一测多评法同时测定补骨脂主要化学成分

一测多评法同时测定补骨脂主要化学成分中药补骨脂,为豆科植物补骨脂(PsoraleacorylifoliaL.)干燥成熟果实。其性温、味辛,具有补肾助阳,温中止泻,纳气平喘之功。其中主要活性成分补骨脂素(psoralen)和异补骨脂素(isopsoralen)等香豆素类成分,具有较强的光敏化作用和镇静、解痉、止血等作用[1-2],是治疗白癜风、斑秃、牛皮癣以及瘤样皮肤病的有效药物。近来研究表明,补骨脂素对多种动物及人的肿瘤生长有明显抑制作用[3-4]。1实验方法1.1色谱条件色谱柱:Purospher○RSTARLPRP-18endcapped(250mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-水,梯度洗脱程序;流速1.0mL/min;检测波长250nm;进样量10μL;柱温30℃。1.2对照品溶液的制备分别精密称取补骨脂素、异补骨脂素、异补骨脂二氢黄酮、新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮、补骨脂宁、BroussochalconeB、补骨脂定、补骨脂二氢黄酮甲醚、异补骨脂查尔酮和CorylifolA适量,置同一棕色10mL容量瓶中,加甲醇溶解至刻度,摇匀,制成浓度分别为0.3000mg/mL、0.3500mg/mL、0.3000mg/mL、0.2700mg/mL、0.3000mg/mL、0.1200mg/mL、0.2000mg/mL、0.2500mg/mL、0.4500mg/mL、0.3600mg/mL和0.2000mg/mL的混合对照品溶液。于4℃保存备用。1.3供试品溶液的制备取补骨脂生品粗粉(过60目筛)各约0.1g,精密称定,置圆底烧瓶中,加甲醇50mL,加热回流2h,放冷,滤过,滤液置100mL蒸发皿中,在水浴锅上蒸至有少量滤液残留即可,用甲醇将蒸发皿中残留的滤液和残渣完全转移至10mL容量瓶中,摇匀,过0.45μm微孔滤膜作为供试品溶液。于4℃保存备用。2方法学考察2.1线性关系考察取2.2项下的混合对照品溶液,精确稀释2倍、4倍、8倍、16倍和32倍。精密吸取以上6份混合对照品溶液各10μL注入高效液相色谱仪,测定。以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,计算回归方程,结果R>0.999,线性良好。2.2精密度试验精密吸取2.2项下的混合对照品溶液5μL连续进样6次,记录补骨脂各主要成分的峰面积积分值,计算RSD,结果精密度各成分峰面积的RSD≤2.92%,表明仪器精密度良好。2.3稳定性及重复性试验取生品供试品溶液分别在0,2,4,6,8,10,12h进样,测定补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮、补骨脂宁、BroussochalconeB、补骨脂定、补骨脂二氢黄酮甲醚、异补骨脂查尔酮、CorylifolA、补骨脂查尔酮和补骨脂酚的峰面积。RSD≤3.43%,表明样品在12h内较为稳定。测得的平均峰面积的RSD≤2.93%,表明该方法的重现性较好。2.4回收率试验取已测含量的生品粗粉约0.1g,6份,精密称定补骨脂各对照品,加入,按"2.3"项制得供试品溶液,按"2.1"项中色谱条件考察结果测定补骨脂中各化学成分的含量,计算加样回收率。回收率95.52%~104.85%,RSD≤2.61%。3含量测定结果补骨脂生品和盐炙品,按2.3项下制备,2.1项下色谱条件进行分析,标准曲线法计算补骨脂素、异补骨脂素、异补骨脂二氢黄酮、新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮、补骨脂宁、BroussochaloneB、补骨脂定、补骨脂二氢黄酮甲醚、异补骨脂查尔酮、CorylifolA的含量。4一测多评法校正因子的计算,见表1。5讨论采用一测多评法测定补骨脂中2种常见香豆素成分补骨脂素和异补骨脂素,补骨脂中8中黄酮成分,新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮、补骨脂宁、BroussoclaloneB、异补骨脂查尔酮、补骨脂二氢黄酮甲醚以及CoryifolA,一测多评法可在缺少对照品的情况下,依然能够对其它成分进行定量。本文采用一测多评法所得补骨脂药材中8种黄酮类成分含量与常规的外标法所测得的含量间没有显著差异,说明在对照品缺乏的情况下,通过一测多评法实现补骨脂药材同类成分的含量测定是准确的、可行的。参考文献:[1]朱兆荣,李玉强,刘娟,等.补骨脂总黄酮抗氧化作用研究[J].中国兽药杂志,2005,39(2):18-20.[2]HerrmannG,BrenneisenP,WlaschekM,eta1.Psoralenphotoactivationpromotesmorphologicalandfunctionalchangesinfibroblastsinvitroreminiscentofcellularsenescence[J].JournalofCellScience,1998,111(6):759-767.[3]李冬云,陈信义,刘瑞娟.单味中药成分逆转白血病多药耐药基础研究评述[J].中国中医药信息杂志,