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文档简介
多克隆抗体的制备眼镜蛇被蛇咬伤患者将免疫原按照一定的免疫程序免疫动物,一定时间后,采集动物血液,分离得到含有抗体的血清。多价抗原多个B细胞克隆(致敏的B细胞)多克隆抗体多克隆抗体(polyclonalantibody,PcAb)免疫原的制备多克隆抗体制备流程免疫原(immunogen):
是能刺激机体免疫系统产生特异性抗体或致敏淋巴细胞的抗原。多克隆抗体制备流程颗粒性抗原的制备:细胞抗原、细菌抗原、寄生虫抗原免疫原的制备绵羊红细胞菌体抗原鞭毛抗原一般无需特殊处理,只需将分离或培养的细胞用生理盐水洗涤去除杂质,制备成悬液即可直接免疫。可溶性抗原的制备:蛋白质(糖蛋白、脂蛋白、酶类、补体和细菌外毒素)核酸多克隆抗体制备流程免疫原的制备载体蛋白半抗原
+载体(蛋白、合成载体)=完全抗原
牛血清白蛋白多聚赖氨酸(多肽、多糖、甾族激素、核苷、某些药物以及其他化学物质等)(最常用)多克隆抗体制备流程免疫原的制备半抗原的制备:免疫佐剂(immunoadjuvant)多克隆抗体制备流程免疫原的制备为了促进抗体的产生,可在注射抗原的同时,加入一种辅助剂增强抗原的免疫原性,这种辅助剂称为免疫佐剂,简称佐剂。佐剂种类多克隆抗体制备流程免疫原的制备免疫动物选择抗原与动物种属之间的关系动物的个体因素抗原的性质与动物种类抗体的用量和要求多克隆抗体制备流程免疫方案的制定免疫原的剂量免疫途径:皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔免疫次数免疫间隔时间:通常首次免疫后3周左右进行加强。多克隆抗体制备流程动物采血颈动脉采血法心脏采血法静脉采血法
摘眼球或剪尾采血法
多克隆抗体制备流程抗血清的分离
采集的血液室温自然凝固,然后置于37度或4度待凝块收缩后收集血清,也可进行低速离心收集上清。
多克隆抗体制备流程抗血清的纯化尽量去除免疫血清中与目的抗体不相关的成分。1.特异性抗体的纯化2.IgG类抗体的纯化多克隆抗体制备流程抗血清的鉴定鉴定:抗体效价、特异性、纯度和亲和力多克隆抗体制备流程抗血清的保存避免高温或极端条件避免反复冻融高浓度保存防腐真空冷冻干燥保存多克隆抗体制备流程总结多克隆抗体制备流程免疫原的制备动物免疫采血分离血清抗血清的纯化、鉴定、保存将免疫原按照一定的免疫程序免疫动物,一定时间后,采集动物血液,分离得到含有抗体的血清。颗粒性抗
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