应用高速逆流色谱分离罗布麻花中化学成分课件

应用高速逆流色谱分离罗布麻花中化学成分课件第1页，共24页，2023年，2月20日，星期四目录

一、绪言二、实验方法三、结果分析与讨论四、结论五、致谢第2页，共24页，2023年，2月20日，星期四一、绪言1.1罗布麻花简介

罗布麻为夹竹桃科野生植物，花中含有种类和含量均十分丰富的黄酮类化合物，不仅在医疗上有十分广泛的应用，还有美容保健等功效。1.2高速逆流色谱一种新型现代色谱分离技术，基于液-液分配色谱原理，具有制备量大，样品无损耗，分离纯度高，重现性好，速度快等优点第3页，共24页，2023年，2月20日，星期四二、实验方法2.1实验材料与仪器2.1.1实验材料

罗布麻花药材采摘自新疆罗布泊地区，经长春师范学院中心实验室张语迟鉴定；D101大孔树脂购自南开大学化工厂；

提取制备用乙醇、甲醇、正丁醇、乙酸乙酯和正己烷为分析纯试剂(北京化工厂)；色谱用乙腈、乙酸为分析纯试剂(美国Fisher公司)；

超纯水为本研究部门自制(18.2ΩPa)

第4页，共24页，2023年，2月20日，星期四2.1.2实验仪器

Waters2695高效液相色谱,配备Waters2998二极管阵列检测器(美国Waters公司)；AgilentC18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm,美国Agilent公司)；FiniganLCQTM

电喷雾质谱

(美国Thermo-FisherScientific公司)；DEMINI型高速逆流色谱仪

(英国DynamicExtractions公司)，内有两个制备性色谱柱，柱体积为135mL；转速范围为0–2000rpm；SanoriusBSl10S分析天平(十万分之一，北京赛多利斯有限公司)；

纯水器(法国Millipore公司)；

0.45μm滤膜

(美国Agilent公司)；第5页，共24页，2023年，2月20日，星期四2.2试验方法

2.2.1溶剂的选择

各组成溶剂分液漏斗中摇匀，静止分别取2mL上相和下相溶解少量样品粉末分别取1mL上下层溶液于不同试管90oC水浴加热挥发至干1mL色谱甲醇溶解0.45µm微孔滤膜过滤高效液相色谱检测第6页，共24页，2023年，2月20日，星期四2.2.2样品制备罗布麻花粉末100.002g2000mL60%乙醇溶液200mL水溶解上D-101型大孔树脂柱制得罗布麻花粗提物，总黄酮回流提取1h(3次)合并滤液，浓缩至干先用5倍柱体积的水洗脱弃去再用5倍柱体积的60%乙醇溶液洗脱收集并浓缩至干第7页，共24页，2023年，2月20日，星期四2.2.3溶剂系统的配制

按照乙酸乙酯―乙腈―水―乙酸为5:3:5:0.05(v:v:v:v)，分液漏斗中，摇匀，静止。下层溶液作为流动相，上层溶液作为固定相。2.2.4逆流色谱实验参数的设置

固定相流速：10mL/min

流动相流速：2.5mL/min

柱体积：150mL进样量：150mg注入样品量：2mL（从30min时开始接流分）检测波长：254nm

转速：1400rpm

柱温：30oC

运行：180min

第8页，共24页，2023年，2月20日，星期四2.2.5利用高效液相色谱进行纯度检测

二元线性梯度洗脱：

流动相A为0.2%

醋酸溶液，流动相B为乙腈，流动相梯度程序：0-15min,5%B，15-60min，5%-40%B流速:1.2mL/min

样品进样量:10μL

检测波长：254nm

柱温:28oC

第9页，共24页，2023年，2月20日，星期四三、结果分析与讨论3.1利用高效液相色谱筛选逆流色谱溶剂体系

第10页，共24页，2023年，2月20日，星期四

3.2逆流色谱分离

图1：罗布麻花总黄酮的制备型逆流色谱图第11页，共24页，2023年，2月20日，星期四3.3.流分纯度检测及结构鉴定

图2：罗布麻花提取物的高效液相色谱图提取物中含有13种化学成分，共有10个化合物通过高速逆流色谱洗脱下来.第12页，共24页，2023年，2月20日，星期四流分1的纯度检测及结构鉴定

图3：流分1的高效液相色谱图及紫外光谱图通过紫外光谱数据、质谱数据和核磁共振数据，证明该化合物为槲皮素–3–O–β–D–葡萄吡喃糖基(2→1)–O–β–D–葡萄吡喃糖苷

(白麻苷)第13页，共24页，2023年，2月20日，星期四流分2的纯度检测及结构鉴定图4：流分2的高效液相色谱图及紫外光谱图通过紫外光谱数据、质谱数据和核磁共振数据，证明该化合物为Kaempferol–7–O–β–D–glucopyranosyl(1→4)–β–D–glucopyranoside(山奈酚–7–O–β–D–吡喃葡萄糖基(1→4)–β–D–吡喃葡萄糖苷)第14页，共24页，2023年，2月20日，星期四流分3的纯度检测及结构鉴定图5：流分3的高效液相色谱图及紫外光谱图

通过紫外光谱数据、质谱数据和核磁共振数据，证明该化合物为芹菜素–7–O–葡萄糖苷(大波斯菊苷)第15页，共24页，2023年，2月20日，星期四流分4的纯度检测及结构鉴定图6：流分4的高效液相色谱图及紫外光谱图通过与对照品进行紫外光谱数据、质谱数据比对，证明该化合物4为大波斯菊苷同分异构体（芹菜素-3-O-半乳糖苷）第16页，共24页，2023年，2月20日，星期四流分5的纯度检测及结构鉴定图7：流分5的高效液相色谱图及紫外光谱图通过与对照品进行紫外光谱数据、质谱数据比对，证明该化合物5为金丝桃苷第17页，共24页，2023年，2月20日，星期四流分6的纯度检测及结构鉴定图8：流分6的高效液相色谱图及紫外光谱图通过紫外光谱数据、质谱数据和核磁共振数据，证明该化合物为槲皮素–3–O–葡萄糖苷(异槲皮素)第18页，共24页，2023年，2月20日，星期四流分7的纯度检测及结构鉴定图9：流分7的高效液相色谱图及紫外光谱图通过与对照品进行液相色谱保留时间、紫外光谱数据和质谱数据进行比对，证明该化合物为香草酸第19页，共24页，2023年，2月20日，星期四流分8的纯度检测及结构鉴定图10：流分8的高效液相色谱图及紫外光谱图通过紫外光谱数据、质谱数据和核磁共振数据，证明该化合物为山奈酚–3–葡萄糖苷(紫云英苷)第20页，共24页，2023年，2月20日，星期四流分9的纯度检测及结构鉴定图11：流分9的高效液相色谱图及紫外光谱图通过对照品的液相色谱保留时间和质谱数据进行比对，证明该化合物为槲皮素第21页，共24页，2023年，2月20日，星期四流分10的纯度检测及结构鉴定图11：流分9的高效液相色谱图及紫外光谱图通过该化合物的质谱数据和核磁共振数据，证明该化合物为谷甾醇–3–O–葡萄糖苷(胡萝卜苷)第22页，共24页，2023年，2月20日，星期四四、结论

以乙酸乙酯―乙腈―水―乙酸为5:3:5:0.05(v:v:v:v)为溶剂系统，应用高速逆流色谱对罗布麻花中的总黄酮进行分离，分离得到了纯度较好的10个有效成分，经高效液相色谱检测，含有7个黄酮类化合物，1个有机酸类化合物和1个苷类化合物，通过对化合物的液相色谱保留时间、紫外光谱数据、质谱数据和核磁共振数据进行比对，确定了分离得到的化合物的种类和结构。

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