淋球菌培养与鉴定

什么是淋球菌？共同点：革兰阴性球菌、单个或成双排列、无芽孢、无鞭毛、有菌毛触酶试验（+）氧化酶试验（+）不同点：对糖分解能力、硝酸盐还原能力和DNA合成酶

淋球菌即淋病奈瑟菌，属于奈瑟菌属。第一页，共22页。淋球菌形态淋球菌，是一种革兰阴性双球菌，呈卵圆形或肾形，成对排列，直径约0．6—0．8~m，常位于多形核白细胞的胞浆内，慢性期则在细胞外。生长适宜温度为37℃—38℃，淋菌不耐热，干燥环境存活1—2小时，55℃5分钟立即死亡，附着在衣裤和卧具上的淋菌最多只能生存24小时，一般消毒剂易将其杀死。第二页，共22页。淋球菌形态第三页，共22页。致病性传染方式：成人性接触初生婴儿患病母亲产道感染致病物质：菌毛外膜蛋白PI：中性粒细胞受损外膜蛋白PII：黏附外膜蛋白PIII：阻抑抗体活性IgA1酶:破坏粘膜局部抗体第四页，共22页。所致疾病男性——急性淋菌性前尿道炎女性——淋菌性宫颈炎、尿道炎初生婴儿——脓漏眼

发展：男性——后尿道炎、前列腺炎、精囊炎、附睾炎等女性——子宫内膜炎、输卵管炎等后遗症：不育、不孕、异位妊娠第五页，共22页。淋球菌感染淋病是由奈瑟淋球菌所致的泌尿生殖系统感染。不仅可引起男性尿道炎、女性宫颈或尿道炎，还可经血行播散引起菌血症。临床表现因感染的人群不同，部位不同而有差别第六页，共22页。实验室鉴别淋球菌直接涂片：取尿道或宫颈脓性分泌物涂片，作革兰染色，镜下可见大量多形核白细胞，细胞内可见数量不等的革兰阴性双球菌。涂片对女性检出率低，有假阴性，必要时应作培养。细菌培养：标本在选择性培养基上培养，可出现典型菌落，氧化酶试验阳性，镜检可见到革兰阴性双球菌，还可用检测淋球菌DNA，直接免疫荧光试验协助确诊。第七页，共22页。淋球菌培养淋球菌是淋病的病原菌，为实验室确诊淋病提供依据。（培养法为确诊淋病的金标准）淋球菌药敏试验，测定药物抑菌或杀菌能力，以便准确有效利用药敏进行治疗。第八页，共22页。淋球菌培养条件淋球菌的营养要求较复杂，所用的培养基中应含有动物蛋白及细菌生长所需的各种因子。目前国内常用的是血液琼脂或巧克力琼脂。国外常用的培养基有Thayer-Martin(T-M)培养基、NewYorkCity(NYC)培养基和Martin-Lewis(ML)培养基等。第九页，共22页。T-M培养基T-M培养基是在GC基础培养基中，加入血红蛋白(1%)、抗生素(万古霉素3g/ml、粘菌素7.5g/ml和制霉菌素12.5g/ml)和淋球菌增菌剂，使绝大多数杂菌被抑制而淋球菌菌落长得较大，在乎皿中几乎呈纯培养，从而大大提高了由子宫颈、尿道，尤其是咽和直肠部位分离出淋菌的阳性率。第十页，共22页。淋球菌培养条件淋球菌对外环境变化颇为敏感，对寒冷和干燥抵抗力很弱。因此，为了保证培养有足够的成功率，取材后应立即接种，标本离体时间越短越好。培养的最适温度为35℃~37℃，超过38.5℃或低于30℃便生长不良。因此，孵育的温度要恒定。淋球菌为需氧菌，但最初从人体分离时，为促进生长，需用5%二氧化碳环境培养。第十一页，共22页。淋球菌培养关键取材部位准确女性病人标本：取宫颈内膜分泌物男性病人标本：取尿道口脓性分泌物培养基预温立即接种最好床边接种合适的培养基CO2培养第十二页，共22页。淋球菌鉴定分泌物直接涂片染色分离培养可疑菌落涂片染色生化反应初步报告生长特性第十三页，共22页。平板生长特性经24h~48h的培养后，可形成圆形、凸起、湿润、光滑、半透明或灰白色菌落，似露水珠，易乳化，直径为0.5mm~1.0mm。第十四页，共22页。平板生长形态第十五页，共22页。镜检形态从菌落上取材作涂片，革兰染色后可见到菌的大小及染色的深度有差异，排列也不一致，呈典型革兰阴性双球菌。第十六页，共22页。镜检形态第十七页，共22页。镜检形态来自泌尿生殖道符合初步鉴定标准的分离株，一般可诊断为淋球菌，准确率达98%。对于菌落形态不典型的分离株，来自咽部、眼睛或其他泌尿生殖道外部位的分离株，应作确诊试验。第十八页，共22页。鉴定试验氧化酶试验糖分解试验（葡萄糖、麦芽糖、蔗糖）30％过氧化氢试验第十九页，共22页。鉴定依据形态染色典型：革兰阴性球菌培养特性：光滑、湿润、易乳化菌落生化反应：氧化酶阳性、仅分解葡萄糖（麦芽糖、乳糖、蔗糖、果糖均不分解）第二十页，共22页。奈瑟菌属鉴定菌名生长产酸硝酸盐还原DNA酶巧克力平皿上特点巧克力或血琼脂(22℃)营养琼脂(35℃)葡萄糖麦芽糖乳糖蔗糖果糖淋病奈瑟菌--+------光滑,灰白色,透明脑膜炎奈瑟菌--++-----光滑,灰,无色,透明,个别淡黄粘膜奈瑟菌++++-+++-黄绿,光滑卡他布兰汉d+-----++灰白→棕色、易乳化奈瑟菌属与布兰汉菌属的鉴别注意：d:表示不定第二十一页，共22页。