白假丝酵母菌专家讲座

第二十二章

白假丝酵母菌

4/20/20231真菌白假丝酵母菌第1页重点1.白色假丝酵母菌生物学特征2.白色假丝酵母菌微生物学检验4/20/20232真菌白假丝酵母菌第2页真菌学概述

概念：是一类有经典细胞核和完善细胞器，不含叶绿素，无根、茎、叶分化真核细胞型微生物。

4/20/20233真菌白假丝酵母菌第3页真菌形态特征（一）单细胞真菌呈圆形，如酵母菌。（二）多细胞真菌由菌丝和孢子组成，称丝状菌或霉菌。菌丝和孢子形态因菌而异，是判定真菌主要依据。孢子又分为各种，如叶状孢子、分生孢子和孢子囊孢子等。

4/20/20234真菌白假丝酵母菌第4页单细胞真菌酵母菌：孢子，无菌丝类酵母菌：芽生孢子，假菌丝多细胞真菌丝状菌（霉菌）：孢子和菌丝菌丝和孢子形态因菌而异，是判定真菌主要依据。孢子又分为各种，如叶状孢子、分生孢子和孢子囊孢子等。真菌形态特征4/20/20235真菌白假丝酵母菌第5页单细胞真菌形态4/20/20236真菌白假丝酵母菌第6页类酵母菌—白假丝酵母菌孢子假菌丝4/20/20237真菌白假丝酵母菌第7页多细胞真菌形态4/20/20238真菌白假丝酵母菌第8页真菌菌落特征1．酵母型菌落：

是单细胞真菌菌落，形态与细菌菌落相同，较大，表面光滑湿润柔软、边缘整齐，如新生隐球菌。2.类酵母型菌落：如白假丝酵母菌，形成假菌丝，伸入培养基中。3．霉菌型菌落：

是多细胞真菌菌落。菌落呈棉絮状、绒毛状，并产生不一样色素，如皮肤癣菌。4/20/20239真菌白假丝酵母菌第9页酵母型菌落4/20/202310真菌白假丝酵母菌第10页类酵母型菌落4/20/202311真菌白假丝酵母菌第11页

霉菌型菌落菌4/20/202312真菌白假丝酵母菌第12页培养特征真菌培养要求不高，惯用沙氏(Sabouraud)培养基(含1％蛋白胨、4％葡萄糖或麦芽糖、2％琼脂)培养，适宜温度22℃—28℃，但深部真菌为37℃。适宜PH值为4.0-6.0。菌落是判别真菌方法。注意以下几点：①菌落性质：酵母菌还是霉菌；②菌落大小，病原性真菌菌落小，而条件致病性真菌菌落大；③菌落颜色病原性真菌颜色淡，污染真菌颜色深；④致病性真菌菌落下沉，有时使培养基开裂；污染性真菌菌落不下沉,极少引发开裂。真菌依靠孢子及菌丝进行无性或有性繁殖4/20/202313真菌白假丝酵母菌第13页变异性抵抗力易发生变异形态、培养性状和毒力等抵抗力较强对干燥、紫外线及普通消毒剂抵抗力强对热敏感，60℃1小时菌丝、孢子均被杀死对2%石炭酸、0.1%升汞、2.5%碘酊或10%甲醛敏感对作用于细菌抗生素不敏感，对二性霉素B制霉菌素、咪康唑、酮康唑、氟康唑和伊曲康唑敏感。4/20/202314真菌白假丝酵母菌第14页致病性与免疫性致病性1.致病性真菌感染：浅部真菌：角蛋白酶、机械刺激、代谢产物深部真菌：慢性肉芽肿、组织溃疡2.条件致病性真菌：假丝酵母菌3.真菌超敏反应性疾病4.真菌性中毒症5.真菌毒素与肿瘤免疫性天然免疫取得性免疫：体液免疫、细胞免疫4/20/202315真菌白假丝酵母菌第15页真菌感染病原学诊疗标本采集临床标本类别：1．皮肤角质性物质：毛发、指(趾)甲、皮屑等。2．各种分泌物和排泄物：生殖道、分泌物、耳垢、痰、粪便、尿液等。

3．血液和体液：体液包含胸水、腹水、脑脊液、淋巴穿刺液等。4．脓汁及渗出物。4/20/202316真菌白假丝酵母菌第16页采集标本注意事项：1.采集标本要适宜不一样真菌感染应采取不一样临床标本。怀疑为浅部真菌感染如体癣，应刮取病变边缘痂、皮屑，发癣应取病发。深部真菌感染应取血液、脑脊液、脓汁等。2．在用药前采集标本普通真菌标本须在用药前采集，对已用药者则需停药一段时间后再采集标本。3．采集标本量要足血液和脑脊液5ml，胸腔液20ml，皮屑标本两块，活体组织两份(一份病理检验，一份镜检和培养)。4．严格无菌操作并进行消毒处理，尤其是采集血液和脑脊液标本，要防止污染杂菌。5．采集标本马上送检深部真菌标本最长不得超出2h。4/20/202317真菌白假丝酵母菌第17页检验程序P354检验方法直接检验不染色和染色镜检

4/20/202318真菌白假丝酵母菌第18页培养检验法培养基选择培养方法：直接法、试管法、大培养、小培养真菌判定生化反应用于主要深部感染真菌如假丝酵母菌、隐球菌等。1.糖(醇)类发酵试验37℃孵育，观察糖发酵情况。2.同化碳源试验含菌生理盐水与已融化固体同化碳源培养基(45℃)混合，然后在培养基上分别加糖，置25℃孵育观察结果。若24h后无改变可重复加糖。如能同化周围有生长圈，不然无生长。3.同化氮源试验同化碳源试验相同，但需用无氮源培养基，不要加糖类，而加入硝酸钾。4.明胶液化试验、尿素分解试验、测定淀粉样化合物5.分解牛乳试验4/20/202319真菌白假丝酵母菌第19页抗原检测惯用方法有胶乳凝集试验、ELISA、半定量放射免疫法。均应设对照，预防发生假阳性和假阴性。动物试验试验目标是分离病原性真菌、确定真菌菌种致病性、研究药品对真菌作用等。如假丝酵母菌接种家兔或小白鼠，肾脏显著肿胀，肾皮质部位有白色脓疡。核酸检测从核酸碱基G+Cmol％分析、限制性片段长度多态性(RFLP)、Southern印迹分析到脉冲场凝胶电泳(PFGE)、PCR指纹、随机扩增多态性DNA(RAPD)以及DNA特殊片段测序等。4/20/202320真菌白假丝酵母菌第20页主要致病性真菌真菌按其侵犯部位和临床表现分为：

表面感染真菌

浅部感染真菌皮肤癣真菌皮下组织真菌感染深部感染真菌：新生隐球菌条件致病性真菌：假丝酵母菌4/20/202321真菌白假丝酵母菌第21页

深部感染真菌深部真菌是侵犯皮下组织和内脏，引发全身性感染真菌。多数能引发慢性肉芽肿样炎症、溃疡及坏死等病变深部感染真菌分两大类：

1.致病性真菌：这类真菌在正常人体内部不存在，一旦侵入机体，即可致病，如组织胞浆菌、球孢子菌、芽生菌等，属外源性，我国少见；2.条件致病性真菌：是人体正常菌群组员，当机体抵抗力下降时才致病，如新型隐球菌、白色念珠菌、曲霉菌和毛霉菌等。4/20/202322真菌白假丝酵母菌第22页假丝酵母菌俗称念珠菌，有81个种，其中有11种对人有致病性：白假丝酵母菌、为最常见致病菌。另外，热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌和光滑假丝酵母菌也较多引发疾病。白假丝酵母菌（canidiaAlbicans）又称白色念珠菌，广泛存在于自然界，也存在于正常人口腔，上呼吸道，肠道及阴道，普通在正常机体中数量少，不引发疾病。为条件致病性真菌。4/20/202323真菌白假丝酵母菌第23页1．微生物特征白假丝酵母菌呈圆形或卵圆形，直径2-4μm。革兰阳性。出芽方式繁殖，在组织内可见芽生孢子、假菌丝，孢子可伸长成芽管，如不与母细胞脱离而形成假菌丝。4/20/202324真菌白假丝酵母菌第24页营养要求不高，在普通琼脂、血琼脂、和沙保培养基均生长。需氧，室温或37℃，甚至42℃生长良好。菌落呈酵母样，有大量向下生长营养假菌丝，表面光滑，呈灰白色或奶油色，有酵母味，如时间长，菌落增大成蜂窝状。在玉米粉吐温-80培养基中可长出厚膜孢子。沙氏斜面普通平板血平板4/20/202325真菌白假丝酵母菌第25页条件致病：皮肤粘膜感染鹅口疮，阴道炎内脏感染：肺炎、关节炎、膀胱炎，肾盂肾炎中枢神经感染：脑膜（脑）炎、脑脓肿2．致病性和免疫性本菌可侵犯人体许多部位，机体也可它产生免疫力过敏4/20/202326真菌白假丝酵母菌第26页3．微生物检验

1.标本采集：所致疾病不一样，取不一样标本。

2.检验程序P354

3.检验方法及判定1）直接显微镜检验：取脓汁、痰和局部炎症性分泌物直接涂片，有些标本需用KOH先消化，革兰染色后镜检，显微镜见到革兰阳性(着色不均匀)、圆形或卵圆形菌体或孢子及假菌丝，厚膜孢子较少见。4/20/202327真菌白假丝酵母菌第27页2）培养检验：将标本接种在沙氏培养基上，25℃或37℃培养1～2d后，可出现奶油色类酵母型菌落。镜检可见假菌丝和芽生孢子。4/20/202328真菌白假丝酵母菌第28页3)判定试验芽管形成试验：将假丝酵母菌接种于0.2～0.5ml血清中，37℃孵育1.5～４h观察有没有芽管形成。白假丝酵母菌可形成芽管，其它假丝酵母菌不形成芽管。芽管芽管芽管4/20/202329真菌白假丝酵母菌第29页厚膜孢子形成试验：将假丝酵母菌接种于玉米粉培养基25℃孵育1-2d后，白假丝酵母菌在菌丝顶端、侧缘或中间形成厚膜孢子。厚膜孢子4/20/202330真菌白假丝酵母菌第30页糖同化和糖发酵试验：

凡发酵某种糖一定能同化该糖，故只需做那些不发酵糖同化试验。将假丝酵母菌接种糖发酵管，25℃孵育，普通观察2～3d，对不发酵或弱发酵管可延长至10d或2—4周。观察有没有酵母生长或液体培养基是否变混浊。现在商品化产色培养基可快速判定白假丝酵母菌和其它假丝酵母菌。4/20/202331真菌白假丝酵母菌第31页TZC试验：将白色念珠菌接种于含0.005％氯化三本四氮唑沙保培养基中，经22～25℃，24～48h培养，白色念珠菌不变色或仅淡红色，其它念珠菌或酵母菌呈红色或深红色(被还原为红色三苯甲)。血清学试验：取病人血清作ELISA、免疫印迹法等检测白假丝酵母菌抗原。核酸检测：用PCR法将白假丝酵母菌DNA分子扩增后以分子探针检测，含有很好敏性和特异性。动物试验：4/20/202332真菌白假丝酵母菌第32页新型隐球菌新型隐球菌又名溶组织酵母菌，是土壤，鸽类，牛乳、水果等腐生菌，也可存在人口腔中。可侵犯人和动物，普通为外源性感染，但也可能为内源性感染，对人类而言，它通常是条件致病菌。

4/20/202333真菌白假丝酵母菌第33页较大球形，直径可达5～20um，有肥厚荚膜，折光性强，普通染料不易着色，难以发觉，称隐球菌，用墨汁阴性显影法镜检，可见到透明荚膜包裹着菌细胞，菌细胞常有出芽，但不生成假菌丝。

生物学特征4/20/202334真菌白假丝酵母菌第34页在沙保氏琼脂及血琼脂培养基上，于25及37℃皆可生长，而非病原性隐球菌在37℃不能繁殖。酵母型菌落，呈白色。本菌能分解尿素，以此与酵母菌和念珠菌判别。

4/20/202335真菌白假丝酵母菌第35页致病性本菌大多由呼吸道转入，在肺部引发轻度炎症，或隐性传染。侵犯中枢神经系统，发生脑膜炎、脑炎、脑肉芽肿等。另外可侵入骨骼、肌肉、淋巴结、皮肤粘膜引发慢性炎症和脓肿。

4/20/202336真菌白假丝酵母菌第36页微生物学检验1．直接镜检：惯用墨汁涂片法。2．分离培养：

在沙保培养基上，室温、37℃2～3天即可长出经典酵母型菌落。有荚膜者菌落粘稠。

4/20/202337真菌白假丝酵母菌第37页3．糖同化及发酵试验：本菌不发酵各种糖类，但能同化葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、半乳糖、肌醇，不一样化乳糖。4．酚氧化酶试验：在含Ｌ－多巴橘橼酸铁和咖啡酸培养基中，经２～５天培养，新型隐球菌出现棕黑色菌落。５．尿素酶试验：新型隐球菌产生尿素酶，在尿素培养基（含尿素及酚红指示剂）中分解尿素形成氨和CO2，以致培养基pH值升高，使酚红由黄变为粉红色为阳性，而白色念珠菌为阴性。

4/20/202338真菌白假丝酵母菌第38页谢谢4/20/202339真菌白假丝酵母菌第3