DB50T 1366-2023 水质 喹诺酮类抗生素的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS13.060.01CCSZ10

DB50发布发布重庆市市场监督管理局2023050120230301重 庆 市 地 方 标 准DB50/T1366—2023水质喹诺酮类抗生素的测定液相色谱—串联质谱法DB50/T1366DB50/T1366—2023DB50/T1366DB50/T1366—2023II质量保证和质量控制 8废弃物的处理 8附录A （规范性） 方法的检出限和测定下限 9附录B （资料性） 方法的精密度和正确度 10目  次前 言 II范围 1规范性引用文件 1术语和定义 1方法原理 1干扰与消除 1试剂和材料 1仪器和设备 2样品 2分析步骤 3结果计算与表示 6精密度和正确度 7IIII前 言本本文件按照GB/T1.1－2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由重庆市生态环境监测中心提出。本文件由重庆市生态环境局归口并组织实施。本文件主要起草单位：重庆市生态环境监测中心。本文件主要起草人：张晓岭、郑璇、张文斌、李新宇、李莉、田隽、刘敏、李晓、蹇川、朱明吉、邹敏、邹素兰、张君、熊强、郭志顺。11警告：本方法所使用的有机溶剂对人体健康有害，试剂配制和样品前处理过程应在通风橱内进行，操作时应按规定要求佩带防护器具，避免接触皮肤和衣服。除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为新制备的超纯水。氢氧化钠（NaOH）：分析纯。盐酸（HCl）：1mol/L，分析纯。6 试剂和材料制络合物的形成。5 干扰与消除水中的喹诺酮类抗生素经固相萃取柱富集，用液相色谱-串联质谱分离检测。根据保留时间和特征离子峰定性，内标法定量。4 方法原理本文件没有需要界定的术语和定义。3 术语和定义水质 喹诺酮类抗生素的测定液相色谱—串联质谱法范围本文件规定了液相色谱-串联质谱对水中13种喹诺酮类抗生素进行测定的方法。13种喹诺酮类抗生素的测定。若通过验证，本文件也可适用于其他喹诺酮类抗生素。规范性引用文件（包括所有的修改单适用于本文件。HJ91.1污水监测技术规范HJ91.2地表水环境质量监测技术规范HJ164 地下水环境监测技术规范甲醇（CH3OH）：农残级或等同规格。甲酸（HCOOH）：色谱纯。乙腈（CH3CN）：农残级或等同规格。甲酸溶液（0.05%）50μl甲酸（6.5）100ml实验用水中。甲酸/90ml甲酸溶液（6.7）10ml乙腈（6.6）混合，摇匀。乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA）：分析纯。标准贮备液：ρ=1.00g/L可直接购买有证标准溶液，也可用标准物质配制，标准物质纯度大于99.0%。用甲醇（6.4）溶解，贮备液在-10℃以下冷冻、避光保存不超过6个月或参照制造商的产品说明。混合标准中间液：ρ=100μg/ml移取适量13种喹诺酮类抗生素标准贮备液（6.10）按需要用甲醇（6.4）稀释，中间液于-10℃以下冷冻、避光保存不超过3个月。混合标准使用液：ρ=1.00μg/ml（参考浓度）将喹诺酮类抗生素标准中间液（6.11）按需要用甲醇（6.4）稀释，-10℃以下冷冻，避光保存不超过7天。内标贮备液：ρ=1.00g/L5NorfoxacnD6.4。贮备液在-10℃以下冷冻、避光保存不超过6个月或参照制造商的产品说明。内标中间液：ρ=100μg/ml移取适量内标贮备液（6.13）按需要用甲醇（6.4）稀释，内标混合中间液在-10℃以下冷冻、避光保存不超过3个月或参照制造商的产品说明。内标使用液：ρ=10.0μg/ml（参考浓度）将内标混合中间液（6.14）按需要用甲醇（6.4）稀释，-10℃以下冷冻，避光保存不超过7天。固相萃取柱：填料为二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物（HLB）或同等柱效的萃取柱，规格为6ml/150mg。滤膜：0.22μ0.45μm玻璃纤维聚膜或其他材质等效滤膜。6.18 氮气：纯度≥99.99%。6.19 氩气：纯度≥99.99%。仪器和设备液相色谱/串联质谱仪：配有电喷雾离子化源(ESI)。色谱柱：C18100mm×2.1mm1.9µm。浓缩装置：K-D浓缩器或氮吹浓缩仪等性能相当的设备。固相萃取装置：自动或手动，流速可调节。一般实验室常用仪器。样品采集与保存参照HJ91.1、HJ91.2和HJ164的相关规定采集样品于4000ml磨口棕色玻璃瓶中，水样应充满采样瓶，不留液上空间。样品采集后应尽快进行分析。如暂不能分析，应在0℃～4℃避光保存，14天内完成萃取。2339.1.2 质谱分析条件正离子模式：ESI喷雾电压(sprayvoltage)：3000V毛细管温度：350℃鞘气(N2)流速：45L/min辅助气(N2)流速：15L/min碰撞气(Ar)压力：200mPa柱温：35℃；进样量10μl；具体参数见表1。表1 液相色谱流动相梯度洗脱程序样品制备将固相萃取柱（6.16）固定在固相萃取装置(7.4)上，分别用10ml甲醇（6.4）和10ml实验用水活化0.45μm1000ml1gNa2EDTA（6.9），用氢氧化钠（6.2）和盐酸（6.3）调节pH值为至6.0，水样以低于10ml/min（约3滴/秒～4滴/秒）的流速通过小柱，用10ml实验用水洗涤小柱，用氮气（6.18）吹干小柱，再用10ml甲醇（6.4）洗脱，收集洗脱液于洁净试管中，洗脱液经浓缩装置（7.3）浓缩至干，加入内标使用液（6.15）5.00μl，用甲酸/乙腈溶液（6.8）定容至1ml，经0.22μm滤膜（6.17）过滤，置于样品瓶中，待测。当样品体积为1000ml，浓缩后定容体积为1.0ml，进样体积为10μl，13种喹诺酮类抗生素的检出限为1ng/L～2ng/L，测定下限为4ng/L～8ng/L，详见附录A。空白样品的制备以实验用水代替样品，按照样品制备（8.2）相同操作步骤，制备样品。分析步骤仪器参考条件液相色谱分析条件流动相(6.5)，流动相（6.6）1，流速：200.0μl/min；时间min流动相A%流动相B%流动相C%0.00900101.00900104.0020984.5002987.0002987.50900109.0090010449.1.3 仪器调谐按照仪器使用说明书在规定时间和频次内对液相色谱-串联质谱仪进行仪器质量数和灵敏度校正，以确保仪器处于最佳测试状态。9.2 校准选择反应监测(SRM)，具体参数见表2。表2 目标化合物的选择反应监测条件序号化合物母离子m/z子离子m/z碰撞能量V锥孔电压V1依诺沙星321.1232.0a3377321.1303.020772麻保沙星363.172.22284363.1345.0a18843诺氟沙星-D5325.1230.9a3868325.1281.015684诺氟沙星320.1230.9a3785320.1282.029855氧氟沙星362.1261.02684362.1318.1a17846培氟沙星334.1233.02284334.1290.1a16847环丙沙星332.1231.03677332.1288.1a18778氟罗沙星370.1269.02484370.1326.0a17819丹诺沙星358.1255.03683358.1314.1a158310洛美沙星352.1265.02084352.1308.1a158411恩诺沙星360.1245.02486360.1316.1a178612沙拉沙星386.1299.02584386.1342.1a148413双氟沙星400.1299.02794400.1356.1a179414氟甲喹262.1202.03275262.1244.0a1875注：a为定量子离子标准曲线的绘制（6.12）于甲酸/（6.8）5个浓度点的种喹诺酮类的质量浓度分别为2.00μg/L5.00μg/L10.0μg/L20.0μg/L50.0μg/L100.0μg/L（此为参考浓度），于每毫升标准系列中加入5.00μl内标标准使用液（6.15），使内标的质量浓度为50.0μg/L，贮存在棕色进样小瓶中，待测。yaxb (1)式中：x——目标组分浓度的数值，单位为微克每升（μg/L）；y——目标组分和内标物的峰面积（或峰高）比值与内标物浓度乘积的数值；a——校准曲线斜率的数值；b——校准曲线截距的数值。标准参考谱图在本标准推荐的仪器参考条件下，目标化合物的提取离子流色谱图见图1。RT:0.00-7.0010050010050

2.212.40

2.752.973.15

3.56

3.954.15

4.344.40

4.554.794.90

NL:3.55E6TICF:+cESISRMms2358.114[254.973-254.975,314.069-314.071]MS005FA-acetonitrile-methanolNL:2.56E6TICF:+cESISRMms2360.114[245.001-245.003,316.069-316.071]MS005FA-acetonitrile-methanol010050

2.10

2.422.69

2.98

3.28

3.834.024.15

4.27

4.664.824.97

NL:5.31E6TICF:+cESISRMms2362.113[261.028-261.030,318.093-318.095]MS005FA-acetonitrile-methanol010050

2.20

2.522.612.78

3.113.353.563.823.93

4.23

4.564.734.90

NL:1.31E6TICF:+cESISRMms2363.105[72.214-72.216,345.017-345.019]MS005FA-acetonitrile-methanol010050

2.27

2.67

3.013.20

3.523.783.95

4.32

4.484.664.81

NL:1.53E6TICF:+cESISRMms2370.072[268.994-268.996,326.048-326.050]MS005FA-acetonitrile-methanol010050

2.122.31

2.56

2.792.92

3.223.473.673.853.99

4.554.814.954.55

NL:2.49E5TICF:+cESISRMms2386.111[299.028-299.030,342.098-342.100]MS005FA-acetonitrile-methanol02.19 2.522.642.963.173.343.543.814.062.19 2.522.642.963.173.343.543.814.064.244.804.95500

2.26

2.52

2.96

3.49

3.974.144.34

4.58

4.704.89

NL:1.37E6TICF:+cESISRMms2400.116[299.016-299.018,356.100-356.102]MS005FA-acetonitrile-methanol0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5Time(min)5RT:0.00-7.0010050010050010050

2.11

2.37

2.70

2.933.13

4.263.543.723.874.07 4.584.734.21

5.37

6.136.256.426.636.92

NL:1.46E7TICF:+cESISRMms2262.069[201.998-202.000,244.045-244.047]MS005FA-acetonitrile-methanolNL:1.70E6TICF:+cESISRMms2320.074[230.938-230.940,281.996-281.998]MS005FA-acetonitrile-methanolNL:2.33E6TICF:+cESISRMms2321.124[232.024-232.026,303.077-303.079]MS005FA-acetonitrile-methanol010050

2.152.36

2.702.89

3.323.41

3.743.90

4.25

4.534.704.92

NL:1.27E6TICF:+cESISRMms2325.086[230.923-230.925,281.046-281.048]MS005FA-acetonitrile-methanol010050

2.152.332.48

2.77

3.07

3.403.623.924.09 4.604.794.954.31

NL:8.96E5TICF:+cESISRMms2332.076[230.967-230.969,288.098-288.100]MS005FA-acetonitrile-methanol010050

2.11

2.372.622.77

3.13

3.36

3.653.804.02

4.30

4.504.644.94

NL:4.37E6TICF:+cESISRMms2334.098[232.998-233.000,290.118-290.120]MS005FA-acetonitrile-methanol02.172.172.352.61 2.943.083.303.583.864.114.204.604.744.93500

2.382.472.732.87

3.143.363.493.763.86

4.37

4.644.764.95

NL:5.50E5TICF:+cESISRMms2352.087[265.033-265.035,308.070-308.072]MS005FA-acetonitrile-methanol6式中：6式中：Ksam——样品中某组分定性子离子的相对丰度的数值，单位为百分比（%）；A2——样品中某组分二级质谱定性子离子的峰面积（或峰高）；A1——样品中某组分二级质谱定量子离子的峰面积(或峰高)。1AsamK 100 (2)每种被测组分选择1个母离子和2个子离子进行监测。在相同的实验条件下，样品中待测组分的保留时间与标准样品中目标组分的保留时间比较，相对标准偏差的绝对值应小于2.5%；且待测样品谱图中，各组分定性离子的相对丰度（Ksam见式2）与浓度接近的标准溶液谱图中对应的定性离子相对丰度（Kstd见式3）进行比较，偏差在表3规定的最大允许偏差范围内，则可判定为样品中存在对应的待测物。10.1 定性分析10 结果计算与表示按与样品测定相同的仪器分析条件进行空白样品的测定。9.3.2 空白试验按照与绘制校准曲线相同的仪器分析条件进行测定。9.3.1 样品测定9.3 测定Time(min)图1 13种喹诺酮类抗生素和内标物的提取离子流色谱图K Astd2100

..............................................................................(3)AstdAstd1式中：Kstd——标准样品中某组分定性子离子的相对丰度,单位为百分比（%）；Astd2——标准样品中某组分二级质谱定性子离子的峰面积（或峰高）；Astd1——标准样品中某组分二级质谱定量子离子的峰面积(或峰高)。表3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差Kstd%Ksam最大允许偏差%Kstd＞502020＜Kstd≤502510＜Kstd≤2030Kstd≤1050结果计算样品中的目标物的质量浓度按公式（4）11f 4)1000式中：ρ——样品中目标物的质量浓度的数值，单位为纳克每升（ng/L）；ρ1——从标准曲线上查得的样品中目标物的浓度的数值，单位为微克每升(μg/L)；f——稀释倍数。结果表示测定结果小数点后位数的保留与方法检出限一致，最多保留三位有效数字。精密度和正确度精密度65.00ng/L、10.0ng/L20.0ng/L6实验室内相对标准偏差分别为：5.7%～11.9%，1.3%～13.8%，2.3%～13.8%；实验室间相对标准偏差分别为：8.1%～18.9%，5.4%～10.6%，4.9%～10.5%；重复性限范围为：0.72ng/L～0.93ng/L，1.07ng/L～2.92ng/L，2.98ng/L～5.39ng/L；再现性范围为：1.07ng/L～1.96ng/L，1.64ng/L～3.81ng/L，4.19ng/L～6.76ng/L。665.00ng/L10.0ng/L：实验室内相对标准偏差分别为：9.4%～29.9%和5.4%～29.2%；788实验中产生的废物应分类收集、统一保管，并做好相应标识，依法委托有资质的单位进行处理。每次分析至少做一个实验室空白，实验室空白中目标化合物的浓度应低于方法检出限。校准每批样品应建立标准曲线，相关系数应≥0.99。每20个样品或每批次（≤20个样品/批）应测定一个校准曲线中间浓度点标准溶液，其测定结果与该点浓度的相对误差应在±20%以内。精密度每20个样品或每批次（少于20个样品/批）应分析一个平行样品。平行样的相对标准偏差应控制在25%以内。12.4 正确度每20个样品或每批次（少于20个样品/批）应做1个基体加标，加标回收率应在50%～150%。13 废弃物的处理实验室间相对标准偏差分别为：16.0%～23.6%和11.4%～21.8%；重复性限范围为：2.17ng/L～3.96ng/L和3.83ng/L～6.69ng/L；再现性范围为：2.21ng/L～3.96ng/L和4.03ng/L～6.69ng/L。6610.0ng/L20.0ng/L：实验室内相对标准偏差分别为：8.2～29.8和4.5%～27.9%；实验室间相对标准偏差分别为：17.1%～24.3%和13.3%～20.3%；重复性限范围为：5.07ng/L～6.79ng/L和7.20ng/L～10.4ng/L；再现性范围为：5.18ng/L～8.10ng/L和7.86ng/L～11.9ng/L。正确度65.00ng/L、10.0ng/L，加标回收率分别为：65.7～13680.3～130610.0ng/L、20.0ng/L，加标回收率分别为：66.5～12871.8～124B。质量保证和质量控制空白分析99附 录 A（规范性）方法的检出限和测定下限本方法中目标化合物的检出限、测定下限和保留时间见表A.1。表A.1 方法的检出限、测定下限和保留时间序号化合物名称英文名称CAS号检出限ng/L测定下限ng/L保留时间min1依诺沙星enoxacin84294-96-2284.212麻保沙星marbofloxacin115550-35-1284.233诺氟沙星norfloxacin70458-96-7284.264氧氟沙星Ofloxacin82419-36-1284.275培氟沙星pefloxacin70458-95-6284.306环丙沙星ciprofloxacin85721-33-1144.317氟罗沙星fleroxacin79660-72-3284.328丹诺沙星danofloxacin119478-55-6284.349洛美沙星lomefloxacin98079-51-7284.3710恩诺沙星enrofloxacin93106-60-6284.4011沙拉沙星sarafloxacin98105-99-8284.5512双氟沙星difloxacin98106-17-3284.5813氟甲喹flumequine42835-25-6285.37DB50/T1366DB50/T1366—2023DB50/T1366DB50/T1366—20231010附 录 B（资料性）方法的精密度和正确度本方法的重复性、再现性等精密度指标见表B.1～表B.3。表B.1 方法的精密度(空白加标）序号化合物名称精密度统计结果加标浓度ng/L总均值ng/L实验室内相对标准偏差%实验室间相对标准偏差%重复性限rng/L再现性限Rng/L1依诺沙星5.003.416.6～10.618.90.841.9610.011.03.2～10.26.22.052.6820.019.83.1～13.89.14.426.462麻保沙星5.003.317.7～11.614.80.881.5910.07.713.6～9.16.51.381.8820.020.64.1～13.07.65.396.583诺氟沙星5.003.337.2～10.215.40.851.6310.07.933.0～11.58.51.522.3420.018.15.0～7.76.63.224.464氧氟沙星5.003.107.3～10.512.80.851.3510.08.593.4～12.710.62.163.2320.022.05.4～12.65.35.395.905培氟沙星5.003.267.4～9.610.80.751.2010.07.972.4～13.86.81.762.2120.019.15.1～9.56.04.074.96环丙沙星5.003.226.4～9.916.40.721.6210.011.04.8～11.38.82.923.8120.018.63.2～10.05.83.434.367氟罗沙星5.003.238.7～11.913.10.931.4610.08.293.2～7.47.51.172.0320.017.44.1～13.85.54.464.878丹诺沙星5.003.327.9～10.514.30.881.5510.08.573.1～11.89.01.642.6220.021.32.4～11.24.94.004.679洛美沙星5.003.189.0～11.418.10.931.8210.08.033.8～12.66.21.632.0420.020.34.3～9.16.14.065.081111表B.1（续）序号化合物名称精密度统计结果加标浓度ng/L总均值ng/L实验室内相对标准偏差%实验室间相对标准偏差%重复性限rng/L再现性限Rng/L10恩诺沙星5.003.405.9～9.112.10.771.3510.08.471.3～7.77.41.202.0820.017.66.3～11.410.54.756.7611沙拉沙星5.003.287.6～10.18.10.851.0710.08.111.6～9.26.71.071.8120.018.43.4～10.68.44.135.7512双氟沙星5.003.315.7～10.513.80.721.4410.08.163.6～7.25.41.181.6420.018.52.3～9.36.12.984.1913氟甲喹5.003.337.9～10.910.90.871.2910.011.64.2～11.85.52.612.9720.018.62.7～12.18.34.135.751212表B.2 方法的精密度(地表水样品加标）序号化合物名称精密度统计结果加标浓度ng/L总均值ng/L实验室内相对标准偏差%实验室间相对标准偏差%重复性限rng/L再现性限Rng/L1依诺沙星5.005.219.4～28.620.63.063.2310.010.87.3～25.518.55.796.072麻保沙星5.005.9210.0～28.321.63.683.6810.011.313.2～28.020.46.696.693诺氟沙星5.005.8918.9～28.823.63.963.9610.012.111.9～24.418.46.436.434氧氟沙星5.004.1716.9～28.023.42.853.1510.09.5211.2～28.221.86.126.595培氟沙星5.004.6214.2～28.923.53.093.2710.09.3111.2～26.218.44.904.906环丙沙星5.005.859.6～23.118.22.993.0810.011.67.4～15.411.43.834.527氟罗沙星5.004.4312.3～21.617.02.172.2110.08.5512.2～21.016.94.084.088丹诺沙星5.005.9411.5～18.816.02.792.8910.011.79.9～29.217.86.546.549洛美沙星5.005.5014.2～29.221.13.403.7010.09.608.3～26.018.65.315.3110恩诺沙星5.005.5512.4～26.422.33.543.5410.011.013.8～21.216.25.096.0711沙拉沙星5.005.5317.1～29.921.13.283.2710.010.810.2～28.618.96.326.4712双氟沙星5.005.5614.0～25.719.53.153.3110.012.010.2～25.416.85.865.8613氟甲喹5.005.7714.6～25.619.73.213.3610.011.45.4～23.115.35.335.351313表B.3 方法的精密度(废水样品加标）序号化合物名称精密度统计结果加标浓度ng/L总均值ng/L实验室内相对标准偏差%实验室间相对标准偏差%重复性限rng/L再现性限Rng/L1依诺沙星10.08.759.9～24.120.25.185.1820.019.010.0～20.215.18.348.342麻保沙星10.011.711.4～24.919.56.556.6020.021.67.3～25.515.810.410.83诺氟沙星10.010.917.1～23.421.36.687.7920.019.48.4～23.714.18.029.794氧氟沙星10.08.9817.1～29.622.15.575.7220.018.64.5～19.713.57.529.025培氟沙星10.010.612.5～25.217.15.075.6520.019.38.7～21.613.97.628.346环丙沙星10.09.1915.4～25.71