疯ByU锡prigh丸tCou趴nter-己Curre叮ntCh伟romat妇ograp带hyAn还dRev直ersed侦-Phas触eLiq概uidC点hroma爸togra筹phy址Journ辫alof感Chro青matog偷raphy迁A20替0410捉40(2闻):19鉴3-204魂

衔9.W是uSH,童Sun硬CR,W脆angK腰W,Pa宁nYJ刘Prep专arati议veIs此olati剂onAn掘dPur第ifica盼tion塌OfCe墓lastr天olFr半omCe塑lastr泰usOr结bicul顽atus坚Thunb乱.By离ANew荷Coun徐ter-C队urren内tChr格omato传graph蚁yMet谣hodW榜ithA蝇nUpr斥ight论Coil府Plane爆tCen续trifu少geJ嫩ourna茶lof药Chrom呆atogr剑aphy粮A200奔4,102抄8(1)蜓:171休-174理

叔10.Z检hang效H,Gu店Q,L弊iang辩Xl,P木anYJ简Sc碍reeni拒ngFo熟rTop绘oisom柴erase凉IBi那nding租Comp牌ounds甘ByH害igh-P产erfor植mance邮Liqu伯idCh奸romat箱ograp份hy-Ma豆ssSp扇ectro残metry矩

狂Analy工tical曲Bioc窑hemis寺try2气004,3炮29(2粘):17价3-179肆

热葛乞评师怜值虽朵岸滑钞畏申请经费预鸡算桌笨20.0蛛丹万元糊计划开支项右目名称请计算根据及辱理由习金额（万元险）周1．信息费阁10000深歪文献调业研,联机检是索与查新等干可1.0贿2．专题学栏术活动费检15000太赶出席国秤内外会议晴1.5残3．仪器和尺设备购置费越15000帜算色谱柱姓与进口渗析蜓膜等股1.5迈4．能源材巴料费裁13000音0葬药材采智集、药品购晃置、正反相胶材料购置、今玻璃易耗品边、化学试剂怎与NMR、沙MS等测试老费引13.0吉5．计划管桐理费迁10000必妹按规定色，用于水电件补贴粒1.0撞6．人员费殖20000泉弓硕、博复士生劳务补堡贴，发表论帮文补贴更2.0旦注：开支范腾围和标准参言见《浙江省逗省级科技项柜目经费管理谣暂行办法》播（浙财教字愤[2002蓬]20号）滩。惑申请者承诺流：我保证：滔（1）申请樱书内容是真沟实的；射（2）恪守鹊科学道德，蚁伦理道德的乡基本原则；怠（3）项目群组成员知晓棵申请书内容崭，并自愿参钉与研究工作僵；钱（4）已如喝实填报申请烧者正在主持乎的国家和省岸部资助经费持在20万元身及以上的研饥究项目名称艳、来源和研评究期限；巨（5）如果昏获得资助，每我将履行项他目负责人职遥责，严格遵提守浙江省自葵然科学基金塔委员会的有腿关规定，切裙实保证研究语工作时间，眠认真开展工商作，按时报纵送有关材料垄。坊若填报失实奔或违反规定嘴，本人将承塘担全部责任拍。钥签字：揪退昏裹东论日期：茫项目依托单么位承诺:爬已按规定对肚申请人的资学格和申请书恭内容进行了阻审核。申请刑项目如获资很助，我单位母保证对计划杏实施所需要唯的人力、物忍力和工作时观间等条件给课予保障，严列格遵守浙江才省自然科学缩基金委员会岩有关规定，动督促项目组帅遵守科学道何德和伦理道剪德的基本原累则，督促项姥目负责人和奔本单位项目骨管理部门按死照规定及时络报送有关材做料。风依托单位公顷章置日期味搂.刊正文撰写提玩纲寇1、项目名寿称拍天然来源新渡型抗肿瘤药摘物先导的快圆速识别研究幕2、研究工声作对浙江经数济、社会和监科技发展的莲意义虏中草药（药弊用植物）有拆效成分研究泳是发现与创满制新药的一爆条重要途径行，一直令人丘关注。长期酒以来，该研斧究获得了许污多极具应用颤价值的新型须药物如紫杉提醇等或其他渔药物先导化另合物如鬼臼绳毒素等汤,寄为人类健康均做出了贡献妖。数十年来喊，我国在中碰草药有效成粱分的研究方节面取得了长悼足的进步，锄也积累了丰榆富的经验，百为天然药物借的创新研究的奠定了良好树的基础。然础而，由于中胁草药化学成州分一般都十臂分复杂，传除统的研究模避式（科技条票件限制）往磁往只关注含琴量较为丰富缘的主要化学雕成分，且其包有效成分的挨分离提取与纲药效验证实匙验往往是脱般节的；这种桃方式经常会收形成费时费全力的无效分偷离；既大大目降低了从中志草药有效成嫌分出发创制津新药的效率截，又往往会歇忽略一些含变量极其低微桌的新型有效暮成分；而这疑些新的微量演有效成分很脏可能是新型响药物先导的斑重要源泉。阻因此，在中戒草药有效成变分的研究过苦程中，必须间充分借用现膊代高新技术嫁手段，发展湖与建立微量挡水平上的生拒物活性成分杯快速识别的敬新方法，才葬能突破传统砌研究模式的妻制约，加大假寻找与发现晴新型药物先右导的可能性男。害在药物（西瑞药）的研究程中，曾发展桶通过筛选化介学库（组合膝库、化合物蹲库）来寻找条及优化药物柴先导(西药辞)的新技术房[1]围，这一研究残途径可改变坊传统的逐一狮合成或分离舟提取、逐一语纯化及逐一扁识别的模式充，从而加快村了药物先导娘化合物出现连的速度，这霉一技术也为储中草药有效偏成分（天然示的复杂的化昼合物库中的矿某些特定化倡合物）的研狸究提供了新度思路。土在快速筛选拿化合物库的段新技术中，厨基于生物亲除合等分子间朱相互作用（勉力）分析的龟靶向筛选受盒到了广泛的削关注厘[激2轧]信，其中一些科与生命活动属密切相关的绵酶或蛋白等窝常常作为靶英标分子而被鸦研究；这种坊基于靶标分挑子与药物分个子（配体或袖抑制剂）的止相互作用的踩体外生物活弹性筛选，便章形成一种十沙分灵敏的生用物活性分子莫的快速发现半的途径，这山一研究方法云的成功应用叉除一是要选格择合适靶标斩分子，二是欧要寻求与之冈匹配的活性恋分子定性检端测的高灵敏娘度的分析方摇法，飞速发宇展的现代质肥谱技术如电阔喷雾电离结健合高分辨技客术质谱（E省SI-HR屿MS）等因独其具有快速祸，灵敏度高眉以及易与分蕉离手段（如云HPLC）开联用等特点坏正成为现代谦药物研究最有重要的分析索手段之一厦[挑3-4趟]荷。占抗肿瘤药物肥的研究与创端制是关系到管人类健康的码重大课题之茎一，而从中允草药出发寻及求与发现高鞋效低毒的新侦型抗肿瘤药食物一直是医批药行业极为练关注的热点顶研究领域；涝如前所述，螺在传统的中串草药有效成碧分研究基础帅上，尽快开怨展微量水平捧上的生物活驰性成分的研削究，将大大糊丰富抗肿瘤道药物先导的驻新源泉，在鸟我们前期的核研究中，本码课题组曾以竿拓扑异构酶宅以及微管蛋症白作为靶分岂子，结合质洪谱分析对一财些抗癌药物有分子进行了局成功的筛选鸭与分析灭[铃5-6创]蝶，然而由于隔拓扑异构酶庆，微管蛋白仇的活性保持今较为困难，惯因此基于这灯些靶标分子阵的活性成分引筛选的应用牌受到很大的漠限制，为了愧探讨并建立恒更具应用前赔景的微量新苦型天然来源音抗肿瘤活性两成分筛选与前分析一体化衫的新途径，嫩合适靶标分杜子的选择与懂应用一直是晶我们极为关眉注的问题。退近年来癌基伸因蛋白产物闯Src的发盆现引起人们登的广泛兴趣父，由于Sr巧c蛋白含有短两种主要形榴式即病毒癌匀基因表达蛋哪白v-Sr洋c与细胞原蹦癌基因表达纤蛋白c-S典rc，c-魂Src蛋白化的表达和活集性异常是某纽些肿瘤发生牢、发展的原粒因之一，而江v-Src沸蛋白本身就犁能诱导细胞绩的转化与肿澡瘤的发生；妻因而研究开袖发Src蛋矮白抑制剂作姜为强效肿瘤坊抑制剂已成赵为目前国际采医药界广为伞关注的亮点吨[7-8]沫。为此，本唤项目拟以基花因工程获得尸的具有激酶委活性的病毒讯癌基因表达离蛋白-v-木Src作为聪蛋白质靶标迹分子,在们分子水平上俊对中草药中桂的一些新的访微量抗肿瘤张活性分子进皆行靶向筛选荣,结合高波分辨质谱及齐液质联用分假析手段，对量这些活性分诸子进行分析惑确定，从而痕发展并建立槐微量水平上宗的天然来源多新型抗肿瘤某药物先导的谱快速识别新露途径。耳浙江省药用泪植物资源分朴布极其丰富田，对这些药切物，除需要塞充分发挥传代统的天然产款物化学的研姜究方法优势范外，还需尽神快借鉴国际筋上先进的研再究方法，开漆辟新的研究饥思路，将馒为我省研制哗具有自主知玩识产权的新齿药奠定扎实向基础并提供剃一条可行的悟捷径。本项况目研究将为资寻找发现新晚药先导提供龙新途径，为走促进我省乃担至我国医药另事业的振兴造与发展做出梨贡献，课题拍的实施既具唱有重要的学好术理论价值胀又有广阔的犹应用前景。豆3、本项目片研究目标及删与申请者研僚究工作长期妇目标的关系跟；魔项目研究目奶标：浩本项目拟以浇浙江民间抗督癌药用植物狠体为研究对徒象，以v-仆Src蛋白纵作为靶分子严，对天然来拖源抗肿瘤活另性分子进行金快速筛选，斯结合高分辨廉质谱及液质节联用技术对甚这些分子进杂行分析确定虫，以建立微障量天然来源倍抗肿瘤药物换先导的快速亦识别新途径帽，并应用该炒途径寻找发毫现一系列具驱有应用前景祥的抗肿瘤药终物先导。城与申请者研什究工作长期刷目标的关系膝：考申请者长期虾从事（天然灯）药物化学赠研究，围绕核新的生物活赞性分子的寻房找与发现这蛋一研究方向购，进行了以愤下的研究工博作：1）近锐几年通过1也0余种药用但植物的植化圣研究，分离旷得到80多宗种新化合物赵，其中10洞余种是具有备应用前景的访新的生物活套性分子，在问国际知名专第业学术期刊堪《Phyt饲ochem拾istry植》、《姐Stero捕ids被》、《Jo门urnal趴ofN察atura世lPro樱ducts杜》，《Te含trahe诞dron白lette条rs》(塌影响因子均穿大于2.0车)以及《灰Plant粥aMed耕ica》上肿发表了多篇映论文；懂2）在天然蜓来源生物活洪性成分分离蚊与分析研究硬中进行大量隙的积累：进讲行了艰新的逆流色宜谱技术研究里与开发并应上用于天然药扔物有效成分萝的分离纯化秤的研究中，缠其成果在《碰Journ群alof浴Chro获matog拳raphy辱A》(址影响因子：攻IF为3.醒35)发表页了论文6篇衣；负责承担片了一项国家椅自然科学基租金百个“刻抗氧化植物贸多酚的逆流哄色谱分离方仁法研究界”活（2005酿-2007再）帝项目；应用移质谱及其联室用技术开展挣了生物活性罚分子筛选与饱分析研究等劫一系列探索故工作，分别韵在《Ana幸lytic部aChi肝m.Act摇a》,《僵Rapid漠Comm撤unica个tions床inM击assS姿pectr酿ometr刮y》等杂殿志上发表论薯文多篇；3想）发展与建猜立了生物活放性分子在线启分离分析的吓新途径，进食行了抗癌药更物分子的靶狭向筛选与快色速鉴定等研狭究探索，其冠研究成果已扁在《An恒alyti扭cal重Bioch气emist流ry鸟》,《科泳学通报》，著等杂志上发株表，目前有耀一篇论文已率递交美国《跌Analy锄tical倾误Chemi铲stry反》(影响因用子：IF为资5.45)巧;伸负责承担了旦两项谈国家自然科辩学基金细锣“娃质谱在天然附抗肿瘤活性己成分快速筛花选与分析中返的应用轿”绳（1999悬-2001素）与贺“翼天然来源抗永肿瘤活性成笔分靶向筛选绕与质谱分析奏”后（2004匀-2006洞）项目。4唱）道课题组通过色绿色合成途戚径开展了天稀然活性分子呜的合成与衍商生以及目标赵生物活性分宁子的药物合妨成等研究工吹作，迄今已汉在《Org朝anic贱Lette吗rs》(影肠响因子：I悦F为屡4.19)携发表论文3衰篇；在《B炸ioorg挪anic胸andM激edici抹nalc典hemis躺tryL棋etter浑s》、《T淘etrah使edron狮》、《Eu关ropea巷nJou残rnal荷ofOr网ganic找Chem岁istry龄》(影响因楚子均大于2喷.0)等其仅他杂志上发忽表论文多篇掘。5）基于矮靶向筛选必暮须拥有高效题的新型蛋白腾靶标的原则网，近期与从妖事生命科学锈研究的相关预课题组开展更了合作研究壁，并于20色06年在国泼际著名杂志拨《Jour摧nalo箱fBio托logic眠alCh励emist因ry》(影副响因子：I滴F为6.3穗5)发表论梅文一篇。邀总之，寻找绑与发现新的锣药物先导是宽我们研究的横重要课题，隙为了顺利实诞施该课题，甲发展与建立伞新的研究途谱径与方法，萄归纳总结科宣学规律并促杜进学科发展楼，一直是我速们研究工作纹的长期目标殿。迅天然来源抗革肿瘤化合物匙是我们在长谨期的天然药惩物研究中极劳为关注的一模类活性成分荡，这不仅是违因为抗肿瘤帽活性成分在痒天然药用植悉物中分布较竭广泛，具有疏复杂的结构歪多样性，对毒其研究必将咳大大促进天裤然药物化学句（有机结构湖分析）研究乔技术与方法窃的发展与更鸭新，既可丰帮富天然有机妖（药物）化伏学理论内容双，更重要的直是对这类活谁性成分的深阶入研究可大风大丰富抗癌粪药物先导的捏源泉（为药雁物合成提供割靶标）从而新为创制新药寨奠定良好基业础，为我省适、我国的医治药事业做出忘贡献。在我冤们近期的相放关研究中，秘我们从一些喂药用植物中例得到的一系虽列具有抗肿劣瘤活性化合催物，并申报快了专利，这罗些化合物拥冒有多类结构幸骨架如萜类鉴、糖苷以及区黄酮等，多中数新结构含厕量甚微，其旅分离分析颇澡为艰难，常纺规的正反相竞层析与高效阴液相制备要托么效果不佳铅要么代价太诚大，因而发染展微量水平犯上新的抗肿怪瘤活性成分糠分析的新途到径具有极其脸重要的意义隔。鉴于此，拢本项目拟以届v-Src晨蛋白作为并靶标分子，挨基于该靶分缩子与抗肿瘤叶活性分子的泛相互作用进省行中草药中睁抗肿瘤活性洒成分的靶向暂筛选，结合锅高效液相色皆谱/质谱联购用技术对上谈述筛选出的红成分进行在羡线分离分析里与鉴定，从课而发展与建赚立关于天然毯来源抗肿瘤游活性成分快霞速识别的新填途径。血本项目的实屈施是我们长便期研究目标即的最重要内歼容之一。拍4、项目研叮究内容，研姻究方案和进健度安排研究内容：芹浙江省原生姜的兰科植物探石豆兰属迎和克石斛笼属植物模广东石豆兰柴（盆Bulbo榆phyll留umkw袖angtu懒ngens员eSch成lecht沾）与壮细茎石斛冰（刻Dendr荒obium贫.moni羽lifor也me她）纸等几种植物创根茎的乙醇摔提取物在体殃外抗肿瘤实慢验中，对人尚卵巢癌HO雁-8910物细胞，人宫悟颈癌细胞和秧人早幼粒白款血病HL6嫌0等细胞株筋呈现出明显担的抑制作用视，在已展开鸭的植物化学洗研究中，我榴们斩从回几种减植物闹的富含成分述中分离得到焰一系列宜9抄,辫10足-二氢二苯句并[b,疏f鼓]氧杂卓镰类化合物与织单体毛兰素追(Eria烈nin)、烧毛兰菲(C现onfus革arin)急等摇，这些化合之物均显示较购强的体外抗扒肿瘤活性。洒仗会酷9蔬,饭10衰-二氢二苯柏并[b,象f宇]氧杂卓坚类团百粥锻鹿覆毛兰素(E胶riani奖n)博沿尖盯她毛兰菲(C申onfus洒arin)凉本项目即以刃这几种植物六为研究对象花，重点关注售这些植物中刻含量低微，敲结构新颖的雁有效成分的测研究，拟以蹦基因工程获阵得的具有激氧酶活性的病崭毒癌基因表谜达蛋白v-库Src作为厌蛋白质靶标繁分子,在饼分子水平上滑对上述一系击列新的微量鸣抗肿瘤活性猫分子进行靶主向筛选,热通过高分辨答质谱分析及若其联用手段汤进行分析确压定，发展并宣建立微量水偿平上的天然展来源新型抗身肿瘤药物先早导的快速识蹄别新途径，选并在此基础急上发现若干水具有应用前赛景的新型药阶物先导，费具体研究内矿容如下：晕一：植物闻中的富含有炸效成份的分堡离分析--胀-常规研究杂途径硬1）运用传妇统色谱方法寇得到富含成州分有效部位继分离提取，扑所获得化合派物多为已知伴结构的化合盗物；对新结杨构化合物，塞通过现代波飘谱技术（1堆D,2D-笼NMR等）况确定结构，贱并进行抗肿那瘤活性验证浆。该过程可学去除有效部筝位的富含成州分，富集有真效部位的微言量成分。绣二：宇植物中的微付量有效成份号的分离分析阁—速发展新的研特究途径棒选择病毒癌掌基因表达蛋叛白v-Sr负c作为靶标土分子，自行剃组装生物活牵性快速筛选藏装置，见下也图所示：诉靶标分子溶穴液与天然混除合物溶液分腹别置于由芬关键膜隔离逝的上下两个掌筛选池中，北由于靶标具缓有亲水胶体松的性质始终骗被截留在一惕个摸筛选池缝中，隔离膜福对天然化合棵物小分子保吸持良好的通迎透性。当液牛相多组分天推然药物化学海成分通过膜陆在两个筛选枕池运动时，易基族于生物亲合绝作用，具有杜抗肿瘤活性侦的药物分子骨（v-Sr救c的抑制剂戚）与靶标分鸭子结合形成头神甚疏拍弟图一:靶粗向筛选池淘复合物而被晃截留在装有美靶标分子的杏筛选池中，式其他未发生香亲合作用的挡化合物分子积则呈游离状将态平衡分布店在两个筛选名池中，随后厦运用HPL问C-HRM妖S对要研究萍的化合物组昂分在实施筛绝选前后分别细进行分析，斯获取化学成卫份指纹图谱弊，通过比较钉这两类指纹奖图谱差异后蔽，发现新的土活性成份。勒由于该研究烂中所应用的闸高分辨质谱矩可给出有机炸分子的元素耐组成（分子辽式），而多创极质谱分析卖能给出丰富除的结构信息握，因而我们硬可结合在线或的SCI-鞠finde六r直接获得小所筛选出的李有效成分是铺否拥有新结遥构，本项目素重点关注新蔬型活性成分径研究。对于稳上述途径得域到的一些结朴构复杂的新匠成份，也可余通过半微量猾制备型HP冷LC制备，关经多维高分君辨NMR技侨术（微量探纽头）进行结捉构确定。研究方案夜1这.症靶圆蛋白喂—银v-Src记蛋白的制窝备领克隆v-s域rc全基因俭，在pGE疯X-KT高用效表达质粒枯中诱导表达班，得到GS坝T-Src荡融合蛋白，尾用Glut德aione王Seph阀arose割4B亲和适层析柱进行墙纯化，并采泽用West您ernb踏lot和以脏polyG双lu:Tr嫁y(4:旦1)为底物胜的ELIS暮A法鉴定其周免疫原性和博酪氨酸激酶起活性。（该见实验程序已踪经非常成熟跟，门10天就可节得到足量的熔GST-S采rc融合蛋延白，且该融吨合蛋白具有叮较高的靶标艰蛋白惹v-Src院的免疫原性亩和糟酪氨酸激酶驴活性陡，可以直接侦作为涝靶撞标蛋白黄）。原2．馆药用植物化欺学研究。亦一：关于植动物中富含活典性成份的研抵究与微量成颈分的富集。律恐1）对氏广东石豆兰氏与怜细茎石斛窃等几种植物课根茎析部分粉碎，冤用70%患酒精浸泡提惩取，通过不蜡同极性化学贡溶剂进行化电学部位分段杏，体外抗肿仅瘤药理实验柱获得若干有低效部位。眉2）运用逆付流色谱技术靠，大孔吸附败树脂及正反漠相柱层析对汪有效部位进决行分段分离废，得到一系乞列主要成分庙，运用现代评波谱技术进奉行结构确定与，一般为已艇知化合物。佳3）对上述功分离得到的裳未知结构的骆单体成分进佣行结构确定宴并进行药理例验证。赖4）通过L边H－20凝浓胶柱层析对储上述已经分闯出主要成分窃的有效部位排进行微量成岸分的富集与闯分段，得到门若干含有多伙组分（微量骗成分）部位贫，体外药理高跟踪得到系竞列有效部位霸。溪二：关于植滑物中含量低中微的活性成幻份的快速识颜别研究棍1）制备并莫组装含靶标悼分子的筛选标池，探讨快云速筛选的最膀佳条件。俭2）启以抗肿瘤作喇用确定的天估然化合物如之紫杉醇、肚长春新碱等惹若干已知抗循癌成分攻为对照，赚通过实验考籍察温度、念PH属值、有机溶袄剂、化学计璃量比以及相绢互作用时间岩对靶向筛选番的影响有,勉结合HP亚LC色谱定骨量分析，确网定筛选的最锤佳实验条件补。喜3）纳在上述实验颠的基础上，桨对若干含多锈种微量成分上的有效部位粱进行快速识荐别研究，在字靶向筛选平亮衡后，活性认成分与靶标池结合形成复寇合物而被截移留，未被筛掠选化合物分陵子游离分布宗在两个筛选导池中，应用远HRMS或迟HPLC/悠MS对筛选往前后的天然肚混合物溶液浆制备指纹图衣谱，从指纹倒图谱中发现世差异，可获竖得生物活性村成分的信息毁。沫4）王锁定筛选出移的活性成分桶，通过高分袖辨质谱可提牵供元素组成饭（分子式）饭的功能，结顺合联机数据淋库检索，确寄定新成分；容运用多级质冻谱技术，进坚行新化合物蹈的结构信息勤提取，初步叫鉴定其结构见。程5）刊对在线分析盏并结合检索植确定结构的梯复杂新结构激成分，通过励多次富集并缺结合半微量剑制备，运用即微量探头多桥维NMR测头定其结构。多6）戒运用体外肿肯瘤细胞株培坝养等常规药掩理方法对一铅些具有新颖稿结构的成分窄进行药理验袄证。川图箭二：快速筛无选流程见下庙图：棵图三.抗盒肿瘤活性成呈分靶向快速棒识别技术路勒线如下：靶向筛选前多组分MS或HPLC/MS指纹图谱--I天然来源多组分混合库物削鸽雷劳逼H完PLC/M纪S靶向筛选前多组分MS或HPLC/MS指纹图谱--I天然来源多组分混合库物科冠与候趴或M洁S分析基甩蛋白确定抗肿瘤活性成分给跃靶向劳税岭哗戴摊环积飘豪确定抗肿瘤活性成分掌责筛选扎裁岸魔薄粘枯磁顺松照现卡删鼻滚脏红猛着岂死两比差筛选后多组分化合物库靶向筛选后多组分MS或HPLC/MS指纹图谱--II伙任露蹄HPL箩C/MS斜蛙碎鼻兆较商异筛选后多组分化合物库靶向筛选后多组分MS或HPLC/MS指纹图谱--II嫁模麻段或MS捏分析近自贺止存进度安排清本项目拟用渣三年时间完偶成各项研究旧任务，预期储进展情况如准下：阴1）20穴07.1~税2007.泛12完问成具体实验建方案设计，刊药用植物的皱采集，有效锁部位的提取眠分段，微量铃有效成分部皱位的制备。骗2）20到08.1~饥2023.合6完成畅各种药用植迅物中富含化法学成份的分巴离提取与结漫构确定，同素时建立微量问或超微量抗母肿瘤有效成寸份的快速识右别的试验方留法；完成多现种的微量抗风肿瘤活性成粥份的快速实病验。本3）20烂09.6~具2023.闸12归图纳，整理，灾分析总结并燃提交研究论摩文与总结报吃告。侦5、项目创秤新之处劫肃关于天吹然来源的有细效成分的研属究,国内伙外研究人员落通常还是采纵用常规的植沃物化学研究务途径结合离必线的活性实破验；今年来贱在分离材料勒、高灵敏度短色谱制备手须段上进行大遮量的探索，穿对于一些微床量成分的研蔑究，目前尚掀无通用的方险法，只有采涨用较为经典材的多次制备踪的途径,箱与活性衔接漆也是较难的电,因而本岗项目拟以v啦-Src封蛋白作为靶闸蛋白，基于觉该靶标与抗谈肿瘤活性分扑子的相互作结用进行中草笼药中抗肿瘤笼活性成分的与靶向筛选，污结合高分辨拖质谱及其联蒜用技术对上节述筛选出的用成分进行在诊线分离分析殃与鉴定，其茫创新之处在跪于：述(1)靶牢蛋白对药物聪分子的靶向关筛选以及高迫分辨质谱分惊析均是极其扶灵敏的途径森，该方法适研用于微量或嫁超微量生物沫活性成分的负分析研究，亮为从天然来挂源（药用植击物）中发现脉一些含量低怎微的抗肿瘤演活性成分提究供新手段，忠该研究未见岭文献报道，仪丰富了有机霉与生物分析幕的理论内容检。奖（2）本项虫目关于生物捕活性成分的茧靶向筛选与抱分析鉴定可户在线一体化穗实施，丰富幸了天然有机更（药物）化燃学研究方法叛，可大大提矛高了天然有握机化学及药张物化学研究蜜工作的效率诞。寇（3）靶标宾与抗肿瘤活墙性分子的相狱互作用用于登中草药（药剥用植物）中仁微量的抗肿烧瘤活性物质爸的靶向筛选秃，可发展成凭为一种分子列水平上的微揭量或超微量宴分离途径，仍该研究无疑田为分离科学蹲增添了新的惕内容。字（4）本项拿目重点进行求多种药用植未物中微量成批分的研究，凡以发现大量桂的拥有新结轮构的生物活汗性成分，该讲研究可大大买丰富抗癌药只物先导的源避泉（为药物侦合成提供靶血标）从而为燥创制新药奠诚定良好基础缩。迹（5）上述管途径也可适铸用于其他天烛然来源生物绢活性微量成串分的快速识碑别.察6、工作基跪础与工作条痕件级1）本项目闹申请人自哄1988斯年以来一直逗从事具有生闪物活性天然围有机化合物坑的分离提取但、结构鉴定探研究，迄今剥已分离出8主0娇多个新化合相物，在国际独知名专业学冰术期刊等上袖发表了多篇亩论文，在探喂索与发展天仰然药物有效隐成份分离新块技术，进行搬一系列研究执工作，开展言了新的逆流寇色谱仪技术产的开发与应脸用工作，申疼报专利两项疏，在《Jo允urnal寄ofC腊hroma盯togra碍phyA储》发表论文傅多篇，在发蹦展生物活性糖分子质谱分演析研究领域厘，进行了一圣系列的探索取工作，分别徐在《Ana听lytic立aChi舌m.Act利a》等杂志朽上发表论文膛多篇；在发城展与建立生岩物活性分子屡在线分离分滔析新途径方塌面，在《A本nalyt抛ical忧Bioch趁emist振ry仆》等杂志上略发表论文多板篇；同时课栗题组也开展纸药物合成的愿一些研究工欢作，迄今已唱在《Org铲anic疼Lette尘rs》发表让论文3篇；效在新的蛋白料靶标，与从玉事生命科学租研究的相关评课题组开展灭了合作研究怖，并于20爪06年在国顶际著名杂志抖《Jour春nalo赠fBio春logic供alCh陵emist支ry》发表槽论文一篇。耽总之，围绕查药物化学研墨究，本课题鸟组已发表学俯术论文12校0余篇，其送中SCI收脱录100余舰篇，申报专爽利6项，获容批2项，其虫研究成果共趴获省部级及界其他部门科耗技奖三项。缠（小2鼻）课题申请久者近几年来具负责承担了算的三项国家喷自然科学基斥金项目，其湿中两项课题某“签亲合超滤-德质谱分析在撒天然来源抗概肿瘤活性成先分快速筛选酷中的应用窃”饮与朱“斧质谱在天然永来源抗肿瘤骗活性成分靶左向筛选中应镜用蛇”另分别以曲拓扑异构酶马以及微管蛋南白等作为靶烟标分子，对泉一些抗肿瘤伪活性的物质归进行了筛选哗分析研衬究，取得的索结果可为本侄课题的实施号提供有益的衔经验，部分培方法也可借泡用。鸡由于酶与微效管蛋白制备拌相对困难，常活性保持也死有一定的限尿制，本项目昌基因工程获穴得的v-S提rc蛋白芒作为靶分子