可溶性糖及淀粉含量的测定

可溶性糖与淀粉测定的依据在高氮水平下，植物前期疯长耗费土壤中库存水，导致灌浆期干物质积累减少，从而产量降低。（McDonald,1989）在高氮水平下，前期分蘖增加，灌浆期小的分蘖竞争营养的能力较弱，导致产量降低。但是灌浆期水分胁迫可以使前期积累的干物质转移效率增加。（Biddingeretal,1977）高氮水平比低氮水平的可溶性糖含量降低，但是干物质转移效率一般比低氮水平下高。灌浆期干旱胁迫导致干物质积累减少,子粒产量的主要来源靠开花前积累的干物质。干物质的表观转移效率不能准确代表开花前干物质对子粒的贡献率。（vanHerwaardenetal，1998）解决的问题2006年灌浆实验中，为什么N0处理下千粒重比N2处理下高。2007年的实验结果表明,旱稻297在高氮下干物质转移效率比在低氮下高,但是其他两个品种在高氮下转移效率反而比在低氮下低，原因何在2007年在W3下，高氮处理为什么比N0下产量低对于旱稻297来说，2007年干物质转移效率比2006年增加，为什么产量还降低了只是表面现象吗植物样品中可溶性糖的测定一、目的通过对植物样品中可溶性糖的测定，初步掌握利用紫外-可见分光光度计进行定量的测定方法和仪器使用技术。二、原理可溶性糖的测定方法有很多，本实验采用蒽酮比色法。在强酸条件下，蒽酮与可溶性糖（包括还原性糖和非还原性糖）作用生成蓝绿色糖醛衍生物，该蓝绿色颜色深浅与含糖量成正比，可在625nm下进行比色测定。三、仪器用具和试剂仪器用具：分光光度计、试管、移液管、离心机等。试剂：蔥酮：100mg蔥酮溶于50mI浓H2S04（化学纯）中，当天配制当天使用。蔗糖标准液（1mg/ml已配制好）：精确称取0.1000g蔗糖（分析纯），在小烧杯中加水溶解，定容至100ml,加口2-3滴浓H2S04，该溶液可长期保存。四、测定方法1．样品处理方法：取干粉末样品~0.1g左右，放入塑料小试管中，加7mI蒸馏水，在沸水浴中煮沸20分钟，取出冷却，3500转/分离心10分钟，取上清，重复提取2次，收集上清，用蒸馏水定容致50ml,作为待测样品，每个样品重复一次。2．标准曲线的配制：准确吸取1mg/ml的蔗糖标准液5ml，加水定容量50ml，得到浓度为ml蔗糖标准液，取6支试管,按下表加入：012345ml蔗糖(ml)0蒸馏水(ml)蔗糖浓度(g/ml)0蔥酮试剂(ml)同时取待测液0~，加蔥酮，在40°C水浴中显色10-15分钟。(注：各管在加入蔥酮试剂时要迅速，加完后用力振荡1-2分钟。)3.Cary分光光度计：打开分光光度计，机器预热5-10分钟：打开计算机，双击Carywin进入Cary软件包主菜单；双击Concentration图标，进入操作界面，单击Setup进行参数设置：仪器参数：分析波长：625nm;狭缝：；丫轴读值：Abs标准曲线参数：浓度单位：|ig/ml;个数：6;浓度值：将计算所得值填入；待测样品参数：个数：5设置完毕，单击0K，退出Setup，当右侧出现红色625nm，则表明仪器已准备好。4．样品测试：将空白加入参比池和样品池，击Setup下方Zer。键，出现提示画面，击0K，测试完成后，可发现左侧吸光值变成0，此步为校准调0。然后击Start键，出现提示加入标样1的画面，因为空白即标样1,因此击0K读数，读数完再击Read键，根据提示，依次测完0-5个标样。标准曲线测试完毕后，仪器会自动显示标准曲线，若标准曲线相关系数＞95%，则仪器认可该标准曲线，会弹出窗口，要求测试样品，操作同上，按Read键即可，若标准曲线相关系数＜95%，则仪器会显示该标准曲线不合格，可通过Recalculate键删除1-2个标准样品，重新校正标准曲线，或者重新配制标准溶液。5.测试完成后，退出Carywin,window95，关分光光度计，关计算机，取出比色皿清洗干净。待测样品中可溶性糖的含量求解公式。可溶性糖的含量（％）二c*v/（a*w*106）*100V：提取液体积；a：测定取用体积；W：质量注：离心机在使用时，样品需要对称放置，如果加样一致，可以省去配平，否则需要进行平衡样品，尤其时高速离心时。使用步骤：开启电源，将转速调至3500转/分（已设置好，不需要调整），按离心下启动键，启动离心机然后按住定时下自动键，当分钟显示为10min时松手，离心机将自动于3500转/分下离心10分钟，离心完成后，按电源键即关机。如果中途想终止离心，按离心下停止键即可。淀粉含量的测定一、试剂：3mol/L盐酸：225mlHCI+775ml水；3mol/INaOH:120gNa0H+1000ml水；葡萄糖标准液：精确称取0.1000g葡萄糖（分析纯），在小烧杯中加水溶解，定容至100ml，加2-3滴浓H2Sq。（该溶液可长期保存）二、步骤：测糖后的离心管中的残渣加入8ml的盐酸，煮沸45分钟，冷却，把残渣转移到50ml容量瓶中,加入8mlNaOH，后定容。（1）取1ml上清液于25m|容量瓶，后定容。（2）取1ml上清液，加入4ml蔥酮，摇匀后在沸水中5分钟，冷却后比色，波长625nm。三、计算：淀粉的含量（％）=c*v*/（a*w*106）*100V：提取液体积；a：测定取用体积；W：质量四、标线的绘制：准确吸取1mg/ml的葡萄糖标准液5ml，加水定容量50ml，得到浓度为ml标准液，取6支试管,按下表加入：012345ml葡萄糖（ml）0蒸馏水（ml）20.80葡萄糖浓度(g/ml)020406080100蔥酮试剂(ml)8预测糖与淀粉样品量：2006年开花期、灌浆中期和成熟期样品，在W1N0、W1N2、W3N0、W3N2四个处理下测定，开花与灌浆中期样品包括穗、茎和叶三部分，成熟期包括茎杆和子粒；2007年样品包括开花与成熟期，测定处理同2006年，样品总量：2NX2WX4ReplicationsX3(stem、leafandspike)X2(floweringandmilkstage)+2NX2WX4ReplicationsX2(shootandspike)(2006)+2NX2WX4ReplicationsX2(shootandspike)X3(3varieties)+2NX2WX4ReplicationsX3(stem、leafandspike)X3(3varieties)(2007)=368测定PMn样品量：2007年样品量：2NX2WX4ReplicationsX2(shootorstemandspikeorleaf)X3(3varieties)X2(PIandmaturitystage)+2NX2WX4ReplicationsX3(stem、leafandspike)X3(3vari