柱层析和薄层层析试验报告

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篇一：柱层析试验报告柱层析分开色素一、

1．了解柱层析的分类，把握各种柱层析的原理。

2．熟练把握吸附层析的原理和操作技术。

二、

叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、

胡萝卜素和叶黄素组成。从植物叶片中提取和分开叶绿体色素是对其认识和了解的前提。利

用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇或无水乙醇提取。分开色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。柱层析法是色谱法中的一种，它是根据

混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解

度不同将各组分分

离。常用的柱色谱有吸附色柱谱和分派柱色谱两类。吸附柱色谱寻常是在玻璃管中填入表面

积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶），当混合物的溶液

流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端，然后从柱顶参与溶剂（洗脱剂）洗脱。由于不同化合

物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速

度下移，形成色带。继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过

程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。本试验是把三氧化二铝填入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚

提取液倾于吸附柱上，色素即被吸附。由于色素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附

柱上排列成为不同的色层，再利用

吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行

洗脱，从而达到叶绿体主要的4种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）的分开。

三、原料：

新鲜的菠菜叶试剂：1．无水乙醇或95%乙醇5.三氧化二铝

2．石英砂6．饱和氯化钠溶液3．丙酮7.水硫酸钠

4．石油醚（60-90℃）8洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9器材：层析柱（1×30cm），研钵，蒸馏装置，脱脂棉，天平，烧杯，过滤漏斗，玻璃棒，锥形瓶，分液漏斗，试管，铁架台

四、1．色素的提取：

20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，

滤渣再用无水乙醇提取一次，合并

滤液，滤渣再参与30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤

液，转移至分液漏斗中,再参与40毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别参与20

毫升水震荡洗涤几次，直至下层无色，保存上层溶液，转移至三角瓶中，参与无水硫酸钠干

燥5分钟，备用.2．样品的浓缩：

将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5-8毫升左右，以备加样使用。

3．层析拄的制备：

15克碱性三氧化二铝参与30毫升石油醚搅拌，浸泡10min.。在层

析拄内参与一团棉花在底部，再参与石英砂0.5cm以上，然后用石油醚半充满柱子，再

将浸泡好的三氧化二铝倒入柱内，倒时应当缓慢，重复使用下面的石油醚，直到装完。用石

油醚洗柱内壁，顶部加一小团棉花，然后再填入石英砂0.5厘米高。

3．样品的分开层析：吸附层析分开

色素开启层析拄下部开关，向拄内参与2毫升浓缩液，至液体没入砂内，再参与石油醚冲洗拄壁，液体浸入砂内，加洗脱液开始层析，可以看到不同色带如图片

1，直至第一条色带洗脱完毕，在拄下面用试管接收第一条色带的洗脱液，如图片2。

五、

试验结果如下图：图一：层析柱中出现黄色带图二：提取出的黄色胡萝卜素结果分析：

洗脱过程中，首先有一条黄色的色带圈沿着层析柱下移，色带圈的各个方向的移动速度

并不是完全一致，原因在于层析柱的制作过程并不完全均一，使层析柱内部不均匀，以至于

色带各方向的移动速度不同。最终收集得到亮黄