天然产物课件第七八章

天然产物课件第七八章第1页，共82页，2023年，2月20日，星期四

第七章甾族化合物一.甾族化合物的结构与命名二.甾族化合物的一些反应与构象的关系三.代表性甾族化合物第2页，共82页，2023年，2月20日，星期四一.甾族化合物的结构与命名

甾族化合物是重要的类脂，它是一类具有环戊烷并多氢菲碳架结构的化合物。广泛存在于动植物体内，具有重要的生理作用，在医药方面得到广泛应用。

第3页，共82页，2023年，2月20日，星期四（一）.甾族化合物的结构一.甾族化合物的结构与命名

环戊烷并多氢菲甾体化合物的基本结构甾族化合物的分子中都含有一个由四个环组成的骨架叫做环戊烷并多氢菲。第4页，共82页，2023年，2月20日，星期四甾族化合物的基本母核为环戊烷稠多氢化菲，一般含有三个支链，其中R1

、R2常为甲基，R3因化合物不同而异。“甾”字下半部的“田”表示具有四个稠合环，“《《《”意味着该四个稠合环上连接着三个侧链甾一.甾族化合物的结构与命名第5页，共82页，2023年，2月20日，星期四

甾体化合物的基本结构

在母核环上的C10和C13上的甲基，称为角甲基，在C17上连有烃基。在基本结构上还连有羟基、羧基、双键等官能团，其数量和位置各异，构成了各种不同类型的甾体化合物。命名甾族化合物的命名相当复杂，通常用与其来源或生理作用有关的俗名。分类根据甾族化合物的存在和化学结构可分为：甾醇、甾族激素、胆汁酸、甾族生物碱等。一.甾族化合物的结构与命名第6页，共82页，2023年，2月20日，星期四第七章甾族化合物一.甾族化合物的结构与命名二.甾族化合物的一些反应与构象的关系三.代表性甾族化合物第7页，共82页，2023年，2月20日，星期四

胆固醇

1.胆固醇胆固醇是因最初由胆结石中得到的一种固体醇而得名。其结构特点是：C3上有1个羟基，C5-C6上有1个双键，C17上有1个八碳原子的烃基。结构式如下：三.代表性甾族化合物第8页，共82页，2023年，2月20日，星期四

胆固醇存在于人和动物的血液、脊髓及脑中。正常人血液中含胆固醇2.82-5.95mmol·L—1。如果人体内的胆固醇代谢发生障碍或饮食摄取胆固醇量太多时，就会从血液中沉淀析出，引起结石或血管硬化。三.代表性甾族化合物生理作用：参与细胞构成、提高免疫力、合成肾上腺皮质激素。第9页，共82页，2023年，2月20日，星期四

7-脱氢胆固醇

7-脱氢胆固醇存在于人体皮肤中，经紫外线照射，B环打开，转变为维生素D3。7-脱氢胆固醇维生素D3三.代表性甾族化合物第10页，共82页，2023年，2月20日，星期四2.麦角甾醇

是一种植物甾醇。存在于麦角（霉菌）中，酵母中含量较多。其结构与7-脱氢胆固醇相似，在C17所连的烃基上多了一个双键和一个甲基，在紫外线照射下，B环也能打开，生成维生素D2。

麦角甾醇维生素D2三.代表性甾族化合物第11页，共82页，2023年，2月20日，星期四

维生素D2、D3都属于D组维生素，是脂溶性维生素，具有抗佝偻病作用，为了防止小孩得佝偻病，软骨病，应经常晒太阳，食用含维生素D的食品，如鱼肝油。牛奶及蛋黄等。三.代表性甾族化合物第12页，共82页，2023年，2月20日，星期四（二）甾族皂素是一类C-27的甾族化合物，主要存在于苜蓿、大豆、绿豆、燕麦中。甾族皂素和水形成亲水胶体，有强的表面活性，能形成稳定的泡沫，可起乳化作用。

甾族皂素是合成性激素、肾上腺皮质激素等药物的原料。三.代表性甾族化合物第13页，共82页，2023年，2月20日，星期四（三）甾体激素

甾体激素按其来源分为性激素和肾上腺皮质激素。1．性激素性激素分为雄性激素和雌性激素两大类。

睾丸酮黄体酮三.代表性甾族化合物第14页，共82页，2023年，2月20日，星期四2．肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素是产生于肾上腺皮质部分的一类激素。现已提取出二十余种固醇类激素，其中七种有较强的生理活性，对体内水、盐、糖和蛋白质的代谢具有重要作用。皮质醇（氢化可的松）皮质酮（可的松）三.代表性甾族化合物第15页，共82页，2023年，2月20日，星期四(四)胆酸胆酸是人和动物胆汁中的一种甾体化合物。其结构特点是：母核无双键，C3、C7、C12、上连有羟基，C17上连有五碳原子的羧酸。其结构如下：

胆汁酸在碱性胆汁中常以钠盐或钾盐的形式存在，称为胆盐。它能使油脂在肠中乳化，易于水解、消化和吸收。

胆酸三.代表性甾族化合物第16页，共82页，2023年，2月20日，星期四胆汁中的胆酸常与甘氨酸（H2NCH2COOH）和牛磺酸（H2NCH2CH2SO3H）结合成甘氨胆酸和牛磺胆酸，这种结合胆酸总称胆汁酸，其结构式如下：

甘氨胆酸牛磺胆酸三.代表性甾族化合物第17页，共82页，2023年，2月20日，星期四甾族化合物结构汇总第18页，共82页，2023年，2月20日，星期四第八章皂苷和强心苷

8.1皂苷8.2强心苷第19页，共82页，2023年，2月20日，星期四8.1皂苷一．皂苷的分类及结构特点二．皂苷的理化性质 三．皂苷的提取与分离四．皂苷的结构鉴定第20页，共82页，2023年，2月20日，星期四

皂苷是一类结构复杂的螺甾烷及其相似生源的甾体化合物及三萜类化合物的低聚糖苷,可溶于水,其水溶液经强烈振摇能产生大量持久性的肥皂样的泡沫。生理活性：

祛痰,镇咳,抗炎,抗疲劳,抗溃疡,抗菌,抗肿瘤,抑制中枢,促进核酸及蛋白质的合成。存在薯蓣科,百合科,五加科,伞形科,豆科,桔梗科,远志科,葫芦科等广泛分布。一．皂苷的分类及结构特点第21页，共82页，2023年，2月20日，星期四

皂苷的分类

皂苷是由皂苷元和糖两部分组成，依据苷元分为两类：甾体皂苷元(中性皂苷)三萜皂苷元(酸性皂苷)糖：有单糖和寡糖(低聚糖)

单糖链皂苷(单皂苷):由一条糖链形成；双糖链皂苷(双皂苷):由两条糖链分别和皂苷元分子中两个不同位置的羟基或羧基结合成酯苷。次皂苷:酯皂苷可被酶、酸、碱水解后的皂苷。一．皂苷的分类及结构特点第22页，共82页，2023年，2月20日，星期四1、甾体皂苷

结构特点:皂苷元由27个碳组成,共有A.B.C.D.E和F六个环.其中E和F以螺缩酮的形式连接,共同组成螺旋甾烷。

螺旋甾烷一．皂苷的分类及结构特点第23页，共82页，2023年，2月20日，星期四

根据碳25的构型将螺甾烷类分为螺甾烷醇类(C25S)25L（绝对构型）,25βF（直立键）,neo。和异螺甾烷醇(C25R)类，25D（绝对构型）,25αF（平伏键）,iso.25R稳定性大于25S。

异螺甾烷醇螺甾烷醇一．皂苷的分类及结构特点第24页，共82页，2023年，2月20日，星期四

组成甾体皂苷的糖种类以D-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖、L-属李糖和阿拉伯糖为主一般在3位成苷，多为寡糖苷。也有分支糖链。

一．皂苷的分类及结构特点第25页，共82页，2023年，2月20日，星期四

1、螺甾烷醇型皂苷：自然界中占绝大多数。分为螺甾烷醇型和异螺甾烷醇型。薯蓣皂苷元是异螺甾烷醇的代表，是合成甾体激素和甾体避孕药的重要原料。约莫皂苷元是螺甾烷醇的代表。

一．皂苷的分类及结构特点第26页，共82页，2023年，2月20日，星期四2、呋甾烷醇型：螺甾烷醇型皂苷的生源前体，称为原皂苷，最大的特征是F环开环，碳22位上多有羟基或甲基取代；碳26上羟基均与葡萄糖成苷。

原菝葜皂苷一．皂苷的分类及结构特点第27页，共82页，2023年，2月20日，星期四

3、变形螺甾烷：F环为呋喃环，碳26羟基与葡萄糖成苷。一．皂苷的分类及结构特点呋甾烷醇型变形螺甾烷螺甾烷第28页，共82页，2023年，2月20日，星期四2、三萜皂苷

含有30个碳原子。苷元分为四环三萜和五环三萜。组成苷的糖常见的有葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖、木糖、夫糖、芹糖以及葡萄糖酸、半乳糖酸等。

（一）四环三萜皂苷：

由A、B、C、D四环30个碳原子组成,与甾醇相似,也具有环戊烷并多氢菲的四环,但在碳4.14上多三个甲基取代,结构中有侧链。甾体皂苷元三萜皂苷元一．皂苷的分类及结构特点第29页，共82页，2023年，2月20日，星期四

1．羊毛脂甾烷(lanostane)型羊毛脂甾烷也叫羊毛脂烷，其结构特点是A/B环、B/C环和C/D环都是反式，C20为R构型，侧链的构型分别为10、13、14、17。羊毛脂甾烷

羊毛脂醇

一．皂苷的分类及结构特点第30页，共82页，2023年，2月20日，星期四2．达玛烷(dammarane)型达玛烷型的结构特点是在8位和10位有-构型的角甲基，13位连有-H，17位的侧链为-构型，C20构型为R或S。达玛烷

一．皂苷的分类及结构特点第31页，共82页，2023年，2月20日，星期四2.五环三萜皂苷a.齐墩果烷型：又称-香树脂烷(-amyrane)型。此类化合物在植物界分布极为广泛，主要分布在豆科、五加科。

其基本碳架是多氢蒎的五环母核，环的构型为A/B反，B/C反，C/D反，D/E顺，C28常有-COOH，有时也在C4位，C3常有羟基，C12、C13位往往有不饱和双键的存在。

齐墩果酸一．皂苷的分类及结构特点第32页，共82页，2023年，2月20日，星期四甘草(Glycyrrhizaurlensis)中含有甘草次酸和甘草酸acid)[又称甘草皂苷或甘草甜素]。甘草次酸有促肾上腺皮质激素(ACTH)样作用，临床上用于抗炎和治疗胃溃疡。一．皂苷的分类及结构特点第33页，共82页，2023年，2月20日，星期四

b、乌苏烷型：又称-香树脂烷(-amyrane)型或熊果烷型。其分子结构与齐墩果烷型不同之处是E环上两个甲基位置不同，即在C19位和C20位上分别各有一个甲基。

乌苏酸(ursolicacid)

又称熊果酸，是乌苏烷型的代表性化合物。一．皂苷的分类及结构特点

齐墩果酸熊果酸第34页，共82页，2023年，2月20日，星期四3．羽扇豆烷(lupane)型

羽扇豆烷型与齐墩果烷型不同点是C21与C19连成五元环,即E环，且D/E环的构型为反式。同时，在E环的19位有-构型的异丙基取代，并有△20（29）双键。一．皂苷的分类及结构特点第35页，共82页，2023年，2月20日，星期四齐墩果烷一．皂苷的分类及结构特点第36页，共82页，2023年，2月20日，星期四8.1皂苷一．皂苷的分类及结构特点二．皂苷的理化性质 三．皂苷的提取与分离四．皂苷的结构鉴定第37页，共82页，2023年，2月20日，星期四1、性状：多为无定型粉末,具有苦和辛辣味,对人体粘膜有刺激性,还具有吸湿性。2、溶解性：极性较大,可溶于水,易溶热水,热甲醇,热乙醇和稀醇,难溶于低极性有机溶剂。正丁醇常作为皂苷的提取溶剂。二．皂苷的理化性质第38页，共82页，2023年，2月20日，星期四3、表面活性（发泡性）

皂苷的水溶液经强烈振摇能产生持久性的泡沫，且不因加热而消失。可借此判断皂苷。蛋白质和黏液质的溶液也产生泡沫，但不持久。甾体皂苷和三萜皂苷的区分：取两只试管，分别加入0.1mol/L盐酸和氢氧化钠溶液和5毫升，各滴加3滴植物提取液，振瑶1分钟，若两管形成泡沫持久相同，说明该植物含三萜皂苷，如碱液管的泡沫较酸液管的泡沫保持的时间长几倍，则证明含有甾体皂苷。

二．皂苷的理化性质第39页，共82页，2023年，2月20日，星期四4、溶血性：

皂苷的水溶液大多能破坏红细胞，产生溶血现象。因此在制备中药注射液时必须考察溶血性。其原因是皂苷与胆甾醇结合生成不溶于水的分子复合物。常用溶血指数来表示（溶血指数:在一定条件下能使血液中红细胞完全溶解的最低溶血浓度）。一般单皂苷的溶血作用明显,双皂苷较弱。5.旋光性：甾体皂苷的旋光性为左旋。二．皂苷的理化性质第40页，共82页，2023年，2月20日，星期四

6、皂苷的水解：

1、酸水解：强烈水解也会发生脱水、环合、双键转移、取代基移位、构型转化；

2、乙酰解；

3、Smith降解；

4、酶解；

5、酯皂苷的水解，可在氢氧化钠水中水解。Smith降解酶解光解土壤微生物培养欲得原始皂苷元二．皂苷的理化性质第41页，共82页，2023年，2月20日，星期四

7、颜色反应：多利用甾体的反应。

1、醋酐-浓硫酸：三萜皂苷显红紫色；甾体皂苷显蓝绿色；三萜皂苷加热到100℃显色。

2、三氯醋酸：甾体皂苷加热到60℃显色。

3、氯仿-浓硫酸：氯仿层显红色或蓝色，硫酸层有绿色荧光。

4、香草醛-硫酸/高氯酸：可做定量。二．皂苷的理化性质第42页，共82页，2023年，2月20日，星期四8.1皂苷一．皂苷的分类及结构特点二．皂苷的理化性质 三．皂苷的提取与分离四．皂苷的结构鉴定第43页，共82页，2023年，2月20日，星期四（一）.提取1.正丁醇萃取法（皂苷提取通法）植物粉末不同浓度乙醇或甲醇浸泡溶液回收溶剂

浸膏加水溶解溶液用石油醚、苯等有机溶剂萃取第44页，共82页，2023年，2月20日，星期四石油醚部位(脂溶性杂质)水部位水饱和的正丁醇萃取正丁醇部位回收溶剂粗制总皂苷水部位（弃去）第45页，共82页，2023年，2月20日，星期四2.溶剂沉淀法：加热冷却或用丙酮、乙醚沉淀；植物粉末石油醚提取非皂苷脂溶性杂质残渣甲醇或乙醇加热提取冷却或加入丙酮、乙醚析出沉淀（粗皂苷）提取液第46页，共82页，2023年，2月20日，星期四

3.碱水提取：对酸性皂苷可用；

4.皂苷元的提取：

（1）在植物组织中将皂苷水解，然后用低极性溶剂提取皂苷元。

（

2）先用极性溶剂如甲醇、乙醇、丁醇将皂苷提出，再加酸加热水解，滤出水解物，然后用低极性溶剂提取皂苷元。三.皂苷的提取与分离第47页，共82页，2023年，2月20日，星期四三.皂苷的提取与分离第48页，共82页，2023年，2月20日，星期四（二）分离

1.分段沉淀

2.色谱分离法(1)吸附色谱法（2）分配色谱法（3）高效液相色谱法(4)大孔吸附树脂法三.皂苷的提取与分离第49页，共82页，2023年，2月20日，星期四3.胆甾醇沉淀法

甾体皂苷可与甾醇形成分子复合物，甾体皂苷的乙醇溶液可被甾醇（常用胆甾醇）沉淀。除胆甾醇外，凡是含有C3位β－OH的甾醇都可与皂苷结合生成难溶性分子复合物。若C3-OH为α构型，或者是当C3-OH被酰化或生成苷键，就不能与皂苷生成难溶性的分子复合物。生成的分子复合物用乙醚回流提取时，胆甾醇可溶于醚，但皂苷不溶，从而达到纯化皂苷和检查是否有皂苷成分的存在。三.皂苷的提取与分离第50页，共82页，2023年，2月20日，星期四8.1皂苷一．皂苷的分类及结构特点二．皂苷的理化性质 三．皂苷的提取与分离四．皂苷的结构鉴定第51页，共82页，2023年，2月20日，星期四四．皂苷的结构鉴定1.紫外光谱UV(nm)

孤立双键205-225900

孤立羰基285500

,-不饱和酮24011000

共轭双键235C14-OH的判断：

307-309nm第52页，共82页，2023年，2月20日，星期四2.IR甾体皂苷元含有螺缩酮结构的侧链，在IR中几乎都能显示出980cm-1(A)、920cm-1(B)、900cm-1(C)、860cm-1(D)附近的四个特征吸收带，且A带最强。在25S型皂苷或皂苷元中，吸收强度B带>C带。在25R皂苷或皂苷元中吸收强度则是B带<C带。因此能借以区别C25位二种立体异构体。第53页，共82页，2023年，2月20日，星期四3.MS

第54页，共82页，2023年，2月20日，星期四8.2强心苷一.强心苷的结构分类二.强心苷的理化性质三.强心苷的提取分离四.强心苷的结构鉴定第55页，共82页，2023年，2月20日，星期四

强心苷（cardiacglycosides）是存在于植物中具有强心作用的甾体苷类化合物，由强心苷元和糖缩合而产生的一类苷。目前临床应用的有二、三十种，用于治疗充血性心力衰竭及节律障碍等心脏疾病，如西地兰、地高辛、毛地黄毒苷等。但强心苷类能兴奋延髓催吐化学感受区而引起恶心、呕吐等胃肠道反应；且有剧毒，若超过安全剂量时，可使心脏中毒而停止跳动。其中某些强心苷对动物肿瘤有效，主要是细胞毒作用。8.2强心苷第56页，共82页，2023年，2月20日，星期四1785年，国外使用洋地黄叶治疗水肿，到现在已从十几个科一百多种植物中发现强心苷类，主要有夹竹桃科、玄参科、萝摩科、卫矛科、百合科、大戟科等等。

较重要的植物有黄花夹竹桃、紫花洋地黄、毛花洋地黄、杠柳、铃蓝、海葱、福寿草、羊角拗等。动物中尚未发现有强心苷类成分，蟾蜍中所含的蟾毒也对心肌有兴奋作用，具强心作用，但其非苷类，而属甾类。第57页，共82页，2023年，2月20日，星期四1.基本结构强心苷是由强心苷元（cardiacaglycone）与糖二部分构成。强心苷元结构特征是甾体母核的C-17位连接一个不饱和内酯环.一.强心苷的结构分类第58页，共82页，2023年，2月20日，星期四2.结构类型根据C17位侧链的不饱和内酯环不同分为：甲型：C17位侧链为五元环的△-内酯乙型：C17位侧链为六元环的△-

-内酯这两类大都是β-构型，个别为α-构型，α-型无强心作用。

一.强心苷的结构分类第59页，共82页，2023年，2月20日，星期四甲型强心苷元：C17位上连五元不饱和内酯环，即△αβ-γ-内酯----强心甾烯型。以强心甾（cardenolide）为母核命名。

一.强心苷的结构分类第60页，共82页，2023年，2月20日，星期四乙型强心苷元

C17位上连六元不饱和内酯环，即△αβ，γδ----双烯-δ-内酯，称为海葱甾二烯或蟾蜍甾二烯。以海葱甾（scillanolide）或蟾蜍甾(bufanolide)为母核命名。

一.强心苷的结构分类第61页，共82页，2023年，2月20日，星期四3.糖部分构成强心苷的糖有20多种，根据C2位上有无-OH分为α-OH（2-OH）糖及α-去氧糖（2-去氧糖）两类。后者主要见于强心苷。1）-羟基糖除广泛分布于植物界的D-葡萄糖、L-鼠李糖外，还有：（1）6-去氧糖如：L-夫糖、D-鸡纳糖等。（2）6-去氧糖甲醚如：L-黄夹糖、D-洋地黄糖等。一.强心苷的结构分类第62页，共82页，2023年，2月20日，星期四2）-去氧糖（1）2,6-二去氧糖如：D-洋地黄毒糖等。（2）2,6-二去氧糖甲醚如：L-夹竹桃糖、

D-加拿大麻糖等。

一.强心苷的结构分类第63页，共82页，2023年，2月20日，星期四4.糖和苷元的连接方式强心苷中，多数是几种糖结合成低聚糖形式再与苷元的C3-OH结合成苷，少数为双糖苷或单糖苷。糖和苷的连接方式有三种：Ⅰ型:苷元-(2,6-去氧糖)X-(D-葡萄糖)YⅡ型:苷元-(6-去氧糖)X-(D-葡萄糖)YⅢ型：苷元-（D-葡萄糖）Y

一般初生苷其末端多为葡萄糖。一.强心苷的结构分类第64页，共82页，2023年，2月20日，星期四8.2强心苷一.强心苷的结构分类二.强心苷的理化性质三.强心苷的提取分离四.强心苷的结构鉴定第65页，共82页，2023年，2月20日，星期四二.强心苷的理化性质1.性状：强心苷多为无色结晶或无定形粉末，中性物质，有旋光性，C17侧链为-构型的味苦，α-构型味不苦，但无效。对粘膜有刺激性。2.溶解性强心苷的溶解性与所连糖的种类和数目有关，一般可溶于水、甲醇、乙醇、丙酮等极性溶剂；难溶于乙醚、苯、石油醚等非极性溶剂。

弱亲脂性苷微溶于氯仿-乙醇(2:1)，亲脂性苷微溶于乙酸乙酯、含水氯仿、氯仿-乙醇（3:1）。第66页，共82页，2023年，2月20日，星期四3.水解反应水解反应是研究强心苷组成的常用方法，分化学方法和生物方法两大类，化学方法主要有酸水解、碱水解和乙酰解；生物方法主要有酶水解。糖部分不同，其水解产物难易及产物均不同。二.强心苷的理化性质第67页，共82页，2023年，2月20日，星期四1）苷键的水解（1）.酸水解A.

温和酸水解：

用稀酸（0.02-0.05mol/L)的盐酸或硫酸在含水醇中经短时间（半小时至数小时）加热回流，可使Ⅰ型强心苷水解成苷元和糖。二.强心苷的理化性质第68页，共82页，2023年，2月20日，星期四B.

强烈酸水解用较浓酸（3%--5%）长时间加热回流或同时加压，可水解Ⅱ型和Ⅲ型强心苷，得到定量的葡萄糖。可水解α-羟基糖。因为α位的羟基阻碍了苷原子的质子化，使水解较困难。

但此法常引起苷元失去1分子或数分子水,形成脱水苷元。

二.强心苷的理化性质第69页，共82页，2023年，2月20日，星期四2.酶水解法含强心苷的植物中，有水解葡萄糖的酶，无水解α-去氧糖的酶，所以能水解除去分子中的葡萄糖而保留α-去氧糖。

蜗牛酶（一种混合酶，蜗牛肠管消化液经处理而得）几乎能水解所有的苷键，能将强心苷分子的糖逐步水解，直至获得苷元，常用来研究强心苷的结构。

紫花洋地黄苷A紫花苷酶洋地黄毒苷+D-葡萄糖二.强心苷的理化性质第70页，共82页，2023年，2月20日，星期四3.碱水解法强心苷的苷键为缩醛结构，可被酸或酶水解，而不被碱水解。碱试剂主要使分子中的酰基水解、内酯环裂开、△20（22）转位及苷元异构化等。二.强心苷的理化性质第71页，共82页，2023年，2月20日，星期四4．显色反应

强心苷颜色反应很多，根据颜色反应发生在分子的不同部位可分为三类：（1）作用于甾体母核的反应：（2）作用于α,β不饱和内酯环的反应：（3）作用于α-去氧糖的反应

二.强心苷的理化性质第72页，共82页，2023年，2月20日，星期四（1）作用于甾体母核的反应：

1.醋酐-浓硫酸反应(Liebermann-burchardrection)

2.氯仿-浓硫酸反应（Salkowski

reaction)

3.三氯化锑或五氯化锑反应（2）作用于α,β不饱和内酯环的反应：

甲型强心苷在碱性醇溶液中，发生双键转移，生成活性亚甲基，故可与活性亚甲基试剂作用而显色。

乙型强心苷无此类反应。

二.强心苷的理化性质第73页，共82页，2023年，2月20日，星期四A.Legal反应（亚硝酰铁氰化钠试剂）：

取样品1-2mg，溶于2-3滴吡啶中，加一滴3%亚硝酰铁氰化钠溶液和一滴2mol/LNaOH溶液，样品液呈深红色并渐渐褪去。

B.Raymond反应（间二硝基苯试剂）：

取样品约1mg，以少量的50%乙醇溶解后加