分子生物学试题-2023修改整理

千里之行，始于足下让知识带有温度。第第2页/共2页精品文档推荐分子生物学试题分子生物学试题

一、名词解释

1、基因：能够表达和产生蛋白质和RNA的DNA序列，是打算遗传性状的功能单位。

2、基因组：细胞或生物体的一套完整单倍体的遗传物质的总和。

3、端粒：以线性染色体形式存在的真核基因组DNA末端都有一种特别的结构叫端粒。该结构是一段DNA序列和蛋白质形成的一种复合体，仅在真核细胞染色体末端存在。

4、操纵子：是指数个功能上相关的结构基因串联在一起，构成信息区，连同其上游的调控区（包括启动子和操纵基因）以及下游的转录终止信号所构成的基因表达单位，所转录的RNA

为多顺反子。

5、顺式作用元件：是指那些与结构基因表达调控相关、能够被基因调控蛋白特异性识别和结合的特异DNA序列。包括启动子、上游启动子元件、增加子、加尾信号和一些反应元件等。

6、反式作用因子：是指真核细胞内含有的大量可以通过直接或间接结合顺式作用元件而调整基因转录活性的蛋白质因子。

7、启动子：是RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列。

8、增加子：位于真核基因中远离转录起始点，能显然增加启动子转录效率的特别DNA序列。它可位于被增加的转录基因的上游或下游，也可相距靶基因较远。

9、基因表达：是指生物基因组中结构基因所携带的遗传信息经过转录、翻译等一系列过程，合成特定的蛋白质，进而发挥其特定的生物学功能和生物学效应的全过程。

10、信息分子：调整细胞生命活动的化学物质。其中由细胞分泌的调整靶细胞生命活动的化学物质称为细胞间信息分子；而在细胞内传递信息调控信号的化学物质称为细胞内信息分子。11、受体：是存在于靶细胞膜上或细胞内能特异识别生物活性分子并与之结合，进而发生生物学效应的的特别蛋白质。

12、分子克隆：在体外对DNA分子根据即定目的和计划举行人工重组，将重组分子导入合适宿主，使其在宿主中扩增和繁殖，以获得该DNA分子的大量拷贝。

13、蛋白激酶：是指能够将磷酸集团从磷酸供体分子转移到底物蛋白的氨基酸受体上的一大类酶。

14、蛋白磷酸酶：是具有催化已经磷酸化的蛋白质分子发生去磷酸化反应的一类酶分子，与蛋白激酶相对应存在，共同构成了磷酸化和去磷酸化这一重要的蛋白质活性的开关系统。

15、基因工程：有目的的通过分子克隆技术，人为的操作改造基因，转变生物遗传性状的系列过程。

16、载体：能在衔接酶的作用下和外源DNA片段衔接并运送DNA分子进入受体细胞的DNA

分子。

17、转化：指质粒DNA或以它为载体构建的重组DNA导入细菌的过程。

18、感染：以噬菌体、粘性质粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA分子，在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒，才干感染适当的细胞，并在细胞内扩增。

19、转导：指以噬菌体为载体，在细菌之间转移DNA的过程，有时也指在真核细胞之间通过逆转录病毒转移和获得细胞DNA的过程。

20、转染：指病毒或以它为载体构建的重组子导入真核细胞的过程。

21、DNA变性：在物理或化学因素的作用下，导致两条DNA链之间的氢键断裂，而核酸分子中的全部共价键则不受影响。

22、DNA复性：当促使变性的因素解除后，两条DNA链又可以通过碱基互补配对结合形成DNA双螺旋结构。

23、退火：指将温度降至引物的TM值左右或以下，引物与DNA摸板互补区域结合形成杂交

链。

24、筑巢PCR：先用一对外侧引物扩增含目的基因的大片段，再用内侧引物以大片段为摸板扩增猎取目的基因。可以提高PCR的效率和特异性。

25、原位PCR：以组织固定处理细胞内的DNA或RNA作为靶序列，举行PCR反应的过程。

26、定量PCR：基因表达涉及的转录水平的讨论常需要对mRNA举行定量测定，对此采纳的PCR技术就叫定量PCR。

27、基因打靶：是指通过DNA定点同源重组，转变基因组中的某一特定基因，从而在生物活体内讨论此基因的功能。

28、DNA芯片：DNA芯片技术是指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接将大量的DNA探针以显微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后与标记的样品杂交，通过对杂交信号的检测分析，即可获得样品的遗传信息。因为常用计算机硅芯片作为固相支持物，所以称为DNA芯片。

29、错义突变：DNA分子中碱基对的取代，使得mRNA的某一密码子发生变化，由它所编码的氨基酸就变成另一种的氨基酸，使得多肽链中的氨基酸挨次也相应的发生转变的突变。

30、无义突变：因为碱基对的取代，使本来可以翻译某种氨基酸的密码子变成了终止密码子的突变。

31、同义突变：碱基对的取代并不都是引起错义突变和翻译终止，有时虽然有碱基被取代，但在蛋白质水平上没有引起变化，氨基酸没有被取代，这是由于突变后的密码子和本来的密码子代表同一个氨基酸的突变。

32、移码突变：在编码序列中，单个碱基、数个碱基的缺失或插入以及片段的缺失或插入等均可以使突变位点之后的三联体密码阅读框发生转变，不能编码本来的蛋白质的突变。

33、癌基因：是细胞内控制细胞生长的基因，具有潜在的诱导细胞恶性转化的特性。当癌基因结构或表达发生异样时，其产物可使细胞无限制增殖，导致肿瘤的发生。包括病毒癌基因和细胞癌基因。

34、细胞癌基因：存在于正常的细胞基因组中，与病毒癌基因有同源序列，具有促进正常细胞生长、增殖、分化和发育等生理功能。在正常细胞内未激活的细胞癌基因叫原癌基因，当其受到某些条件激活时，结构和表达发生异样，能使细胞发生恶性转化。

35、病毒癌基因：存在于病毒（大多是逆转录病毒）基因组中能使靶细胞发生恶性转化的基因。它不编码病毒结构成分，对病毒无复制作用，但是当受到外界的条件激活时可产生诱导肿瘤发生的作用。

36、基因诊断：以DNA或RNA为诊断材料，通过检查基因的存在、结构缺陷或表达异样，对人体的状态和疾病作出诊断的办法和过程。

37、RFLP：即限制性片段长度多态性，个体之间DNA的核苷酸序列存在差异，称为DNA多态性。若因此而转变了限制性内切酶的酶切位点则可导致相应的限制性片段的长度和数量发生变化，称为RFLP。

38、基因治疗：普通是指将限定的遗传物质转入患者特定的靶细胞，以终于达到预防或转变特别疾病状态为目的治疗办法。

39、反义RNA：碱基序列正巧与故意义的mRNA互补的RNA称为反义RNA。可以作为一种调控特定基因表达的手段。

40、核酶：是一种可以催化RNA切割和RNA剪接反应的由RNA组成的酶，可以作为基因表达和病毒复制的抑制剂。

34、细胞癌基因：存在于正常的细胞基因组中，与病毒癌基因有同源序列，具有促进正常细胞生长、增殖、分化和发育等生理功能。在正常细胞内未激活的细胞癌基因叫原癌基因，当其受到某些条件激活时，结构和表达发生异样，能使细胞发生恶性转化。

35、病毒癌基因：存在于病毒（大多是逆转录病毒）基因组中能使靶细胞发生恶性转化的基

因。它不编码病毒结构成分，对病毒无复制作用，但是当受到外界的条件激活时可产生诱导肿瘤发生的作用。

36、基因诊断：以DNA或RNA为诊断材料，通过检查基因的存在、结构缺陷或表达异样，对人体的状态和疾病作出诊断的办法和过程。

37、RFLP：即限制性片段长度多态性，个体之间DNA的核苷酸序列存在差异，称为DNA多态性。若因此而转变了限制性内切酶的酶切位点则可导致相应的限制性片段的长度和数量发生变化，称为RFLP。

38、基因治疗：普通是指将限定的遗传物质转入患者特定的靶细胞，以终于达到预防或转变特别疾病状态为目的治疗办法。

39、反义RNA：碱基序列正巧与故意义的mRNA互补的RNA称为反义RNA。可以作为一种调控特定基因表达的手段。

40、核酶：是一种可以催化RNA切割和RNA剪接反应的由RNA组成的酶，可以作为基因表达和病毒复制的抑制剂。

41、三链DNA：当某一DNA或RNA寡核苷酸与DNA高嘌呤区可结合形成三链，能特异地结合在DNA的大沟中，并与富含嘌呤链上的碱基形成氢键。

42、SSCP：单链构象多态性检测是一种基于DNA构象差别来检测点突变的办法。相同长度的单链DNA，假如碱基序列不同，形成的构象就不同，这样就形成了单链构象多态性。

43、管家基因：在生物体生命的全过程都是必需的，且在一个生物个体的几乎全部细胞中持续表达的基因。

44、细胞全能性：指同一种生物的全部细胞都含有相同的DNA，即基因的数目和种类是一样的，但在不同阶段，同一个体的不同组织和器官中基因表达的种类和数目是不同的。

45、SD序列：转录出的mRNA要进入核糖体上举行翻译，需要一段富含嘌呤的核苷酸序列与大肠杆菌16SrRNA3，末端富含嘧啶的序列互补，是核糖体的识别位点。

46、反义核酸技术：是通过合成一种短链且与DNA或RNA互补的，以DNA或RNA为目标抑制翻译的反义分子，干扰目的基因的转录、剪接、转运、翻译等过程的技术。

47、核酸探针：探针是指能与某种大分子发生特异性互相作用，并在互相作用之后可以检测出来的生物大分子。核酸探针是指能识别特异碱基挨次的带有标记的一段DNA或RNA分子。48、周期蛋白：是一类呈细胞周期特异性或时相性表达、累积与分解的蛋白质，它与周期素依靠性激酶共同影响细胞周期的运行。

49、CAP：是大肠杆菌分解代谢物基因活化蛋白，这种蛋白可将葡萄糖饥饿信号传递个许多操纵子，使细菌在缺乏葡萄糖时可以利用其他碳源。

50、顺反子

51、结构域

二、问答题

（一）、病毒、原核、真核基因组的特点？

答：1、病毒基因组的特点：

①种类单一；②单倍体基因组：每个基因组在病毒中只浮现一次；③形式多样；④大小不一；

⑤基因重叠；⑥动物/细菌病毒与真核/原核基因相像：内含子；⑦具有不规章的结构基因；⑧基因编码区无间隔：通过宿主及病毒本身酶切；⑨无帽状结构；⑩结构基因没有翻译起始序列。

2、原核基因组的特点：

①为一条环状双链DNA；②惟独一个复制起点；③具有操纵子结构；④绝大部分为单拷贝；⑤可表达基因约50%，大于真核生物小于病毒；⑥基因普通是延续的，无内含子；⑦重复序列很少。

3、真核基因组的特点：

①真核生物基因组远大于原核生物基因组，结构复杂，基因数浩大，具有多个复制起点；②基因

组DNA与蛋白质结合成染色体，储存于细胞核内；③真核基由于单顺反子，而细菌和病毒的结构基因多为多顺反子；④基因组中非编码区多于编码区；⑤真核基因多为不延续的断裂基因，由外显子和内含子镶嵌而成；⑥存在大量的重复序列；⑦功能相关的基因构成各种基因家族；⑧存在可移动的遗传因素；⑨体细胞为双倍体，而精子和卵子为单倍体。

（二）、乳糖操纵子的作用机制？

答：1、乳糖操纵子的组成：大肠杆菌乳糖操纵子含Z、Y、A三个结构基因，分离编码半乳糖苷酶、透酶和半乳糖苷乙酰转移酶，此外还有一个操纵序列O，一个启动子P和一个调整基因I。

2、阻遏蛋白的负性调整：没有乳糖存在时，I基因编码的阻遏蛋白结合于操纵序列O处，乳糖操纵子处于阻遏状态，不能合成分解乳糖的三种酶；有乳糖存在时，乳糖作为诱导物诱导阻遏蛋白变构，不能结合于操纵序列，乳糖操纵子被诱导开放合成分解乳糖的三种酶。所以，乳糖操纵子的这种调控机制为可诱导的负调控。

3、CAP的正性调整：在启动子上游有CAP结合位点，当大肠杆菌从以葡萄糖为碳源的环境改变为以乳糖为碳源的环境时，cAMP浓度上升，与CAP结合，使CAP发生变构，CAP结合于乳糖操纵子启动序列附近的CAP结合位点，激活RNA聚合酶活性，促进结构基因转录，调整蛋白结合于操纵子后促进结构基因的转录，对乳糖操纵子采取正调控，加速合成分解乳糖的三种酶。

4、协调调整：乳糖操纵子中的I基因编码的阻遏蛋白的负调控与CAP的正调控两种机制，相互协调、相互制约。

（三）、真核生物转录水平的调控机制？

答：真核生物在转录水平的调控主要是通过反式作用因子、顺式作用元件和RNA聚合酶的互相作用来完成的，主要是反式作用因子结合顺式作用元件后影响转录起始复合物的形成过程。

1、转录起始复合物的形成：真核生物RNA聚合酶识别的是由通用转录因子与DNA形成的蛋白质-DNA复合物，惟独当一个或多个转录因子结合到DNA上，形成有功能的启动子，才干被RNA聚合酶所识别并结合。

转录起始复合物的形成过程为：TFⅡD结合TATA盒；RNA聚合酶识别并结合TFⅡD-DNA复合物形成一个闭合的复合物；其他转录因子与RNA聚合酶结合形成一个开放复合物。

在这个过程中，反式作用因子的作用是：促进或抑制TFⅡD与TATA盒结合；促进或抑制RNA聚合酶与TFⅡD-DNA复合物的结合；促进或抑制转录起始复合物的形成。

2、反式作用因子：普通具有三个功能域（DNA识别结合域、转录活性域和结合其他蛋白结合域）；能识别并结合上游调控区中的顺式作用元件；对基因的表达有正性或负性调控作用。

3、转录起始的调控：

⑴反式作用因子的活性调整：①表达式调整——反式作用因子合成出来就具有活性；②共价修饰——磷酸化和去磷酸化，糖基化；③配体结合——许多激素受体是反式作用因子；④蛋白质与蛋白质互相作用——蛋白质与蛋白质复合物的解离与形成。

⑵反式作用因子与顺式作用元件的结合：反式作用因子被激活后，即可识别并结合上游启动子元件和增加子中的保守性序列，对基因转录起调整作用。

⑶反式作用因子的作用方式——成环、扭曲、滑动、Oozing。

⑷反式作用因子的组合式调控作用：每一种反式作用因子结合顺式作用元件后虽然可以发挥促进或抑制作用，但反式作用因子对基因调控不是由单一因子完成的而是几种因子组合发挥特定的作用。

（四）、真核生物转录后水平的调控机制？

答：（1）、5，端加帽和3，端多聚腺苷酸化的调控意义：5，端加帽和3，端多聚腺苷酸化是保持mRNA稳定的一个重要因素，它至少保证mRNA在转录过程中不被降解。

（2）、mRNA挑选性剪接对基因表达调控的作用

（3）、mRNA运输的控制

（五）、受体的特点？

答：1、高度专一性；2、高度亲和性；3、可逆性；4、可饱和性；5、特定的作用模式

（六）、表皮生长因子介导的信号传导途径？

答：表皮生长因子受体是一个典型的蛋白酪氨酸激酶受体，这个信号转导途径的主要步骤是：1、受体二聚化的形成及其磷酸化：表皮生长因子与受体的结合使受体发生二聚化，从而转变受体构象，使蛋白酪氨酸激酶活性增加，受体自身的几个蛋白酪氨酸残基在激酶的作用下发生磷酸化。

2、募集接头蛋白Grb2：表皮生长因子受体自身被磷酸化后，不仅其激酶活性增加，而且其构象发生变化，从而适合与含SH2结构域的蛋白分子相结合。Grb2是作为接头蛋白结合到受体上。

3、调控分子SOS的活化：SOS含有可与SH3结构域相结合的富含脯氨酸基序，当Grb2结合到磷酸化的表皮生长因子受体后，它的两个SH3结构域即可结合SOS，使之活化。

4、低分子量G蛋白Ras的活化：SOS可促进Ras释放GDP，结合GTP的反应，使Ras激活。活化的Ras作用其下游分子Raf，使之活化。Raf是MAPK级联反应的第一个分子，由此启动了MAPK的三级激活过程。

5、MAPK的级联激活：Raf是一种MAPKKK，它作用于MEK，使之磷酸化而激活，活化的MEK在作用于MAPK家族的ERK1，使之磷酸化激活由此完成了三级激活。

6、转录因子的磷酸化及转录调控作用：活化的ERK可以转至细胞核内，使某些转录调控因子发生磷酸化，从而影响基因的转录。

（七）、cAMP信号转导途径？

答：1、组成：胞外信息分子（主要是胰高血糖素、肾上腺素和促肾上腺皮质激素），受体，G蛋白，AC，cAMP,PKA。

2、途径：

?信号分子与受体结合，引起受体构象变化

?受体活化G蛋白

?活化后的G蛋白激活腺苷酸环化酶（AC）

?AC催化ATP生成cAMP

?cAMP活化PKA，PKA使目标蛋白磷酸化，调整代谢酶的活性或调整基因的表达

（八）、IP3-Ca2+信号途径：

?信号分子与受体结合，引起受体构象变化

?受体活化G蛋白

?活化后的G蛋白激活PLC

?PLC水解PIP2生成IP3和DG

?IP3使钙通道打开，细胞内Ca2+上升

?Ca2+与CaM结合，激活Ca2+-CaM依靠的蛋白激酶

?Ca2+-CaM依靠的蛋白激酶使目标蛋白磷酸化。

（九）、分子克隆中常用的工具酶及良好载体的条件？

答：（1）、常用的工具酶

1、限制性核酸内切酶：是细菌产生的一类能识别和切割双链DNA分子内特定的碱基挨次的核酸水解酶。

2、DNA衔接酶：将两段DNA分子拼接起来的酶。

3、DNA聚合酶：催化单核苷酸链延长。

4、逆转录酶：依靠于RNA的DNA聚合酶，这是一种有效的转录RNA成为DNA的酶，产物DNA又称互补DNA。

5、末端脱氧核糖核酸转移酶：将脱氧核糖核酸加到DNA的3末端。

6、碱性磷酸酶：催化去除DNA、RNA等的5磷酸基团。

7、依靠DNA的RNA聚合酶：识别特异性启动子，RNA转录。

（2）、良好载体的条件

1、必需有自身的复制子；

2、载体分子上必需有限制性核酸内切酶的酶切位点，即多克隆位点，以供外源DNA插入；

3、载体应具有可供挑选的遗传标志，以区分阳性重组子和阴性重组子；

4、载体分子必需有足够的容量；

5、可通过特定的办法导入细胞；

6、对于表达载体还应具备与宿主细胞相适应的启动子、前导挨次、增加子、加尾信号等DNA调控元件。

（十）、蓝-白筛选的原理？

答：某些质粒带有大肠杆菌的半乳糖苷酶基因片段，在半乳糖苷酶基因的基因区外又另外引入了一段含多种单一限制酶位点的DNA序列。这些位点上假如没有克隆外源性DNA片段，在质粒被导入lac-的大肠杆菌后，质粒携带的半乳糖苷酶基因将正常表达，与大肠杆菌的半乳糖苷酶基因互补，产生有活性的半乳糖苷酶，加入人工底物X-gal和诱导剂IPTG后，浮现蓝色的菌落。假如在多克隆位点上插入外源DNA片段，将使lacZ基因灭活，不能生成半乳糖苷酶，结果菌落浮现白色。因为这种色彩标志，重组克隆和非重组克隆的区别一目了然。

十一）SANGER双脱氧链终止法的原理？

答：DNA链中核苷酸以3’,5’-磷酸二酯键衔接，合成DNA所用的底物是2’-脱氧核苷三磷酸。2’,3’ddNTP与一般dNTP不同，它们在脱氧核糖的3’位置缺少一个羟基。在DNA聚合酶作用下通过三磷酸基团掺入到延长的DNA链中，但因为没有3’羟基，不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键，因此，正在延长的DNA链不能继续延长。在DNA合成反应混合物的4种一般dNTP中加入少量的一种ddNTP，链延长将与偶然发生但却非常特异的链终止竞争，产物是一系列的核苷酸链，其长度取决于引物末端到浮现过早链终止位置间的距离。在4组自立酶反应中分离采纳4

种不同的ddNTP，结果将产生4组寡核苷酸，它们将分离终止于模板链的A、C、G或T位置。（十二）、核酸分子杂交的原理？

答：具有互补序列的两条单链核酸分子在一定的条件下（相宜的温度及离子强度等）碱基互补配对结合，重新形成双链；在这一过程中，核酸分子经受了变性和复性的变化，以及在复性过程中个分子间键的形成和断裂。杂交的双方是待测核酸和已知序列。

（十三）、影响杂交的因素？

答：1、核酸分子的浓度和长度：核酸浓度越大，复性速度越快。探针长度应控制在50-300个碱基对为好。

2、温度：温度过高不利于复性，而温度过低，少数碱基配对形成的局部双链不易解离，相宜的温度是较TM值低25度。

3、离子强度：在低离子强度下，核酸杂交十分缓慢，随着离子强度的增强，杂交反应率增强。高浓度的盐使碱基错配的杂交体更稳定，所以举行序列不彻低同源的核酸分子杂交时必需维持杂交反应液中的盐浓度和洗膜液中的盐浓度。

4、杂交液中的甲酰胺：甲酰胺能降低核酸杂交的TM值。它有以下优点：在低温下探针更稳定；能更好地保留非共价结合的核酸。

5、核酸分子的复杂性：是指存在于反应体系中的不同挨次的总长度。两个不同基因组DNA变性后的相对杂交速率取决于样品浓度肯定全都时的相对复杂性（即DNA中的碱基数）。

6、非特异性杂交反应：在杂交前应对非特异性杂交反应位点举行封闭，以削减其对探针的非特异性吸附作用。

（十四）、探针的种类和优缺点？

答：1、cDNA探针：通过逆转录获得cDNA后，将其克隆于适当的克隆载体，通过扩增重组质粒而使cDNA得到大量的扩增。提取质粒后分别纯化作为探针使用。它是目前应用最为广泛的一种

探针。

2、基因组探针：从基因组文库里筛选得到一个特定的基因或基因片段的克隆后，大量扩增、纯化，切取插入片段，分别纯化为探针。

3、寡核苷酸探针：按照已知的核酸挨次，采纳DNA合成仪合成一定长度的寡核苷酸片段作为探针。

4、RNA探针：采纳基因克隆和体外转录的办法可以得到RNA或反义RNA作为探针。

（十五）、探针的标记法？

答：1、缺口平移法：此法是利用适当浓度的DNaseⅠ在DNA双链上随机切割单链，造成单链切口。切口处产生一个5末端和3末端，3末端就可以作为引物，在大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的催化下，以互补的DNA单链为摸板，依次将dNTP衔接到切口的3末端的羟基上，合成新的DNA单链；同时DNA聚合酶Ⅰ的5→3的核酸外切酶活性在切口处将旧链从5末端逐步切除，新合成链不断延长，从而使原DNA分子上的部分核苷酸残基被标记的核苷酸所取代。

2、随机引物法：随机引物是人工合成的长度为6个寡核苷酸残基的寡聚核苷酸片段的混合物。对于任何一个用作探针的DNA片段，随机引物混合物中都会有一些六核苷酸片段可以与之结合，起到DNA合成引物的作用。将这些引物与变性的DNA单链结合后，以4种dNTP（其中一种是标记物标记的dNTP）为底物，合成与探针DNA互补的切带有标记物的DNA探针。

3、PCR标记法：在PCR反应底物中，将一种dNTP换成标记物标记的dNTP，这样标记的dNTP

就在PCR反应的同时掺入到新合成的DNA链上。

4、末端标记法：只是将DNA片段的一端举行标记。

（十六）、PCR的基本原理？

答：PCR是在试管中举行的DNA复制反应，基本原理是依据细胞内DNA半保留复制的机理，以及体外DNA分子于不同温度下双链和单链可以相互改变的性质，人为地控制体外合成系统的温度，以促使双链DNA变成单链，单链DNA与人工合成的引物退火，然后耐热DNA聚合酶以dNTP为原料使引物沿着单链模板延长为双链DNA。PCR全过程每一步的转换是通过温度的转变来控制的。需要重复举行DNA模板解链、引物与模板DNA结合、DNA聚合酶催化新生DNA的合成，即高温变性、低温退火、中温延长３个步骤构成PCR反应的一个循环，此循环的反复举行，就可使目的DNA得以快速扩增。DNA模板变性：模板双链DNA?单链DNA，94℃。退火：引物＋单链DNA?杂交链，引物的Tm值。引物的延长：温度至70℃左右，TaqDNA聚合酶以４种dNTP为原料，以目的DNA为模板，催化以引物３’末端为起点的5’→3’DNA链延长反应，形成新生DNA链。新合成的引物延长链经过变性后又可作为下一轮循环反应的模板PCR，就是如此反复循环，使目的DNA得到高效迅速扩增。

（十七）、PCR引物设计的基本要求？

答：1、引物长度普通为15～30个核苷酸。过短影响PCR的特异性，过长会提高相应退火温度，使延长温度超过TaqDNA聚合酶最适温度74℃,影响产物的生成。

2、引物的碱基尽可能随机，避开浮现嘌呤、嘧啶碱基积累现象。3’端不应有延续3个G和C。否则会使引物和模板错误配对。G+C含量普通占45％-55％。3’端和5’端引物具有相像的Tm值,Tm值计算公式：Tm＝4(G+C)+2(A+T)

3、引物自身不应存在互补序列以避开折叠成发夹结构。引物的延续互补序列，普通不超过3bp。

4、两个引物之间不应存在互补序列，尤其应避开3’端的互补重叠。

5、引物与非特异扩增区的序列的同源性不超过70％，引物3’末端延续8个碱基在待扩增区以外不能有彻低互补序列，否则易导致非特异性扩增。

6、引物3’端碱基是引发延长的起点，因此一定要与模板DNA配对。引物3’端最佳碱基挑选是G和C，形成的碱基配对照较稳定。

7、引物与模板结合时，引物的5’端最多可以游离十几个碱基而不影响PCR反应的举行。

8、引物的5’端可以修饰，如附加限制酶位点，引入突变位点，用生物素、荧光物质、地高辛标记，加入其它短序列包括起始密码子、终止密码子等

（十八）、PCR的反应条件？

答：1、PCR反应的缓冲液：

?Tris-HCl缓冲液

?KCl促进引物的退火，浓度太高时会抑制TaqDNA聚合酶活性。

?加入BSA或明胶有利于庇护TaqDNA聚合酶活性。

?须要时加入适量二甲基亚砜(DMSO)或甲酰胺利于破坏模板二级结构，提高PCR反应特异性。

2、镁离子浓度普通用量1.5-2.0mmol/L，TaqDNA聚合酶活性需要Mg2+。Mg2+浓度过低，会显著降低酶活性。Mg2+浓度过高又使酶催化非特异性扩增增加。Mg2+浓度还会影响引物的退火、模板与PCR产物的解链温度，从而影响扩增片段的产率。

3、底物浓度工作浓度20-200umol/L，dNTPs浓度过高可加快反应速度，也增强碱基的错配率和试验成本。降低浓度会导致反应速度下降，可提高反应的特异性。在PCR反应中，4种dNTP必需以等摩尔浓度配制，以削减PCR反应的错配误差并提高使用效率。

4、TaqDNA聚合酶75-80℃时具有最高的聚合酶活性，150个核苷酸/秒；具有良好的热稳定性，95℃仍有活性，应用浓度普通为1-2.5u/100ul反应体积。

5、引物0.1-0.5umol/L。引物浓度偏高会引起错配或非特异性扩增、生成引物二聚体，使目的DNA片段产率下降。退火温度与引物Tm值有关，引物Tm值在55-80℃范围较为抱负。

6、反应温度和循环次数

（十九）、影响大肠杆菌系统外源基因表达的因素？

答：1、启动子的强弱；2、基因的剂量；3、影响RNA转录和翻译效率的因素：SD序列、mRNA；

4、外源基因密码子的挑选；

5、表达产物的大小；

6、表达产物的稳定性。

（二十）、大肠杆菌系统表达外源基因必需具备的条件？

答：1、要求外源基因的编码区不能含有内含子；

2、表达的外源片段要位于大肠杆菌启动子的下游，并形成正确的阅读框架；

3、转录出的mRNA必需有与大肠杆菌16SrRNA3，末端相匹配的SD序列，才干被有效的翻译成蛋白质。

4、蛋白产物必需稳定，不易被细胞内蛋白酶迅速降解，且对宿主无害。

（二十一）、真核细胞表达外源基因的条件？

答：1、首先必需具备哺乳动物细胞表达的功能元件。要求哺乳动物细胞表达载体带有能在真核细胞中表达外源基因的真核转录调控元件；

2、注重挑选转染的受体细胞，不同类型的细胞具有不同的特性；

3、注重挑选适当的挑选标记。

（二十二）、转基因动物的概念、原理及应用？

答：1、概念：是指用人工办法将外源基因导入或整合到基因组内，并能稳定传代的一类动物。它的特点是“分子及细胞水平操作，组织及动物整体水平表达”。

2、基本原理：将目的基因或基因组片段用显微注射等办法注入试验动物的受精卵或着床前的胚胎细胞中，使目的基因整合到基因组中，然后将此受精卵或着床前的胚胎细胞再植入受体动物的输卵管或子宫中，使其发育成携带有外源基因的转基因动物，人们可以通过分析转基因和动物表型的关系，揭示外源基因的功能；也可以通过转入外源基因哺育优良的动物品种。

3、应用：建立用于讨论外源基因表达调控体系；建立医学中常用的疾病模型；哺育动物新品种；药理学和药用蛋白的生产讨论。

（二十三）、基因敲除的基本程序？

答：通过DNA同源重组，使得胚胎干细胞特定的内源基因被破坏而造胜利能丧失，然后通过胚胎

干细胞介导得到该基因丧失的小鼠模型的过程称为基因敲除。

1、打靶载体的构建：同源序列要足够长，要含有筛选用的标志基因。

2、胚胎干细胞的体外培养

3、打靶载体导入胚胎干细胞

4、同源重组胚胎干细胞的筛选

5、基因敲除胚胎干细胞注射入胚泡

6、胚泡植入假孕小鼠的子宫中

7、杂交育种获得纯合的基因敲除动物

（二十四）、DNA芯片的原理？

答：DNA芯片技术就是一种大规模的集成的固相核酸分子杂交，以大量已知碱基序列的寡核苷酸片段为探针，检测样品中哪些核酸序列与其互补，然后通过定性定量分析得出待测样品的基因序列及表达的信息。其办法包括芯片的制备、样品的预备、分子杂交和检测分子。

（二十五）、诱变剂的作用机制？

答：1、碱基的类似物诱发突变

2、转变DNA的化学结构

3、结合到DNA分子上诱发移码突变

4、紫外线及其他射线引起的DNA分子的变化

（二十六）、突变类型及其遗传效应？

答：1、突变类型：

①点突变：DNA大分子上一个碱基的变异。分为转换和颠换。

②缺失：一个碱基或一段核苷酸链从DNA大分子上消逝。

③插入：一个本来没有的碱基或一段本来没有的核苷酸链插入到DNA大分子中间。

④倒位：DNA链内重组，使其中一段方向倒置。

2、突变的遗传效应：

①遗传密码的转变：错义突变、无义突变、同义突变、移码突变

②对mRNA剪接的影响：一是使本来的剪接位点消逝；二是产生新的剪接位点。

③蛋白质肽链中的片段缺失：

（二十七）、基因治疗的策略？

答：1、基因置换或称基因矫正：特定的目的基因导入特定的细胞，通过定位重组，让导入的正常基因置换基因组内原有的缺陷基因，不涉及基因组的任何转变。

分子生物学试题及答案

一、名词解释

1．cDNA与cccDNA：cDNA是由mRNA通过反转录酶合成的双链DNA；cccDNA是游离于染色体之外的质粒双链闭合环形DNA。

2．标准折叠单位：蛋白质二级结构单元α－螺旋与β－折叠通过各种衔接多肽可以组成特别几何罗列的结构块，此种确定的折叠类型通常称为超二级结构。几乎全部的三级结构都可以用这些折叠类型，乃至他们的组合型来予以描述，因此又将其称为标准折叠单位。

3．CAP：环腺苷酸（cAMP）受体蛋白CRP（cAMPreceptorprotein），cAMP与CRP结合后所形成的复合物称激活蛋白CAP（cAMPactivatedprotein）

4．回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互补序列，常是限制性酶切位点。

5．micRNA：互补干扰RNA或称反义RNA，与mRNA序列互补，可抑制mRNA的翻译。6．核酶：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工过程中起到自我催化的作用。

7．模体：蛋白质分子空间结构中存在着某些立体外形和拓扑结构颇为类似的局部区域

8．信号肽：在蛋白质合成过程中N端有15~36个氨基酸残基的肽段，引导蛋白质的跨膜。9．弱化子：在操纵区与结构基因之间的一段可以终止转录作用的核苷酸序列。

10．魔斑：当细菌生长过程中，碰到氨基酸全面缺乏时，细菌将会产生一个应急反应，停止所有基因的表达。产生这一应急反应的信号是鸟苷四磷酸(ppGpp)和鸟苷五磷酸（pppGpp）。PpGpp与pppGpp的作用不只是一个或几个操纵子，而是影响一大批，所以称他们是超级调控子或称为魔斑。

11．上游启动子元件：是指对启动子的活性起到一种调整作用的DNA序列，-10区的TATA、-35区的TGACA及增加子，弱化子等。

12．DNA探针：是带有标记的一段已知序列DNA，用以检测未知序列、筛选目的基因等方面广泛应用。

13．SD序列：是核糖体与mRNA结合序列，对翻译起到调控作用。

14．单克隆抗体：只针对单一抗原打算簇起作用的抗体。

15．考斯质粒：是经过人工构建的一种外源DNA载体，保留噬菌体两端的COS区，与质粒衔接构成。

16．蓝-白斑筛选：含LacZ基因（编码β半乳糖苷酶）该酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)产生蓝色，从而使菌株变蓝。当外源DNA插入后，LacZ基因不能表达，菌株呈白色，以此来筛选重组细菌。称之为蓝-白斑筛选。

17．顺式作用元件：在DNA中一段特别的碱基序列，对基因的表达起到调控作用的基因元件。18．Klenow酶：DNA聚合酶I大片段，只是从DNA聚合酶I全酶中去除了5’3’外切酶活性19．锚定PCR：用于扩增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分离用多聚dC和已知的序列作为引物举行PCR扩增。

20．融合蛋白：真核蛋白的基因与外源基因衔接，同时表达翻译出的原基因蛋白与外源蛋白结合在一起所组成的蛋白质。

二、填空

1．DNA的物理图谱是DNA分子的（限制性内切酶酶解）片段的罗列挨次。

2．RNA酶的剪切分为（自体催化）、（异体催化）两种类型。

3．原核生物中有三种起始因子分离是（IF-1）、（IF-2）和（IF-3）。

4．蛋白质的跨膜需要（信号肽）的引导，蛋白朋友的作用是（辅助肽链折叠整天然构象的蛋白质）。

5．启动子中的元件通常可以分为两种：（核心启动子元件）和（上游启动子元件）。6．分子生物学的讨论内容主要包含（结构分子生物学）、（基因表达与调控）、（DNA重组技术）三部分。

7．证实DNA是遗传物质的两个关键性试验是（肺炎球菌感染小鼠）、（T2噬菌体感染大肠杆菌）这两个试验中主要的论点证据是：（生物体汲取的外源DNA转变了其遗传潜能）。8．hnRNA与mRNA之间的差别主要有两点：（hnRNA在改变为mRNA的过程中经过剪接，）、（mRNA的5′末端被加上一个m7pGppp帽子，在mRNA3′末端多了一个多聚腺苷酸(polyA)尾巴）。

9．蛋白质多亚基形式的优点是（亚基对DNA的利用来说是一种经济的办法）、（可以削减蛋白质合成过程中随机的错误对蛋白质活性的影响）、（活性能够十分有效和快速地被打开和被关闭）。

10．蛋白质折叠机制首先成核理论的主要内容包括（成核）、（结构充实）、（最后重排）。

11．半乳糖对细菌有双重作用；一方面（可以作为碳源供细胞生长）；另一方面（它又是细胞壁的成分）。所以需要一个不依靠于cAMP—CRP的启动子S2举行本底水平的永远型合成；同时需要一个依靠于cAMP—CRP的启动子S1对高水平合成举行调整。有G时转录从（S2）开头，无G时转录从（S1）开头。

12．DNA重组技术也称为（基因克隆）或（分子克隆）。终于目的是（把一个生物体中的遗传信息DNA转入另一个生物体）。典型的DNA重组试验通常包含以下几个步骤：

①提取供体生物的目的基因（或称外源基因），酶接衔接到另一DNA分子上（克隆载体），形成一个新的重组DNA分子。

②将这个重组DNA分子转入受体细胞并在受体细胞中复制保存，这个过程称为转化。

③对那些汲取了重组DNA的受体细胞举行筛选和鉴定。

④对含有重组DNA的细胞举行大量培养，检测外援基因是否表达。

13、质粒的复制类型有两种：受到宿主细胞蛋白质合成的严格控制的称为（严紧型质粒），不受宿主细胞蛋白质合成的严格控制称为（松弛型质粒）。

14．PCR的反应体系要具有以下条件：

a、被分别的目的基因两条链各一端序列互相补的DNA引物（约20个碱基左右）。

b、具有热稳定性的酶如：TagDNA聚合酶。

c、dNTP

d、作为模板的目的DNA序列

15．PCR的基本反应过程包括：（变性）、（退火）、（延长）三个阶段。

16、转基因动物的基本过程通常包括：

①将克隆的外源基因导入到一个受精卵或胚胎干细胞的细胞核中；

②接种后的受精卵或胚胎干细胞移植到雌性的子宫；

③完成胚胎发育，生长为后代并带有外源基因；

④利用这些能产生外源蛋白的动物作为种畜，哺育新的纯合系。

17．杂交瘤细胞系的产生是由（脾B）细胞与（骨髓瘤）细胞杂交产生的，因为（脾细胞）可以利用次黄嘌呤，（骨细胞）提供细胞分裂功能，所以能在HAT培养基中生长。

18．随着讨论的深化第一代抗体称为（多克隆抗体）、其次代（单克隆抗体）、第三代（基因工程抗体）。

19．目前对昆虫病毒的基因工程改造主要集中于杆状病毒，表现在引入（外源毒蛋白基因）；（扰乱昆虫正常生活周期的基因）；（对病毒基因举行修饰）。

20．哺乳类RNA聚合酶Ⅱ启动子中常见的元件TATA、GC、CAAT所对应的反式作用蛋白因子分离是（TFIID）、（SP-1）和（CTF/NF1）。

21．RNA聚合酶Ⅱ的基本转录因子有、TFⅡ-A、TFⅡ-B、TFII-D、TFⅡ-E他们的结合挨次是：（D、A、B、E）。其中TFII-D的功能是（与TATA盒结合）。

22．与DNA结合的转录因子大多以二聚体形式起作用，转录因子与DNA结合的功能域常见有以下几种（螺旋-转角-螺旋）、（锌指模体）、（碱性-亮氨酸拉链模体）。

23．限制性内切酶的切割方式有三种类型分离是（在对称轴5'侧切割产生5'粘端）、（在对称轴3'侧切割产生3'粘端（在对称轴处切割产生平段）。

24．质粒DNA具有三种不同的构型分离是：（SC构型）、（oc构型）、（L构型）。在电泳中最前面的是（SC构型）。

25．外源基因表达系统，主要有（大肠杆菌）、（酵母）、（昆虫）和（哺乳类细胞表）。26．转基因动物常用的办法有：（逆转录病毒感染法）、（DNA显微注射法）、（胚胎干细胞法）。

三、简答

1．分离说出5种以上RNA的功能？

转运RNAtRNA转运氨基酸

核蛋白体RNArRNA核蛋白体组成成

信使RNAmRNA蛋白质合成模板

不均一核RNAhnRNA成熟mRNA的前体

小核RNAsnRNA参加hnRNA的剪接

小胞浆RNAscRNA/7SL-RNA蛋白质内质网定位合成的信号识别体的组成成分

反义RNAanRNA/micRNA对基因的表达起调整作用

核酶RibozymeRNA有酶活性的RNA

2．原核生物与真核生物启动子的主要差别？

原核生物

TTGACATATAAT起始位点

-35-10

真核生物

增加子GCCAATTATAA—5mGpp—起始位点

-110-70-25

3．对自然 质粒的人工构建主要表现在哪些方面？

自然 质粒往往存在着缺陷，因而不适合用作基因工程的载体，必需对之举行改造构建：

a、加入合适的挑选标记基因，如两个以上，易于用作挑选,通常是抗生素基因。

b、增强或削减合适的酶切位点，便于重组。

c、缩短长度，切去不须要的片段，提高导入效率，增强装载量。

d、转变复制子，变严紧为松弛，变少拷贝为多拷贝。

e、按照基因工程的特别要求加装特别的基因元件

4．举例说明差示筛选组织特异cDNA的办法？

制备两种细胞群体，目的基因在其中一种细胞中表达或高表达，在另一种细胞中不表达或低表达，然后通过杂交对照找到目的基因。

例如：在肿瘤发生和进展过程中，肿瘤细胞会展现与正常细胞表达水平不同的mRNA，因此，可以通过差示杂交筛选出与肿瘤相关的基因。也可利用诱导的办法，筛选出诱导表达的基因。5．杂交瘤细胞系的产生与筛选？

脾B细胞+骨髓瘤细胞，加聚乙二醇（PEG）促进细胞融合，HAT培养基中培养（内含次黄嘌呤、氨基蝶呤、T）生长出来的脾B-骨髓瘤融合细胞继续扩大培养。

细胞融合物中包含：

脾-脾融合细胞：不能生长，脾细胞不能体外培养。

骨-骨融合细胞：不能利用次黄嘌呤，但可通过其次途径利用叶酸还原酶合成嘌呤。氨基蝶呤对叶酸还原酶有抑制作用，因此不能生长。

骨-脾融合细胞：在HAT中能生长，脾细胞可以利用次黄嘌呤，骨细胞提供细胞分裂功能。6、利用双脱氧末端终止法（Sanger法）测定DNA一级结构的原理与办法？

原理是采纳核苷酸链终止剂—2，，3，-双脱氧核苷酸终止DNA的延伸。因为它缺少形成3/5

/磷酸二脂键所需要的3-OH，一旦参入到DNA链中，此DNA链就不能进一步延伸。按照碱基配对原则，每当DNA聚合酶需要dNMP参入到正常延伸的DNA链中时，就有两种可能性，一是参入ddNTP,结果导致脱氧核苷酸链延伸的终止；二是参入dNTP,使DNA链仍可继续延伸，直至参入下一个ddNTP。按照这一办法，就可得到一组以ddNTP结尾的长短不一的DNA片段。

办法是分成四组分离为ddAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP反应后，聚丙烯酰胺凝胶电泳按泳带可读出DNA序列。

7、激活蛋白（CAP）对转录的正调控作用？

环腺苷酸（cAMP）受体蛋白CRP（cAMPreceptorprotein），cAMP与CRP结合后所形成的复合物称激活蛋白CAP（cAMPactivatedprotein）。当大肠杆菌生长在缺乏葡萄糖的培养基中时，CAP合成量增强，CAP具有激活乳糖（Lac）等启动子的功能。一些依靠于CRP的启动子缺乏普通启动子所具有的典型的-35区序列特征（TTGACA）。因此RNA聚合酶难以与其结合。

CAP的存在（功能）：能显著提高酶与启动子结合常数。主要表现以下二方面：

①CAP通过转变启动子的构象以及与酶的互相作用协助酶分子正确定向,以便与-10区结合，起到取代-35区功能的作用。

②CAP还能抑制RNA聚合酶与DNA中其它位点的结合，从而提高与其特定启动子结合的概率。

8、典型的DNA重组试验通常包括哪些步骤？

a、提取供体生物的目的基因（或称外源基因），酶接衔接到另一DNA分子上（克隆载体），形成一个新的重组DNA分子。

b、将这个重组DNA分子转入受体细胞并在受体细胞中复制保存，这个过程称为转化。

c、对那些汲取了重组DNA的受体细胞举行筛选和鉴定。

d、对含有重组DNA的细胞举行大量培养，检测外援基因是否表达。

9、基因文库的构建对重组子的筛选举出3种办法并简述过程。

抗生素抗性筛选、抗性的插入失活、兰-白斑筛选或PCR筛选、差式筛选、DNA探针

多数克隆载体均带有抗生素抗性基因（抗氨苄青霉素、四环素）。当质粒转入大肠杆菌中后，该菌便获得抗性，没有转入的不具有抗性。但不能区别是否已重组。

在含有两个抗性基因的载体中，假如外源DNA片段插入其中一个基因并导致该基因失活，就可用两个分离含不同药物的平板对比筛选阳性重组子。如pUC质粒含LacZ基因（编码β半乳糖苷酶）该酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)产生蓝色，从而使菌

株变蓝。当外源DNA插入后，LacZ基因不能表达，菌株呈白色，以此来筛选重组细菌。

10、说明通过胚胎干细胞获得转基因动物的基本过程？

胚胎干细胞（embryonicstemcell,ES）：是胚胎发育期的胚细胞，可以人工培养增殖并具有分化成其它类型细胞的功能。

ES细胞的培养：

分别胚泡的内层细胞团举行培养。ES在无饲养层中培养时会分化为肌细胞、N细胞等多种功能细胞，在含有成纤维细胞中培养时ES将保持分化功能。

可以对ES举行基因操作，不影响它的分化功能可以定点整合，解决了随机整合的问题。向胚胎干细胞导入外源基因，然后植入到待孕雌鼠子宫，发育成幼鼠，杂交获得纯合鼠。

中国科学院2022年硕士讨论生考试生物化学与分子生物学试题

2022-11-14

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一、是非题（共25分）

1.多肽链的共价主链形式可以是双链或单链（）

2.分子量相同的两种蛋白质，如分子中酪氨酸和色氨酸残基数亦相同，，其摩尔消光系数可能不同（）

3.胰岛素元的降血糖活性是胰岛素的1/10左右（）

4.苯丙氨酸是人体必须氨基酸（）

5.丝-酪-丝-甲硫-谷-组-苯丙-赖-色-甘十肽经胰蛋白酶部分水解后，溶液中将有两种肽段存在（）

6.核酸在pH3.5的缓冲液中电泳时，是从正极向负极运动的（）

7.核糖体上蛋白质生物合成时，催化肽键合成的是核糖体RNA（）

8.tRNA转录后加工有剪接反应，它是有蛋白质催化的（）

9.核酸降解成单核苷酸时，紫外汲取值下降（）

10.RNA衔接酶的底物是RNA，DNA衔接酶的底物是DNA（）

11.DNA的复制办法有多种，滚动式复制方式通常以双向方式举行（）

12.色氨酸操纵子（trpoperon）中含有衰减子序列（）

13.对正调控和负调控操纵子而言，诱导物都能促进基因的转录（）

14.RecA蛋白只能与单链DNA结合，并发挥NTP酶活性（）

15.在克隆载体pBSK质粒中，利用尽整的lacZ基因作为筛选标记，白色转化菌落表明重组质粒含有插入片断（）

16溶菌酶水解的底物是N-乙酰氨基葡萄糖的聚合物（）

17.激素受体都具有酪氨酸受体结构域（）

18.在底物的浓度达到无限大又没有任何效应剂存在的条件下，酶催化反应为零级反应（）

19.蛋白质可接离的基团都来自其侧链上的基团（）

20.蛋白质的等电点和它所含的酸性氨基酸残基和碱性氨基酸残基的数目比例有关（）

21.心碱脂是一种在中性pH下带正电荷的磷脂（）

22.生物膜上有许多膜固有蛋白，他们的跨膜肽段大多呈α螺旋结构（）

23.生物膜以脂双层结构为骨架，虽然细胞的不同膜由不同的磷脂组成，但脂双层的两个单层的磷脂组成是基本全都的（）

24.NADH氧化时的P/O比值时3（）

25.生物膜是离子与极性分子的通透屏障，但水分子是例外（）

二、挑选题（共20分）

1.胰岛素的功能单位是

A.单体

B.二体

C.四体

D.六体

2.1mol/L硫酸钠溶液的离子浓度为

A.2

B.3

C.6

D.8

3.某蛋白质的pI为8，在pH6的缓冲液中举行自由界面电泳，其泳动方向为

A.像正极方向泳动

B.没有泳动

C.向负极方向泳动

D.向正负极蔓延

4.今有a，b，c，d四种蛋白质，其分子体积由大到小的挨次是A>B>C>D，在凝胶过滤柱层析过程中，最先洗脱出来的蛋白质普通应当是

A.a

B.b

C.c

D.d

5.噬菌体展示可用来讨论

A.蛋白质-蛋白质互相作用；

B.蛋白质-核酸互相作用；

C.核酸-核酸互相作用；

D.噬菌体外壳蛋白性质

6.DNA合成仪合成DNA片断时，用的原料是

A.4种dNTP；

B.4种NTP；

C.4种dNDP；

D.4种脱氧核苷的衍生物

7.酒精沉淀核酸时，下列何种长度核苷酸不能被沉淀

A.10

B.20

C.50

D.100

8.反密码子IGC可以识别的密码子是

A.GCG

B.GCA

C.ACG

D.ICG

9.真核RNA聚合酶2最大亚基C末端重复序列的功能是

A.磷酸化使RNA聚合酶2与其它转录因子解离，促进转录的起始与延长；

B.乙酰化使RNA聚合酶2与组蛋白竞争结合与DNA上，促进转录的起始与延长；

C.甲基化使RNA聚合酶2活化，促进转录的起始与延长；

D.三者都有

10.GAL4因子能够结合于基因的上游调控序列并激活基因的转录，它的DNA结合结构域属于

A.锌指结构

B.亮氨酸拉链结构

C.螺旋-环-螺旋结构

D.螺旋-转角-螺旋结构

11.NA聚合酶1的功能是

A.转录tRNA和5sRNA基因；

B.转录蛋白质基因和部分snRNA基因；

C.只转录rRNA基因；

D.转录多种基因

12.在真核细胞内，着丝粒是指

A.两个构成染色体DNA分子的衔接区域；

B.一段高度重复的序列与组蛋白结合形成异染色质区；

C.染色体DNA上的一段特别序列，能够促进与纺锤体的互相作用；

D.大约430bp长的一段序列，两端为两段高度保守的序列

13.下列哪种酶的巯基参加催化肽键断裂反应

A.羧肽酶Y；

B.胃蛋白酶；

C.木瓜蛋白酶；

D.胰凝乳蛋白酶

14.达到反应平衡时，打算酶催化反应中底物转化为产物比率的参数是

A.酶的比活力凹凸；

B.酶的Vmax大小

C.酶的转化数；

D.酶的Km

15.自然界通过光合作用生成大量的植物干物质，其中含量最高的是

A.淀粉

B.木质素

C.纤维素

D.半纤维素

16.能催化蛋白质的谷氨酸及天冬氨酸的羧基侧肽键断裂反应的酶是

A.枯草杆菌蛋白酶

B.胃蛋白酶

C.嗜热菌蛋白酶

D.金黄色葡萄糖球菌v8蛋白酶

17.下列化合物中哪一个是线粒体氧化磷酸化的解偶联剂

A.氯霉素

B.抗酶素A

C.2，4-二硝基苯酚

D.β-羟基丁酸

18.蛋白激酶A催化蛋白质上氨基酸残基的磷酸化，它是

A.酪氨酸残疾

B.组氨酸残基

C.丝氨酸残基

D.门冬氨酸残基

19.钠钾ATP酶催化一分子ATP水解时，同时

A.泵出2Na+，泵入2K+

B.泵出3Na+，泵入3K+

C.泵出2Na+，泵入3K+

D.泵出3Na+，泵入2K+

20.动物细胞质中游离Ca+2的