丙肝抗体检测的困惑与对策

丙肝抗体检测的困惑与对策1第1页，共30页，2023年，2月20日，星期三背景1我国HCV感染以1型为主80%其中以1b型多见64%慢性化率60%-80%肝硬化10%-15%肝细胞癌1%-7%无预防性疫苗2第2页，共30页，2023年，2月20日，星期三背景2最有效治疗方案：聚乙二醇长效a-干扰素（PEG-IFN-a）联合利巴韦林（Ribavirin)持续免疫学应答（SVR）基因1型患者低于50%HCV抗体阳性率随年龄增加而上升男女间无明显差异3第3页，共30页，2023年，2月20日，星期三Nature.Reviews.March2005Volume54第4页，共30页，2023年，2月20日，星期三Nature.Reviews.March2005Volume55第5页，共30页，2023年，2月20日，星期三实验诊断-2004版丙型肝炎防治指南一、常规指标ALTAST白蛋白胆碱酯酶PT二、HCV抗体以EIA法对高危人群筛查免疫功能缺陷、自免病、易假阳性，HCVRNA有助于确诊HCV感染第三代试剂敏感性、特意性高，可不用重组免疫印迹法（RIBA）验证6第6页，共30页，2023年，2月20日，星期三2023/4/2临界值、灰区概念

载自ChinJabMed.July2006Vol29.No.7应结合临床情况，慎重考虑灰区样本的检验结果7第7页，共30页，2023年，2月20日，星期三2023/4/2HCV抗体S/CO比值分布载自ClinicalChemistry49:6940–944(2003)8第8页，共30页，2023年，2月20日，星期三2023/4/2举例：HCV抗体阳性标本做确认实验S/CO比值阴性n(%)不确定n(%)阳性n(%)1.0-4.0(n=98)69(70%)20(20%)9(9%)4.1-8.0(n=31)14(45%)13(42%)4(13%)8.1-12.0(n=32)5(16%)13(41%)14(44%)12.1-20.0(n=63)0(0%)3(5%)60(95%)载自ClinicalChemistry49:6940–944(2003)9第9页，共30页，2023年，2月20日，星期三2023/4/2HCV抗体阳性标本做HCV-RNA检测S/CO比值阳性n(%)阴性n(%)1.0-8.0(n=30)2(11%)28(89%)8.1-20(n=25)0(0%)25(100%)20.1-30(n=29)17(58%)12(42%)30.1-40(n=172)159(92%)13(8%)>40(n=283)261(92%)22(8%)载自ClinicalChemistry49:6940–944(2003)10第10页，共30页，2023年，2月20日，星期三举例11第11页，共30页，2023年，2月20日，星期三JCliniHepatol,January2011,Vol.27,No.112第12页，共30页，2023年，2月20日，星期三JCliniHepatol,January2011,Vol.27,No.113第13页，共30页，2023年，2月20日，星期三

需要HCV检测的规范化流程14第14页，共30页，2023年，2月20日，星期三HCV检测策略因目的而异：诊断疫情监测血液筛查——《丙型肝炎病毒实验室检测技术规范》上报稿15第15页，共30页，2023年，2月20日，星期三筛查试剂样品阴性反应初筛试验阳性反应复检试验均阴性反应一阴一阳均阳性反应补充试验原有试剂双孔或原有试剂加另一种不同原理（或厂家）试剂报告阴性图3HCV临床诊断筛查检测流程以诊断为目的的检测策略

——HCV临床诊断筛查检测流程16第16页，共30页，2023年，2月20日，星期三复检阳性反应样品阳性反应免疫印迹试验阴性反应报告阴性图4HCV直接进行补充试验检测流程可疑核酸检测阳性反应阴性反应报告可疑报告阳性以诊断为目的的检测策略

——HCV直接进行补充试验检测流程17第17页，共30页，2023年，2月20日，星期三复检阳性样品可疑免疫印迹试验阴性反应报告阴性图5HCV“根据试剂S/CO比值”的确证检测流程阳性反应报告阳性报告可疑根据S/CO值判断高S/CO值低S/CO值以诊断为目的的检测策略

——HCV考虑S/Co比值的确证检测流程仅限于试剂给出了特定阈值时使用18第18页，共30页，2023年，2月20日，星期三根据补充试验结果报告抗-HCV检测结果的解释

抗-HCV筛查结果补充试验结果报告解释筛查试验阴性不需检测抗-HCV阴性未感染HCV，除非怀疑最近被感染或存在其它证据提示感染HCV。筛查试验阳性，且S/CO比值高未做抗-HCV阳性可能提示既往感染或现在感染了HCV；未做血清学补充试验。高S/CO比值的样品常被确证为阳性（≥95％），但尚有<5％的样品可能为假阳性；可在患者要求下进行特异性更好的补充试验。筛查试验阳性免疫印迹阳性抗-HCV阳性提示既往感染或现在感染HCV。筛查试验阳性免疫印迹阴性抗-HCV阴性未感染HCV，除非怀疑最近被感染或存在其它证据提示感染HCV。筛查试验阳性免疫印迹可疑抗-HCV可疑不能确定抗-HCV结果及HCV感染状态；应再采集另一份样品（>1个月）重测抗-HCV或HCVRNA。筛查试验阳性NAT阳性抗-HCV阳性HCVRNA阳性提示活动性HCV感染。筛查试验阳性NAT阴性免疫印迹阳性抗-HCV阳性HCVRNA阴性存在抗-HCV，提示既往感染或现在感染HCV；由于某些HCV慢性感染病人的HCVRNA间隙阳性，因此一次HCVRNA阴性结果不能排除活动性感染。筛查试验阳性NAT阴性RIBA阴性抗-HCV阴性HCVRNA阴性未感染HCV。筛查试验阳性NAT阴性RIBA可疑抗-HCV可疑HCVRNA阴性抗-HCV筛查结果可能是假阳性，在这种情况下，提示未感染HCV。19第19页，共30页，2023年，2月20日，星期三样品阴性反应初筛试验阳性反应复检试验阴性反应阳性反应报告阴性筛查试剂（高敏感性）报告阳性筛查试剂（高特异性）图7HCV感染疫情报告检测流程以疫情监测为目的的检测策略20第20页，共30页，2023年，2月20日，星期三另一种抗体筛查试剂或NAT以血液筛查为目的的检测策略样品阳性反应初筛试验阴性反应复检试验阳性反应阴性反应报告阳性待确证抗体筛查试剂报告阴性图6HCV血液筛查检测流程21第21页，共30页，2023年，2月20日，星期三基本原则1对于筛查试验阴性样品，不需要做进一步检测，可报告“抗HCV阴性”对于筛查试验阳性样品，可选择S/CO比值进行补充试验，或非S/CO比值的补充试验22第22页，共30页，2023年，2月20日，星期三基本原则22a高比值，可报告“抗HCV阳性”，不需要做补充试验；低比值，最好做RIBA.此方案适合特定的筛查试剂（已证实高比值>95%补充试验阳性。2b所有筛查试验阳性标本，均进行RIBA；或先作HCVRNA检测，阴性标本再测RIBA23第23页，共30页，2023年，2月20日，星期三丙肝病毒及丙肝抗体试剂11989年美国学者Choo等从感染输血后非甲非乙型肝炎（PT-NonA、NonB）病毒的黑猩猩肝组织中，首次获得病毒的全基因克隆同年，第一代EIA-1实际问世（单一NS4重组抗原，即C100-3）1992年，第二代EIA-2（增加Core和NS3重组抗原）24第24页，共30页，2023年，2月20日，星期三丙肝病毒及丙肝抗体试剂21995年第三代EIA-3出现核心抗原比例降低重新构建NS3和NS4，使抗原活性提高增加NS5抗原，诊断价值仍在探讨缩短检测窗口期（58天）25第25页，共30页，2023年，2月20日，星期三假阳性问题美国CDC报道在HCV低流行率人群，如无偿献血员（低于10%）采用第二代(Abbott)和第三代(Ortho)EIA试剂假阳性率可达30%不能仅凭EIA结果判断HCV感染以RIBA或HCVRNA进行验证26第26页，共30页，2023年，2月20日，星期三造成假阳性原因高IgG血症：高浓度非特异性IgG可吸附到固相载体上或包被的抗原上RF干扰SOD超氧化歧化酶干扰HCV抗原不纯27第27页，共30页，2023年，2月20日，星期三我国情况RIBA试剂昂贵，我国试验室、采血机构目前不做为补充试验假阳性结果引起部分就医者或献血员不必要的心理负担不同试剂盒对弱阳性的检出率不同同一厂家不同批次的试剂，质量有差异我国HCV不同感染率的人群，S/CO阈值数据缺乏（美国主要１a型；中国主要1b型）在我国，S/CO高低不能预示真阳性的可能性大小28第28页，共30页，2023年，2月20日，星期三对策加强与临床沟通，交流HCV检测技术特点