![基因定点突变技术_第1页](http://file4.renrendoc.com/view/390658210989ac6a084954efcda207ab/390658210989ac6a084954efcda207ab1.gif)
![基因定点突变技术_第2页](http://file4.renrendoc.com/view/390658210989ac6a084954efcda207ab/390658210989ac6a084954efcda207ab2.gif)
![基因定点突变技术_第3页](http://file4.renrendoc.com/view/390658210989ac6a084954efcda207ab/390658210989ac6a084954efcda207ab3.gif)
![基因定点突变技术_第4页](http://file4.renrendoc.com/view/390658210989ac6a084954efcda207ab/390658210989ac6a084954efcda207ab4.gif)
![基因定点突变技术_第5页](http://file4.renrendoc.com/view/390658210989ac6a084954efcda207ab/390658210989ac6a084954efcda207ab5.gif)
版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
基因定点突变技术现在是1页\一共有16页\编辑于星期三定点突变定点突变是指通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因组,也可以是质粒)中引入所需变化(通常是表征有利方向的变化),包括碱基的添加、删除、点突变等。定点突变能迅速、高效的提高DNA所表达的目的蛋白的性状及表征,是基因研究工作中一种非常有用的手段。现在是2页\一共有16页\编辑于星期三定点突变的目的基因定点的突变是指按照设计的要求,使基因的特定序列发生插入、删除、置换和重排等变异。体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间关系的有力工具。蛋白质的结构决定其功能,对某个已知基因的特定碱基进行定点改变,缺失或者插入,可以改变对应的氨基酸序列和蛋白质结构和功能,改造酶的不同活性或者动力学特性。现在是3页\一共有16页\编辑于星期三寡核苷酸介导的基因突变指用含有突变碱基的寡聚核苷酸片断作为引物,在聚合酶的作用下启动DNA分子进行复制。盒式突变是利用一段人工合成的含基因突变序列的寡核苷酸片段,取代野生型基因中的相应序列。PCR介导的基因突变定点突破的方法现在是4页\一共有16页\编辑于星期三寡核苷酸介导的定点突变寡聚核苷酸定点诱变技术是由加拿大的生物化学家(michaelsmith)发明的.现在是5页\一共有16页\编辑于星期三寡核苷酸定点突变基本原理合成一段寡聚脱氧核糖核苷酸作为引物,使其与带有目的基因完全互补。合成的寡核苷酸引物除短的错配区外,与目的基因完全互补。然后用DNA聚合酶使寡核苷酸引物延伸,完成单链DNA的复制。由此产生的双链DNA,一条链为野生型亲代链,另一条为突变型子代链。将获得的双联分子通过转导入宿主细胞,并筛选出突变体其中基因已被定向修改现在是6页\一共有16页\编辑于星期三现在是7页\一共有16页\编辑于星期三盒式突变1985年Wells提出的一种基因修饰技术—盒式突变。盒式突变:用一段人工合成具有突变序列的DNA片段,取代野生型基因中的相应序列。然而,并非所有变异区附近都能找到合适的限制位点,如果不存在限制位点,就要用寡核苷酸指导的定位诱变引入限制位点。现在是8页\一共有16页\编辑于星期三现在是9页\一共有16页\编辑于星期三PCR介导的定点突变在最初所建立的PCR方法中就可看出只要引物带有错配碱基便可使PCR产物的末端引入突变。但是诱变部分并不总在DNA的中间部分进行诱变。目前采用重组PCR进行定位诱变,可以在DNA片段的任意部位产生定位突变。现在是10页\一共有16页\编辑于星期三重叠延伸的介导的突变现在是11页\一共有16页\编辑于星期三大引物诱导法现在是12页\一共有16页\编辑于星期三定位突变用途定点突变法的应用不仅广泛用于基因工程技术领域,还可用于农业培育抗虫、抗病的良种,用于医学矫正遗传病、治疗癌症等病。定点突变技术的潜在应用领域很广,比如研究蛋白质相互作用位点的结构、改造酶的不同活性或者动力学特性,改造启动子或者DNA作用元件,引入新的酶切位点,提高蛋白的抗原性或者是稳定性、活性、研究蛋白的晶体结构,以及药物研发、基因治疗等等方面。现在是13页\一共有16页\编辑于星期三应用前景不同于定点突变的是基于PCR的随机突变,通过改变PCR条件提高PCR过程中的随机出错,这种方法适用于未知的蛋白质,作全局性分析,所以有人称为饱和突变(saturationmutagenesis)。不过这种方法由于没有目的性,分析操作相当繁琐,并且不会出现一个位点2个以上碱基突变,因而应用上有局限性。定点突变适用于蛋白结构已有初步了解的基因,比PCR随机突变更有目的性,也更为精确,简单,同时改造基因更加“随心所欲”。由于定点突变技术在蛋白质组学中有这非常广泛的应用前景,相信这个技术在不远的将来还会有更大的改进和发展,也必将为更多人熟悉应用。现在是14页\一共有16页\编辑于星期三在分子生物学和基因工程中的应用探明未知序列的结构和功能的关系,如启动子诱变筛选,真核的TATA盒保守序列确定。载体构建:调控元件,强启动子,多接头。研究基因调控序列,如AUG前加入ACC序列最佳。现在是15页\一共有16页\编辑于星期三在蛋白质工程中的应用降低毒性,如TNF改变亚型和种的特异性,如IFN的23位AAG(赖氨酸),AGG(精氨酸),使IFN2a变成IFN2b。123位Try(酪)变甘/丝,使IFN种属特异性明显改变,对人抗病毒活性小于牛。提高活性和稳定性,如IF
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 建设工程施工劳务分包合同范本
- 浙江省杭州市江干区实验中学2024届中考数学五模试卷含解析
- 浙江杭州余杭区2023-2024学年中考数学模拟试卷含解析
- 包干总价施工合同范本哪里有
- 冷冻肉类购销合同书
- 供应商合作协议书版
- 工程项目个人间合作协议书
- 狗狗寄养协议简单版范本
- 农村宅基地协议书模板
- 个人承建工程合同协议
- 房建技术员施工员考试参考题库(含各题型)
- 篮球比赛报名表范本
- 最全 总结X线、CT、MRI的区别
- GSP药品经营企业计算机系统管理内部审核检查表
- 国际结算清华大学出版社
- 保健食品知识培训考核题库与答案
- 初中体育与健康 人教 课标版 七年级 健身长拳 课件
- 天然气汽车加气站项目可行性分析报告
- (完整版)非计划性拔管鱼骨图
- 2022年与业主交房验收交接表
- 运用卓越运营模型助推精益医疗战略落地
评论
0/150
提交评论