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文档简介

第六章基因文库技术

(Thetechnologyofgenelibraries)

一、基因文库(Genelibraries)

汇集着基因组所有的DNA序列的重组体DNA群体为

基因文库(Genelibraries)或基因库(genelibraries)，

DNA文库(DNAlibraries)。

由基因组DNA所制成的基因文库称为基因组文库

(genomiclibraries)，由互补DNA所制成的称为

cDNA文库(cDNAlibraries)。

(bank，libraries，pool，reservoir)二、基因组文库

（genomiclibrary）1、基因组文库的概念将某种生物的全部遗传组成（DNA）切成适当长度的片段，连接在载体上，转化到宿主细胞中而构建的基因文库，就称为基因组文库。为了要分离到一个确实含有目的基因的克隆，究竟要筛选多少个重组体克隆呢？3、基因组文库的大小

1976年，L.Clark和J.Carbon提出了一个经验公式：

N=ln(1-p)/ln(1-x/y)N:完全基因文库所应包含的重组DNA的转化子克隆数（基因文库大小）P：在重组体群体中出现目的基因序列的概率（一般为99%）X：文库中每个克隆所含的外源DNA片段的平均长度Y：该生物基因组的大小（单倍体基因组长度）举例：

为了获得猪垂体生长激素PGH基因，用猪垂体细胞分离制取构建PGH基因文库时，用上式计算，

X：插入的DNA片段平均长度16kb,Y：单倍体长度3.30×106kb，

N=9.67×105个，如果实验中得到106个重组噬菌体，符合基因组文库大小的要求，即99%可能筛选出所需的PGH基因。三、cDNA文库1、概念：通过一系列的酶催作用，使总Poly(A)mRNA转变成双链cDNA群体，并插入到适当的载体分子上，然后再转化给大肠杆菌寄主菌株的细胞内。如此便构成了包含着所有基因编码序列的cDNA基因文库。分离细胞总RNA,然后从中纯化出主要含mRNA的部分合成第一链cDNAoligo(dT)引导的cDNA合成法、随机引物引导的cDNA合成法将mRNA-DNA杂交分子转变为双链cDNA分子自我引导合成法、RNaseH酶降解取代法将cDNA甲基化及加连接子将合成的双链cDNA重组到质粒载体或噬菌体载体上导入寄主细胞增殖

总RNA的完整性的鉴定libraries以λ噬菌体构建cDNA文库4、cDNA文库的优点1、cDNA克隆以mRNA为起始材料，这对于有些RNA病毒来说非常适用。因为它们的增殖并不经过DNA中间体。2、cDNA基因文库的筛选简单易行。3、每一个cDNA克隆都含有一种mRNA序列，在选择中出现假阳性几率比较低。4、克隆在细菌中表达的基因和基因序列结构的测定。5、表达序列标签的研究（expressedsequencetags,EST)5、cDNA文库的应用用于筛选基因。通过c

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