实验三动物组织DNA的提取_第1页
实验三动物组织DNA的提取_第2页
实验三动物组织DNA的提取_第3页
实验三动物组织DNA的提取_第4页
实验三动物组织DNA的提取_第5页
已阅读5页，还剩3页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

实验三动物组织DNA的提取第1页/共8页动物生物化学实验报告

——动物组织DNA的提取

第2页/共8页一．实验目的掌握从动物组织中分离DNA的基本原理和方法。二．基本原理DNA与蛋白质结合成脱氧核糖蛋白，能溶解在纯水或1mol/L的NaCl溶液中，而不溶于有机溶剂。2.在0.1mol/LNaCl溶液中，DNA核蛋白的溶解度最小，仅为在纯水中的1%左右，而RNA核蛋白的溶解度最大；但在1mol/LNaCl溶液中，DNA核蛋白的溶解度却增大，至少是在纯水中的两倍，而RNA核蛋白的溶解度却明显下降。3.分离得到DNA核蛋白后，应进一步十二烷基硫酸钠使蛋白质变性，用含有异戊醇的氯仿除去变性的蛋白质，以得到游离的DNA。4.DNA分子大而长，其水溶液呈粘稠状，可用玻璃棒搅缠起来。为了获得大的DNA分子，在试验中应尽量避免剧烈震荡、用力过猛。第3页/共8页三．实验器材与试剂1.0.15mol/LNaCl-0.015mol/L柠檬酸钠溶液（PH7.0）:称取8.77g氯化钠、4.41g柠檬酸钠，用蒸馏水溶解，调节pH值至7.0稀释至100ml。2.0.15mol/LNaCl-0.1mol/LEDTA-Na2溶液（PH8.0）:称取8.77g氯化钠、37.2gEDTA-Na2溶于800ml蒸馏水中，以0.1mol/L氢氧化钠调至PH8.0，最后定容至1000ml。3.5mol/L氯化钠：称取292.2gNaCl溶于800ml蒸馏水中，最后定容至1000ml。4.5%SDS溶液：称取5gSDS，溶至100ml的45%乙醇中。5.氯仿-异戊醇溶液：按氯仿︓异戊醇=24︓1（V/V）配制。6.95%乙醇，75%乙醇。7.组织捣碎机（或玻璃匀浆器），移液管，离心机，锥形瓶，天平，容量瓶，剪刀。第4页/共8页四、实验步骤1.本实验以鸡或兔的肝脏为材料。实验前动物应饥饿12h以上。2.称取肝脏4g，放在培养皿中，用剪刀剪碎，放入匀浆器研磨，加入6ml，氯化钠-柠檬酸钠缓冲液，装在10ml离心管中。将匀浆物在4000r/min下离心10min。3.将上述沉淀转入50ml大试管中，加入6ml氯化钠-柠檬酸钠缓冲溶液、3ml氯仿-异戊醇混合液，0.5mlSDS使其终浓度为0.41%，手摇15min，然后缓慢加入氯化钠固体（有0.55g），使其终浓度为1mol/L。慢摇5min是氯化钠充分溶解。4.将上述混合液在4000r/min离心15min，取上清液于50ml烧杯中加入等体积冷95%乙醇，边加边用玻璃棒慢慢搅动，将缠绕在玻璃棒的凝胶状物用滤纸吸取多余的乙醇，即得DNA粗品。5.显色反应：取上述反应物2ml加入二苯胺试剂2ml沸水浴加热，观察颜色。第

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课件下载

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论