临床微生物检查课件 第18章-衣原体-11检本

1衣原体(chlamydia)是一类严格在真核细胞内寄生,有独特发育周期,能通过细菌滤器的原核细胞型微生物.2衣原体的共同特征：G－,圆形或椭圆形.具有细胞壁,其组成与G－菌相似.有独特的发育周期,二分裂方式繁殖.含有DNA和RNA两种类型的核酸.对多种抗生素敏感.3分类:根据抗原结构和DNA同源性分为4个种:沙眼衣原体沙眼生物亚种性病淋巴肉芽肿亚种鼠亚种肺炎衣原体鹦鹉热衣原体家畜衣原体4衣原体目衣原体科(Chlamydiaceae)假衣原体科(Parachlamydiaceae)Simkaniaceae科Waddliaceae科衣原体属(Chlamydia)嗜性衣原体属(Chlamydophila)沙眼衣原体(C.trachomatis)猪衣原体(C.suis)鼠衣原体(C.muridarum

)鹦鹉热嗜性衣原体(C.psittaci)肺炎嗜性衣原体(C.pneumoniae)反刍动物嗜性衣原体(C.pecorum)流产嗜性衣原体(C.abortus)猫嗜性衣原体(C.felis)豚鼠嗜性衣原体(C.caviae)Simkania属S.negevensisWaddia属WSU86-1044假衣原体属(Parachlamydia)P.acanthamoebae根据被检株全长16SrRNA和23SrRNA同源性5汤飞凡教授首次采用鸡胚接种于1955年分离出沙眼衣原体,肯定了沙眼的病原体,并且由他创建研究方法被广泛采用,其它衣原体日后陆续被发现.他是迄今为止发现重要病原体,并开辟了一个研究领域的唯一的中国微生物学家.6生物学性状一、生活周期：以两种发育类型存在：原体(elementarybody,EB)：小而致密,球形、卵圆形或梨形、中央有一致密的拟核,有细胞壁,是发育成熟的衣原体,存在于细胞外,具有感染性Giemsa染色呈紫色,Macchiavello染色呈红色.7衣原体Chlamydiapneumoniae梨子形的原体（EBs）,左、吸附在巨噬细胞表面,右、进入细胞内部的原体8网状体(reticulatebody,RB;始体

initialbody,IB)大而疏松,圆形、卵圆形或不规则形,中央呈纤细的网状结构,无致密的拟核,无细胞壁,代谢活泼,以二分裂方式繁殖,不能在细胞外存活,是繁殖型,无感染性.Macchiavello染色呈蓝色；Giemsa染色呈蓝色9衣原体的生活周期101112原体(EB)始体[网状体(RB)]小大有致密的类核结构,有胞壁,发育成熟体大电子致密度较低,无胞壁Giemsa紫色,Macchiavello红色Giemsa,Macchiavello均蓝色高度感染性(有毒性)无感染性(无毒性)无繁殖能力代谢活泼,以二分裂方式繁殖胞外稳定性强胞外稳定性弱1314包涵体是指在易感细胞内含繁殖的始体和子代原体的空泡.发育时期不同,包涵体的形态和大小都有差别.成熟的包涵体含有大量的原体根据包涵体的形态,在细胞内的位置、数目及染色性等对鉴别衣原体有一定意义沙眼衣原体的包涵体内含有丰富的糖原：碘染色(＋).15非淋病性尿道炎分泌物涂片姬姆萨染色油镜10×100见到一个大单核细胞,胞浆内有球形和椭圆形的包涵体-衣原体16二、抗原成分衣原体LPS：属特异性补体结合抗原外膜蛋白：包括属、种、血清型或生物型等的抗原决定簇.17三、抵抗力鹦鹉热衣原体比沙眼衣原体稳定沙眼衣原体感染材料在35～37℃条件下,经48h左右即失去活性,56℃5～6min灭活.对冷冻干燥有耐受(肺炎衣原体在4℃,24h感染性丧失＜50%.不能用甘油保存)红霉素、四环素、强力霉素、利福平对衣原体有抑制作用18临床意义致病机制内毒素样物质：抑制细胞代谢,破坏细胞.主要外膜蛋白与吸附、侵入及阻止吞噬体和溶酶体融合有关Ⅳ型超敏反应.免疫力不强,易造成持续感染和反复感染.19一、沙眼衣原体感染：沙眼生物亚种(14个血清型)专门寄生于人,易感部位是粘膜的鳞柱状上皮细胞血清型A、B、Ba、C：引起沙眼血清型B、Ba、D、Da、E、F、G、H、I、Ia、J、K：包涵体结膜炎和泌尿生殖道感染(性接触传播、非淋菌性泌尿生殖道感染)20感染眼结膜上皮细胞→增殖,包涵体→局部炎症→早期流泪、有粘液脓性分泌物、结膜充血及滤泡增生→后期结膜瘢痕、眼睑内翻、倒睫以及角膜血管翳引起的角膜损害→影响视力或致盲.21性病淋巴肉芽肿亚种(L1、L2、L2a、L34个血清型)——性病淋巴肉芽肿侵犯淋巴组织男性：腹股沟淋巴结化脓性炎症;慢性淋巴肉芽肿.女性：会阴、肛门和直肠形成肠皮肤瘘管.22二、鹦鹉热：分为A、B、C、D、E、F、M56和WC8个血清型和至少9个基因型.养禽业的职业病.存在于鸟类肠道,由粪便排出污染环境,以气溶胶传播,通过呼吸道侵入人体.典型临床表现为非典型性肺炎.23三、肺炎衣原体感染(TWAR,1个血清型)：天然宿主是人.经飞沫或呼吸道分泌物传播.引起急性呼吸道疾病:肺炎,支气管炎,咽炎等;也可引起慢性支气管炎,哮喘等.肺炎衣原体慢性感染可能是冠心病心肌梗塞的重要危险因素.24沙眼衣原体微生物学检查一.标本采集与处理1、眼和泌尿生殖道保证采集到足够的上皮细胞.标本可置运送培养基中送检(含蔗糖、磷酸钾缓冲液、胎牛血清、抗生素等).2、性病淋巴肉芽肿：采集淋巴结脓液淋巴结抽取液活检材料25二、直接检出1、显微镜检查：包涵体,碘染色镜检：参考价值(1)Giemsa染色：原体：紫红色网状体：蓝色26沙眼衣原体包涵体含糖原,被碘液染为棕褐色(与其他衣原体鉴别)27(2)免疫荧光染色：每张标本片上不少于10～20个柱状或鳞状上皮细胞；每个高倍镜视野有2～3个.直接法荧光抗体染色——上皮细胞内典型包涵体抗衣原体LPS单克隆抗体——属特异性抗沙眼衣原体MOMP(外膜蛋白)的单克隆抗体——种、型特异性28292、酶免疫检测(EIA)：检测标本中衣原体可溶性抗原3、核酸检测：核酸探针.PCR(主要扩增16SrRNA、7.5kb质粒、MOMP等基因片段)4、金标快速检测法：标本中衣原体抗原.30三、分离培养与鉴定1、分离培养：(1)细胞培养选择相应敏感的细胞：McCoy细胞；HeLa-229/299细胞.培养方法：盖玻片小瓶法、微量滴定板313233(2)鸡胚培养：鸡胚卵黄囊接种.每日观察至13天.收获卵黄囊膜——Gimenez染色.34

2、鉴定：细胞培养盖玻片Giemsa染色Lugol碘液染色荧光抗体染色鸡胚卵黄囊和小鼠分离材料免疫荧光法鉴定抗原补体结合试验鉴定抗原35四、血清学诊断微量免疫荧光试验(MIF)：主要用于沙眼、性病淋巴肉芽肿及沙眼衣原体引起的眼-生殖道综合征等疾病的诊断.肺炎衣原体感染一.标本采集与处理咽拭子置运送培养基,冷藏送检24h内接种-70℃保存二、直接检出

１．同沙眼衣原体

２．测ＴＷＡＲ株的核酸36三、分离培养与鉴定

1、分离培养：细胞培养选择相应敏感的细胞：HEP-2细胞.2、鉴定：荧光抗体染色四、血清学诊断微量免疫荧光试验3738鹦鹉热衣原体一.标本采集与处理血液：加肉汤或营养液制成10%悬液痰：加含抗生素的肉汤或营养液→用力振摇成乳悬液→室温1～2h→低速离心上清液接种.39二、直接检出1、显微镜检查：Giemsa染色2、测抗原：免疫荧光染色3、核酸检测：40三、分离培养与鉴定1、分离培养：(1)细胞培养选择相应敏感的细胞：FL细胞；BHK细胞.41(2)鸡胚培养：鸡胚卵黄囊接种.每日观察至13天.收获卵黄囊膜——Gimenez染色.(3)小鼠