安捷伦色谱柱选择与色谱柱维护保养详解演示文稿

安捷伦色谱柱选择与色谱柱维护保养详解演示文稿现在是1页\一共有62页\编辑于星期五（优选）安捷伦色谱柱选择与色谱柱维护保养现在是2页\一共有62页\编辑于星期五分离模式的选择样品溶于有机溶剂溶于水溶于四氢呋喃非离子化离子化溶于有机溶剂溶于水溶于正己烷溶于甲醇或甲醇/水或乙腈或乙腈/水用硅胶的正相模式用键合相的正相模式用键合相的反相模式用键合相的反相模式低分子凝胶渗透色谱用键合相的反相模式抑制电离反相键合相色谱离子对键合相的反相模式用硅胶的正相模式离子交换模式凝胶渗透色谱凝胶过滤色谱大孔填料的离子交换模式用大孔填料的反相模式分子量>2,000分子量<2,000现在是3页\一共有62页\编辑于星期五

反相分配色谱极性:固定相<流动相 固定相-非极性 流动相(甲,乙醇,乙腈,THF,二氯乙烷)-极性 非极性物质后出峰正相吸附色谱

极性:固定相>流动相 固定相-极性 流动相(己烷,庚烷)-非极性 极性物质后出峰正相色谱20%反相色谱80%正相&反相色谱现在是4页\一共有62页\编辑于星期五

硅胶基质-pH3~8Al2O3

.nH2O-pH1~14

聚合物基质-pH1~14高或低pH下,硅胶会溶解化学修饰困难孔结构复杂,孔径不均匀导致柱效不够高,有机溶剂可能导致聚合物基质溶涨而受损柱填料基质现在是5页\一共有62页\编辑于星期五C-18柱---性能影响因素键合类型碳覆盖率封端化学性质物理性质硅胶纯度色谱柱尺寸颗粒形状粒径表面积孔径现在是6页\一共有62页\编辑于星期五硅胶纯度 •填料硅胶的纯度与残留金属离子浓度色谱柱尺寸 •填料床的长度和内径颗粒形状 •球型或不规则型粒径 •平均颗粒直径,通常3-10µm表面积 •颗粒外表面和内部孔表面的总和,以m2/gram表示孔径 •颗粒的孔或腔的平均尺寸,范围80-300Å色谱柱物理性质C-18柱---性能影响因素现在是7页\一共有62页\编辑于星期五键合类型 •单体键合-键合相分子与基体单点相连 •聚合体键合-键合相分子与基体多点相连碳覆盖率 •与基体物质相连的键合相的量封端

•键合步骤之后,用短链将裸露的硅羟基键合后封闭起来色谱柱化学性质C-18柱---性能影响因素现在是8页\一共有62页\编辑于星期五A类硅胶OriginalZORBAXSIL(1970s)由于带负电荷的残留硅羟基和酸性表面上金属含量高(硅羟基的pKa低),导致碱性化合物发生拖尾B类硅胶(高纯)ZORBAXRx-Sil(1987)由于金属含量低,硅羟基pKa高,碱性化合物不发生拖尾ZorbaxRx-SIL:11种金属<35ppm(未检出其他杂质,<1ppm);99.995%纯度的二氧化硅C-18柱---性能影响因素现在是9页\一共有62页\编辑于星期五ZORBAX®生产工艺硅胶+脲(pH=2)+甲醛CH2O孔径80A&300A

DO2250oC粒径1.8µm3.5µm5.0µm7.0µm微球表面的略微融合专利技术增强了硅胶填料的耐流动相冲刷能力---Zorbax色谱柱使用寿命长的技术保障安捷伦拥有此项溶胶-凝胶填料专利技术StableBondEclipseXDBBonus-RPExtendZORBAXRx多孔硅胶微球现在是10页\一共有62页\编辑于星期五色谱柱尺寸---对色谱分离的影响 •短柱(15-100mm)-运行时间短,柱压低 •长柱(150-250mm)-分辨率高,运行时间长 •窄径柱(2.1mm)-检测器灵敏度高 •宽径柱(3-21.2mm)-载样量高C-18柱---性能影响因素现在是11页\一共有62页\编辑于星期五颗粒形状---对色谱分离的影响

当使用黏度较大的流动相50:50=MeOH:H2O时,球型颗粒可以降低柱压,延长色谱柱寿命C-18柱---性能影响因素球形不规则形粒径---对色谱分离的影响

较小的颗粒柱效较高,但会引起柱压过高.3.5µm粒径的常用于分离复杂的多组份样品,而组份单一的样品多采用5µm的粒径1.8µm3.5µm 5µm 7µm 10µm现在是12页\一共有62页\编辑于星期五表面积---对色谱分离的影响

高表面积对于多组份样品的分离具有较强的保留能力,柱容量和分离度.表面积低的填料通常能迅速达到平衡状态,对于梯度淋洗尤为重要C-18柱---性能影响因素孔径---对色谱分离的影响

大孔的填料颗粒可以延长溶质大分子在填料表面滞留的时间,达到充分分离,改善峰形样品MW4,000,选择80Å的孔径样品MW>4,000,选择300Å的孔径现在是13页\一共有62页\编辑于星期五大孔径填料适用于大分子分析大孔径300Å全多孔色谱柱

可用于分离蛋白质和多肽

分子量虽小但hydrodynamicvolume(水动力学体积)较大的分子Poroshell色谱柱

高流速下,高柱效分析大分子的蛋白质和多肽色谱柱填料孔径必须适合待测物分子自由进出填料孔,与孔内表面的键合相进行分离分配现在是14页\一共有62页\编辑于星期五300Å孔径可改善蛋白质和多肽峰形0.2000.020.040.060.040.160.18300SB-C18(300Å)SB-C18(80Å)PW1/2LeuEnkephalinM.W.=556AngiotensinII(血管紧张素II)M.W.=1046InsulinBM.W.=3,496CytCM.W.=12,327Rnase(核糖核酸酶)M.W.=13,684Lysozyme(溶菌酶)M.W.=13,900孔径,分子量对峰宽的影响(梯度分离)选择合适的填料孔径分析大分子可获得最佳峰形现在是15页\一共有62页\编辑于星期五300Å孔径可改善大分子的峰形色谱柱:4.6x150mm,5mm流动相:60%MeOH:40%0.1%三氟乙酸流速:0.75mL/min温度:RT 检测器:UV282nm溶液中的分子尺寸决定适宜的色谱柱孔径窄的峰宽表明待测分子进入填料孔没有受到阻碍SB-C3(80Å)300SB-C3(300Å)Pw1/2=0.442Pw1/2=0.125OONHOHOCHOHOOHOHOOOOOOOCH3CH3OCH3OCH3CH3CH2CH2CH2CH3CH3CH3H3CH3CH3C0510Time(min)0510Time(min)Tylosin(泰乐菌素)MW.926分子量虽小但hydrodynamicvolume(水动力学体积)较大的分子现在是16页\一共有62页\编辑于星期五键合类型---对色谱分离的影响

单齿键合：提高传质速率,加快色谱柱平衡双齿键合：增加色谱柱稳定性,增加色谱柱的载样量C-18柱---性能影响因素CHCHCHCHCHCHOSiOOOOSiSiSiCHCHCHCHCHCHSi333333333333SiSiOOSiSiOO现在是17页\一共有62页\编辑于星期五碳覆盖率---对色谱分离的影响

高碳覆盖率：提高分辨率,分析时间长低碳覆盖率：缩短运行时间封端---对色谱分离的影响

封端：减轻待测组份与硅胶表面残留的酸性硅羟基反应而引起的色谱峰拖尾现象对于极性样品,未封端与经过封端处理的色谱柱在选择性上有明显差异C-18柱---性能影响因素现在是18页\一共有62页\编辑于星期五固定相键合二甲基硅烷

封端四甲基硅烷SiOOHOOCH3SiRCH3CH3SiCH3CH3SiRCH3R=C8,

C18,

etc.OOHOHOCH3SiRCH3CH3SiRCH3++ClCH3SiCH3CH3OHOHOHOHCH3ClRCH3(TMS)传统键合及封端技术现在是19页\一共有62页\编辑于星期五取代基：五个旁侧基团:异丙基ZorbaxStableBond空间位阻保护---抗水解能力键合相流失,保留减弱另一个裸露的硅羟基,潜在的拖尾因素普通硅胶柱低pH<2不稳定,发生水解安捷伦专利的空间位阻保护现在是20页\一共有62页\编辑于星期五液相柱---保留值与pH的关系

pH变化值0.1RS变化值1.6色谱柱：ZorbaxStableBondC184.6X250mm,5um部件号：880975-906流动相：27%甲醇：73%磷酸pH2.5&2.6温度：500C流速：1.0mL/min.现在是21页\一共有62页\编辑于星期五12346750123456Time(min)01234561234675Time(min)pH7.00pH7.25色谱柱:ZORBAXEclipseXDB-C84.6x75mm,3.5µm流动相:44%25mM磷酸,pH7.00:56%甲醇流速:1.0mL/min温度:25°C检测:UV250nm可电离的组份的分离可能会随pH变化发生显著变化—甚至很小的0.05–0.25个pH变化单位.样品:ketoprofenethylparabenHydrocortisonefenoprofenpropylparabenPropranololibuprofen液相柱---保留值与pH的关系0.25个pH现在是22页\一共有62页\编辑于星期五液相柱---保留值与pH的关系pH变化：0.2个pH(7.0~7.2)保留时间改变：1.2分钟(13.6~14.8分钟)保留时间随pH改变不明显保留时间随pH改变不明显(酸性环境中)现在是23页\一共有62页\编辑于星期五保留时间酸性组份中性组份碱性组份方法稳定区方法波动区(pKa+1.5)

方法稳定区 液相柱---保留值与pH的关系现在是24页\一共有62页\编辑于星期五液相柱---保留值与pH的关系StableBondC18pH1~8

Bonus-RPpH2~9

ExtendC18pH2~11.5

EclipseXDBC18pH2~9

现在是25页\一共有62页\编辑于星期五复杂组分的流动相pH选择技巧色谱柱:ZORBAXExtend-C184.6x150mm,5mm流动相:30%缓冲液:70%MeOHpH7缓冲液20mMNa2HPO4pH11缓冲液20mMTEA流速:1.0mL/min

温度:RT 检测器:UV254nm0512,345Time(min)76Extend-C18pH71.Maleate马来酸盐2.Scopolamine东莨菪碱pKa7.63.PseudoEphedrine假麻黄碱pKa9.84.Doxylamine抗敏安(多西拉敏)pKa9.25.Chlorpheniramine氯苯吡胺pKa9.16.Triprol内径ine苯丙烯啶pKa6.57.Diphenhydramine苯海拉明pKa9.0Extend-C18pH1105101234Time(min)657高pH下,碱性成分的保留增加待测物pKa+1.5以外的流动相pH可保证方法的稳定性现在是26页\一共有62页\编辑于星期五Zorbax色谱柱发展史

1973ZORBAXSIL 发明专用于HPLC分离的球状、小颗粒硅胶(专利)1977ZORBAXODS 单官能团,单层键合相发明者之一1978ZORBAXcolumn 首先推出色谱柱的质量信誉保证1982ZORBAXGF-250 改善了蛋白质尺寸分离的稳定性1987ZORBAXRx-SIL 推出适合碱性化合物的HPLC分离的全新硅溶胶技术(专利)1990ZORBAXStableBond

增强了低pH条件下键合相的稳定性(专利)1996ZORBAXEclipseXDB

双封端技术提高了中等pH条件下键合相的稳定性(专利)1997ZorbaxLC/MScolumn 15和30mm(3.5um)快速,高分辨率,高通量LC/MS色谱柱1998ZORBAXBonus-RP

极性键合技术使碱性化合物的分离得到改善(专利)1999ZORBAXCombiHT 专为小规模组合化学样品制备设计的高通量色谱柱1999ZORBAXEclipsedsDNA用于分析双链DNA的多孔硅胶柱1999ZORBAXCarbohydrate 分析单,双,三糖和糖醇的专用柱1999ZorbaxExtendC18

独特宽pH跨度,高pH下使用的硅胶基质色谱柱(专利)2001ZorbaxSB-aq 可在低pH下(1~8)使用100%水相的填料(专利)2002ZorbaxPoroshell300SB 蛋白质高速,高效反相分离新填料2002ZORBAX3.0mm内径. 3-mm柱径溶剂节省柱2003ZORBAXsub2micron 1.8um粒径的高通量,超高速色谱柱(5月1日上市)2003ZORBAXPrepHT 高通量全系列制备柱---分析柱向制备柱直接放大(6月1日上市)现在是27页\一共有62页\编辑于星期五键合相-适用pH范围StableBond,pH1-81.使用空间位阻大的硅烷2.未-封端EclipseXDB,pH2-91.致密键合的二甲基烷基硅烷2.专利技术双-封端Bonus-RP,pH2-91.极性烷基固定相2.使用空间位阻大的硅烷3.三封端Extend-C18,pH2-11.51.独特的双齿键合结构2.双封端SiOSiOSilicaSupportC18C18SiONHOSilica-based色谱柱PackingwithAlkyl/am内径eStationaryPhaseORRSiOHSiOSiRRROOHRCHCHCHCHCHCHOSiOOOOSiSiSiCHCHCHCHCHCHSi333333333333ORSiSiOSiORR1CH3CH3CH3CH3RR1CH3R1R1R1CH3R111SiSiPGPGPGR1R1极性官能团低pH下,分析酸性,碱性和中性组分,峰形优异,柱寿命长中等pH下,分析酸性,碱性和中性组分,尤其碱性组分峰形优异,柱寿命长中等pH下,分析酸性,碱性和中性组分,可用于100%全水相,尤其极性组分峰形优异,柱寿命长中~高pH下,分析酸性,碱性和中性组分,,尤其碱性组分峰形优异,柱寿命长现在是28页\一共有62页\编辑于星期五SB-C1880A&300ApH:1~8SB-C880A&300ApH:1~8SB-苯基80ApH:1~8反相色谱柱Bonus-RP空间位阻保护+三封端80ApH:2~9Extend-C1880A&300ApH:2~11.5EclipseXDB双封端EclipseXDB-C1880ApH:2~9EclipseXDB-C880ApH:2~9EclipseXDB-苯基80ApH:2~9StableBond空间位阻保护Poroshell300SB-C18实心核多孔壳pH:1~8SB-CN80A&300ApH:1~8SB-C380A&300ApH:1~8Zorbax产品系列SB-AQ空间位阻保护80ApH:1~8可使用100%水相Extend双齿键合+双封端低pH中pH高pH现在是29页\一共有62页\编辑于星期五安捷伦HPLC色谱柱维护保养现在是30页\一共有62页\编辑于星期五Zorbax色谱柱=高柱效+长寿命min00.511.52Norm.01020304050

色谱柱: ZORBAXSB-C18 4.6x30mm,1.8um流动相: 60%甲醇:40水流速: 1mL/min温度: 室温检测: UV254nm柱效进样次数 #3 #41 6635 6138100 6857 6372200 6882 6381300 6895 6381400 6883 6294500 6815 6312600 6687 6236700 6653 6115800 6695 6221900 6781 63006810 63021300 6858 65282034 6823 63431234样品尿嘧啶苯酚4-Cl-硝基苯甲苯现在是31页\一共有62页\编辑于星期五色谱柱柱内体积和平衡时间单次样品运行时间=分析时间+色谱柱平衡时间色谱柱平衡时间=10倍柱内体积÷流速

4.6x50 0.5mL 5min 4.6x30 0.3mL 3min 4.6x15 0.15mL 1.5min 4.6x150 1.54mL 15min

2.1x50 0.10mL 5min 60sec 2.1x30 0.06mL 3min 36sec 2.1x15 0.03mL 1.5min 18sec

色谱柱 柱内平衡时间 尺寸 体积流速

(mm) (Vm)1.0mL/min

色谱柱 柱内平衡时间 尺寸 体积流速

(mm) (Vm)0.2mL/min1.0mL/min现在是32页\一共有62页\编辑于星期五清洗液相色谱柱冲洗色谱柱---用比流动相更强的溶剂反相色谱柱用以下溶剂至少各25mL冲洗色谱柱(分析柱)不含缓冲盐的流动相100%甲醇100%乙腈75%乙腈+25%异丙醇100%异丙醇100%二氯甲烷*100%己烷**若使用己烷或二氯甲烷冲洗色谱柱,则在重新使用反相流动相以前,必须用异丙醇冲洗色谱柱!!!正相色谱柱用以下溶剂至少各50mL冲洗色谱柱(分析柱)50%甲醇+50%三氯甲烷100%乙酸乙酯现在是33页\一共有62页\编辑于星期五<0.12mm内径管线用于毛细管HPLC中<2.1内径色谱柱0.17mm内径管线用于分析型HPLC中2.1~4.6内径色谱柱0.25mm内径管线用于半制备型HPLC中9.4内径色谱柱0.5mm内径管线用于制备型HPLC中21.2内径色谱柱连接管线与接头色谱柱:StableBondSB-C18,4.6x30mm,3.5mm流动相:85%H2Owith0.1%三氟乙酸:15%ACN流速:1.0mL/min温度:35°C50

mL柱外体积（管线）4321Time(min)0.00.51.01.52.010mL柱外体积Time(min)0.00.51.01.52.04321样品:1.苯丙胺酸2.5-苯基-3,6-二氧-2-哌嗪乙酸3.Asp-Phe4.天冬甜素现在是34页\一共有62页\编辑于星期五HPLC常用的色谱柱接头TroubleshootingLCFittings,PartII.J.W.DolanandP.Upchurch.LC/GCMagazine6:788(1988)0.09in.=2.33mmSwagelok安捷伦1100液相ParkerValcoUptight0.09in.=2.33mm0.08in.=2.07mm0.09in.=2.33mm0.13in.=3.37mm0.17in.=4.40mmWatersRheodyne现在是35页\一共有62页\编辑于星期五如果伸出的管线长度过长，可能漏液

螺母坡度不匹配，密封性差

死体积区如果伸出的管线长度不够，可能产生死体积HPLC常用的色谱柱接头现在是36页\一共有62页\编辑于星期五活塞杆与密封圈蓝宝石活塞杆 1/包装 部件号：5063-6586活塞杆密封圈（Vespel聚酰亚胺用于反相） 2/包装 部件号：5063-6589*己烷对Vespel聚酰亚胺有溶涨作用活塞杆密封圈（聚乙烯用于正相） 2/包装 部件号：0905-1420

现在是37页\一共有62页\编辑于星期五样品:尿嘧啶苯酚N,N-二甲基苯胺更换前 更换后色谱柱:Bonus-RP4.6x75mm,3.5mm流动相:30%H2O

:70%MeOH流速:1.0mL/min 温度：室温检测器:UV254nm0.00.51.01.5Time(min)2130.00.51.01.52.0Time(min)213塔板数 USP拖尾因子(5%)1.2235 1.722.3491 1.483.5432 1.15塔板数 USP拖尾因子(5%)1. 3670 1.452. 10457 1.093. 10085 1.00活塞杆与密封圈现在是38页\一共有62页\编辑于星期五检测器用灯现在是39页\一共有62页\编辑于星期五检测器用灯现在是40页\一共有62页\编辑于星期五检测器用灯现在是41页\一共有62页\编辑于星期五1.DAD的氘灯替代VWD的氘灯关闭灯电源,冷却5min以上将lamp设定的VWDconfiguration的灯类型改为2140-05902.灯能量测试以水为流动相灯预热10min以上在化学工作站Diagnosis状态下进行波长校准,将紫外灯的使用时间归零

DAD的氘灯替代VWD的氘灯现在是42页\一共有62页\编辑于星期五DAD故障诊断与维护要进行DAD故障诊断,单击DAD图标,然后选择ShowModuleTest选项,进入DAD测试选项画面DAD故障诊断测试共有8项内容：DADSelf-TestDADIntensityTestDADCellTest常做的DAD维护：更换灯清洗或更换流动池窗现在是43页\一共有62页\编辑于星期五Diagnosis界面故障原因分析故障选择框可能原因框

诊断过程故障分析样品分析过程中故障分析在Diagnosis画面中为用户提供了在诊断过程或样品分析过程中出现的问题以及可能的原因现在是44页\一共有62页\编辑于星期五样品溶剂溶解强度样品溶剂溶解能力强于流动相导致色谱峰峰形问题：裂分峰或宽峰色谱柱:ZORBAXStableBondSB-C8,4.6x150mm,5mm流动相:82%H2O:18%ACN进样体积:30mLA. 样品溶剂 100%乙腈010Time(min)12B. 样品溶剂 流动相010Time(min)12样品:1.Caffeine(咖啡因)2.Salicylamide(水杨酰胺)现在是45页\一共有62页\编辑于星期五中性分析时为何要使用缓冲液？色谱柱:ZORBAXEclipseXDB-C8,4.6x75mm,3.5µm流动相:44%A:56%甲醇流速:1.0mL/min 温度:25°C 检测:UV250nm含缓冲液的流动相可改善保留,分离和色谱峰峰形.样品:1.pranolol7.ibuprofenA=pH7.0水A=pH7.0水+25mM磷酸缓冲液012345Time(min)1234675012341,4,6,7235Time(min)现在是46页\一共有62页\编辑于星期五02.55.07.5Time(min)12345602.55.0Time(min)123456增加缓冲液浓度减少拖尾色谱柱: ZORBAXEclipseXDB-C8 4.6x150mm,5mm流动相: 40%磷酸盐缓冲液 60%ACN流速: 1.5mL/min.温度: 40°CUSPTf1.621.651.631.771.831.1210mM磷酸盐pH7.0USPTf1.411.501.331.391.361.0025mM磷酸盐pH7.0在中等pH下,离子强度较高,能有效掩蔽硅羟基的二次作用减少拖尾样品: TricyclicAntidepressants（三环抗抑郁剂）1.Desipramine（脱甲丙咪嗪）2.Nortriptyline（去甲替林）3.Doxepin（多塞平）4.Imipramine（丙咪嗪）5.Amitriptyline（阿米替林）6.TrImipramine（三甲丙咪嗪）现在是47页\一共有62页\编辑于星期五TEA对碱性成分峰形的影响02.55.0Time(min)12345色谱柱:ZORBAXEclipseXDB-C8,4.6x150mm,5mm流动相:85%25mMNa2HPO4:15%ACN流速:1.0mL/min.温度:35°CUSPTF5%1.1.29 2.1.333.1.634.2.355.1.57NoTEA10mMTEAUSPTF5%..265.1.14Time(min)0.02.55.035421pH7样品:1.Phenylpropanolamine（去甲麻黄碱）2.Ephedrine（麻黄素）3.Amphetamine（苯丙胺）4.MethAmphetamine（脱氧麻黄碱）5.Phenteramine（苯丁胺）现在是48页\一共有62页\编辑于星期五竞争酸对酸性组分的峰形的影响色谱柱: ZORBAXStableBondSB-C18 4.6x150mm,5mm流动相: 40%A:60%ACN流速: 1.0mL/min.温度: 室温样品: Ibuprofen（异丁苯丙酸）pKa4.4pH35mMNaH2PO4Tf=1.8pH35mMNaH2PO41%乙酸pH2.50.1%三氟乙酸Tf=1.0Tf=1.09A:乙酸和三氟乙酸均能作为竞争酸填加至流动相中三氟乙酸由于所需浓度较低,可作为首选现在是49页\一共有62页\编辑于星期五色谱柱技术–5988-6467EN流动相对色谱的影响(TE40)液相色谱柱:ZORBAXEclipseXDB-C8色谱柱尺寸:4.6x50mm3.5µm部件号:935967-906UV:254nm流速:1mL/min.室温UracilButylparabenNaphthaleneDipropylphthalateAcenaphthene尿嘧啶尼帕尔金丁酯萘二丙基邻苯二甲酸酯苊刻度混合:Dial-a-MixA:水B:甲醇,用泵抽取50%B体积比混合:Vol/Vol250mL水+250mL甲醇,用泵抽取100%混合液定容混合:Mix-to-Mark

250mL甲醇,用水定容至500mL,用泵抽取100%混合液预混合（重量比混合）:Premixed(w/w)200g甲醇+200g水,用泵抽取100%混合液改变流动相配比方式,可增加柱效（提高灵敏度）现在是50页\一共有62页\编辑于星期五液相分析-小诀窍提高柱温，可增加柱效（提高灵敏度）减小柱内径，可增加柱效（提高灵敏度）缩短检测器响应时间，可增加柱效（提高灵敏度）减小柱外体积，可增加柱效（提高灵敏度）使用超纯硅胶，可增加柱效（提高灵敏度）使用高能量氘灯，可增加柱效（提高灵敏度）使用中孔透光氘灯，可增加柱效（提高灵敏度）改变流动相pH，可增加柱效（提高灵敏度）改变有机相%

，可增加柱效（提高灵敏度）改变键合相

，可增加柱效（提高灵敏度）改变有机添加剂

，可增加柱效（提高灵敏度）改变流动相配比方式

，可增加柱效（提高灵敏度）现在是51页\一共有62页\编辑于星期五生化–多肽-5988-6316EN升温对于反相HPLC分离强疏水肽的影响(B27)Polypeptide流动相:A:含0.05%三氟乙酸的水B:含0.05%三氟乙酸的乙腈2%B/min进样量:100µL(50µg的6M脲/5%乙酸)UV:210nm流速:1mL/min室温液相色谱柱:ZORBAXStableBond-C18色谱柱尺寸:4.6x250mm5µm部件号:880975-902 室温300C400C500C600C700C提高柱温，可增加柱效（提高灵敏度）现在是52页\一共有62页\编辑于星期五环保样品: 除草剂 流动相: 52/480.1M乙酸钠/甲醇,pH6 流速: 0.45mL/min 温度: 40℃,90℃ 检测: UV 除草剂:柱温的影响Herbicides:EffectofColumnTemperature1.西玛津2.敌草隆3.扑灭津4.扑灭净5.异丙甲草胺1.Simazine2.Diuron3.Propazine4.Prometryn5.Metolachlor液相色谱柱:ZorbaxStableBond-C18色谱柱尺寸:4.6x150mm,5μm部件号:883975-902目录P62540℃90℃ 提高柱温，可增加柱效（提高灵敏度）现在是53页\一共有62页\编辑于星期五生物制药液相色谱柱:Zorbax300StableBond-C3色谱柱尺寸:4.6x150mm,5μm部件号:883995-909 肽类/蛋白质:升温对分离的影响Peptides/Proteins:EffectofElevatedTemperature样品: 多肽 流动相: A=5:95,乙腈:水,0.10%三氟乙酸(V/V%) B=95:5,乙腈:水,0.085%三氟乙酸(V/V%)梯度: 在20min内15-53%,后运行时间12min 流速: l.0mL/min 温度: 室温-60℃ 检测: UV215nm 1.亮氨酸脑啡呔2.血管紧张素II3.核糖核酸酶A4.牛胰岛素5.细胞色素C6.溶菌酶7.肌红蛋白8.碳酸酐酶1.LeucineEnkephalin2.AngiotensinII3.RnaseA4.Insulin(BOV)5.CytochromeC6.Lysozyme7.Myoglobin8.Carbonicanhydrase目录P611提高柱温，可增加柱效（提高灵敏度）现在是54页\一共有62页\编辑于星期五生物制药液相色谱柱:ZorbaxStableBond-C8色谱柱尺寸:150mm,5μm减小毛细管内径来提高低浓度样品的检测灵敏度ReducingCapillaryIDtoImproveSensitivityforConcentration-LimitedSamples流动相: 60%乙腈/40%水 流速: 内径0.3mm-4uL/min

内径0.5mm-10uL/min

内径1.0mm-50uL/min

内径4.6mm-1.0uL/min 温度: 室温 检测器: UV254nm 样品: 200ng联二苯(100nl) 目录P611减小柱径，可增加柱效（提高灵敏度）现在是55页\一共有62页\编辑于星期五色谱柱技术–5988-6454EN使用小体积色谱柱对于检测器响应时间的重要性(TE32)液相色谱柱:ZORBAXStableBond-C18色谱柱尺寸:4.6x15mm3.5µm部件号:831975-902流动相:乙腈:1%甲酸=32:68UV:254nm流速:1.0mL/min.30°C进样量:5µL响应时间:4.0秒响应时间:2.0秒响应时间:1.0秒响应时间:0.5秒响应时间:0.1秒尿嘧啶乙酰水杨酸N-乙酰苯胺UracilAcetylsalicylicacidAcetanilide缩短检测器响应时间，可增加柱效（提高灵敏度）现在是56页\一共有62页